Maintien des Cultures biologiques et mesurer l’Expression des gènes dans l’Aphis nerii: un système Non-modèle pour les Interactions plantes-insectes

Résumé

Le puceron Aphis nerii colonise fortement défendues de plantes de la famille (Apocyanaceae) et offre de nombreuses possibilités pour étudier les interactions plantes-insectes. Nous présentons ici une série de protocoles pour l’entretien des plantes et des pucerons, cultures et la génération et l’analyse de moléculaire et données - omic pour a. nerii.

Résumé

Les pucerons sont excellents modèles expérimentaux pour une variété de questions biologiques allant de l’évolution des symbioses et le développement de polyphenisms aux questions entourant les interactions avec leurs plantes hôtes de l’insecte. Ressources génomiques sont disponibles pour plusieurs espèces de pucerons, et grâce aux progrès dans le séquençage de nouvelle génération, transcriptomique études sont étendus pour les organismes non-modèle qui manquent de génomes. En outre, cultures de pucerons soient collectées sur le terrain et élevés en laboratoire pour l’utilisation dans des expériences organismiques et moléculaires pour combler l’écart entre les études écologiques et génétiques. Enfin, beaucoup de pucerons peuvent être maintenus en laboratoire sur leurs plantes hôtes préférés dans le cycle de vie perpétuel, parthénogénétiques permettant des comparaisons de reproduction asexuée des génotypes. Aphis nerii, le puceron de l’asclépiade-lauriers roses, fournit un tel modèle pour étudier les insectes interactions avec des plantes toxiques à l’aide d’expériences moléculaires et organismiques. Méthodes pour la génération et l’entretien des cultures végétales et puceron dans l’expression différentielle de serre et en laboratoire, extractions d’ADN et d’ARN, l’analyse de microsatellites, Assemblée de transcriptome de novo et annotation, transcriptome l’analyse et la vérification de qPCR de gènes différentiellement exprimés sont décrites et discutées ici.

Introduction

Les pucerons sont de petits insectes hémimétaboles qui colonisent sur des familles de diverses plantes dans le monde entier. Ils sont distinguent par plusieurs caractéristiques, plus notamment leurs cycles de vie complexes impliquant la parthénogénèse cyclique et polyphenisms discrets et leurs symbioses nutritionnelles obligatoires avec endosymbiontes bactérie ou levure qui fournissent des éléments nutritifs manquant à partir leur alimentation d’usine sap¹. Alors que la plupart des pucerons sont des spécialistes de plante hôte, certaines espèces généralistes sont des ravageurs de culture importante, infligeant des dégâts économiques considérabl....

Protocole

1. Cultures de plantes

1. Acheter graines de n’importe quel fournisseur commercial ou recueillir des plantes matures dans le domaine.
   Remarque : Ce protocole est convenable pour la plupart des espèces d’asclépiade disponibles dans le commerce (p. ex., Asclepias incarnata, a. syriaca, a. curassavica, Gomphocarpus physocarpus). Certaines graines peuvent devoir être stratification froide et instructions du fournisseur de semences doivent être vérifié.
2. Plantez les graines dans une terre fine en germination (60 – 70 % fine mousse de tourbe, perlite, vermiculite, calcaire).
   1. Remplissez un bac....

Résultats

Planter des cultures : Les graines prendront environ deux à quatre semaines, selon la saison, pour grossir suffisamment pour être re-pot (Figure 1A). Re-en pot de semis prendra encore deux à quatre semaines pour atteindre une taille optimale pour les cultures de pucerons (Figure 1B).

Cultures de pucerons :

Discussion

Il a longtemps été reconnu que l’aposématiques nerii a. peut apporter un éclairage sur les modèles et les mécanismes de résistance aux défenses de la plante et particulièrement chimique séquestration du^18,37. Un certain nombre de ressources génomiques ont récemment émergé pour a. nerii¹⁰, offrant de nouvelles possibilités pour des études de génomique écologiques et fonctionnels qui utilisent nerii a. comme un mod.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Sun Gro Fafard Germination	Hummert International	10-0952-2
Sun Gro Fafard 3B/ Metro Mix	Hummert International	10-0951-2
2 » x 4 » Pot Standard Rond	Anderson Pots	1503
DreamTaq DNA Polymérase	ThermoFisher Scientific	EP0701
Trizol	ThermoFisher Scientific
SuperScript® ; III Kit de synthèse premier brin	ThermoFisher Scientific	18080051
Power SYBR Green PCR Master Mix	ThermoFisher Scientific	4367659

Mix 15596026