Transfert d’embryon et vitrification d’embryons au stade optimal de l’embryon dans le modèle Rabbit

Résumé

Les techniques de procréation assistée (ARTs) sont en évaluation continue pour améliorer les résultats et réduire les risques associés. Ce manuscrit décrit une procédure de transfert d’embryons mini-invasive avec un protocole de cryoconservation efficace qui permet l’utilisation de lapins comme modèle animal idéal de reproduction humaine.

Résumé

Les techniques de reproduction assistée (art), telles que la culture d’embryons in vitro ou la cryopréservation des embryons, affectent les schémas de développement naturel avec des conséquences périnatales et postnatales. Pour garantir l’innocuité des applications ART, des études sur des modèles animaux sont nécessaires. En outre, dans un dernier temps, les études sur le développement embryonnaire exigent une évaluation de leur capacité à développer des descendants sains à terme. Ici, le transfert d’embryon vers l’utérus est indispensable pour réaliser toute expérience liée aux ARTs.

Le lapin a été utilisé comme organisme modèle pour étudier la reproduction des mammifères depuis plus d’un siècle. En plus de sa proximité phylogénétique avec l’espèce humaine et sa petite taille et son faible coût d’entretien, il a des caractéristiques de reproduction importantes telles que l’ovulation induite, une chronologie du développement embryonnaire précoce semblable à l’homme et une courte gestation qui nous permettent d’étudier facilement les conséquences de l’application ART. De plus, les ARTs (comme l’injection intracytoplasmique de spermatozoïdes, la culture d’embryons ou la cryopréservation) sont appliqués avec une efficacité appropriée chez cette espèce.

En utilisant la technique de transfert d’embryon laparoscopique et le protocole de cryoconservation présenté dans cet article, nous décrivons 1) Comment transférer des embryons par une technique facile, minimalement invasive et 2) un protocole efficace pour le stockage à long terme du lapin d’embryons pour fournir des capacités logistiques flexibles et la capacité de transporter l’échantillon. Les résultats obtenus après le transfert d’embryons de lapins à différents stades de développement indiquent que la morula est le stade idéal pour la récupération et le transfert d’embryons de lapins. Ainsi, un transfert d’embryon oviducte est exigé, justifiant la procédure chirurgicale. En outre, les morulas de lapin sont vitrifiés avec succès et transférés par voie laparoscopique, prouvant l’efficacité des techniques décrites.

Introduction

Dans le but de contourner l’infertilité humaine ou d’améliorer la diffusion du bétail de haute valeur génétique et de préserver les ressources génétiques animales, un ensemble de techniques appelées collectivement les technologies de reproduction assistée, telles que la superovulation, dans la fécondation vitro, la culture embryonnaire ou la cryoconservation ont été développées^1,2. Actuellement, des traitements hormonaux sont donnés pour stimuler les ovaires et produire un grand nombre de follicules ovariens antraux¹. Les ovocytes recueillis à partir de ces follicules peuvent ê....

Protocole

Toutes les procédures expérimentales utilisées dans cette étude ont été effectuées conformément à la directive 2010/63/UE CEE pour les expérimentations animales et examinées et approuvées par le Comité d’éthique pour l’expérimentation des animaux de l’Universitat Politècnica de València, Espagne (code de recherche: 2015/VSC/PEA/00170). XGD, FMJ, MPVC et JSV détiennent un certificat d’autorisation délivré par l’administration gouvernementale valencienne pour expérimenter sur les animaux. XGD est autorisé à superviser in situ le bien-être et le soin des animaux pendant l’expérimentation.

1. transfert d’embryons

1. Préparation d....

Résultats

Le transfert laparoscopique mini-invasif d’embryons frais ou vitrifiés place le lapin parmi les meilleurs animaux modèles pour les études de reproduction. Le tableau 1 présente les résultats de l’HE fraîche à différents stades de développement (figure 4) des embryons transférés. Le taux de survie à la naissance (pourcentage d’embryons ayant entraîné un chiot) a prouvé l’efficacité de la technique laparoscopique décrite dans cet article. Les v.......

Discussion

Depuis le premier cas de naissance en direct documenté d’embryons transférés⁹, cette technique et l’espèce de lapin sont devenues cruciales dans les études de reproduction. En outre, les études de recherche sur les embryons impliquant la manipulation, la production, la cryopréservation, etc. exigent comme dernière étape l’évaluation de la capacité embryonnaire pour générer une progéniture saine à long terme. Par conséquent, la technique de transfert d’embryon est indispensable

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Albumine sérique bovine (BSA)	VWR	332
Chlorhydrate de buprénorphine	Alvet Escartí ;	626	À commander par un vétérinaire agréé.
Buserelin Acétate	Sigma Aldrich	B3303
Savon au digluconate de clorethexidine	Alvet Escartí ;	0265DCCJ500B
Solution de digluconate de clorhexidine	Alvet Escartí ;	0265DCCA500B
CO2	Air Liquide	99921	CO2 N48.
Incubateur CO2	Fisher	scientifique 15385194
Dimethyl Sulfoxide	Sigma Aldrich	W387509
Dulbecco' s solution saline tamponnée au phosphate (DPBS)	Sigma Aldrich	D5773	Sans chlorure de calcium.
Rasoir électrique	Oster Golden A5	078005-140-002
Caméra endoscope	Optomic Spain S.A	OP-714
Trocart endoscope avec valve en silicone	Karl Storz Endoscopia Ibé ; rica S.A.	30114GK	Modèle de trocart léger.
Enrofloxacine	Alvet Escartí ;	9993046	À commander par un vétérinaire agréé.
Aiguille Epicraneal 23G	Alvet Escartí ;	514056353	Des aiguilles plus petites peuvent également être utilisées.
Cathéter épidural	Vygon corporate	187.10
Aiguille péridurale	Vygon corporate	187.10
Ethylene Glycol	Sigma Aldrich	102466-M
Pommade oculaire	Alvet Escartí ;	5273
Chlorhydrate de kétamine	Alvet Escartí ;	184	À commander par un vétérinaire agréé.
Appareil de laparoscopie	Karl Storz Endoscopia Ibé ; rica S.A.	26003 AA	Hopkins® ; Laparoscope, laparoscope à vision droite de 0 mm, longueur de 30 cm, canal de travail de 5 mm.
Source lumineuse	Optomic Spain S.A	Fibrolux 250
Azote liquide	Air Liquide	P1505XXX
Insufflateur mécanique de CO2	Karl Storz Endoscopia Ibé ; rica S.A.	Endoflateur® ;
Meloxicam	Alvet Escartí ;	9993501	À commander par un vétérinaire agréé.
Boîtes de Pétri, 35 mm	Sigma Aldrich	CLS430165-500EA
Pansement plastique (Nobecutan)IBOR	medica	7140028
Paille en plastique 0,25 mL	IMV - technologies	6431
Povidone solution iodure	Alvet Escartí ;	02656DPYS500S
Ciseaux	ROBOZ	RS-5880	N’importe quel petit ciseau droit en acier de qualité chirurgicale ordinaire fera l’affaire.
Tube en silicone pour insufflateur	Karl Storz Endoscopia Ibé ; rica S.A.
Stéréomicroscope	Leica	MZ16F	Il existe des options moins chères telles que Leica MZ8 ou Nikon SMZ-10 ou SMZ-2B, pour n’en nommer que quelques-unes.
Gants stériles	Alvet Escartí ;	087GL010075
Blouse stérile	Alvet Escartí ;
Masque stérile	Alvet Escartí ;	058B15924B
Bouchon de paille	IMV - technologies	6431
Saccharose	Sigma Aldrich	S7903
Seringue, 1 mL	Fisher scientific	11750425
seringue, 5 mL	Fisher scientific	11773313
Sonde urinaire	IMV - technologies	17722
Bain d’eau	RAYPA	BAE-4
Xylazine	Alvet Escartí ;	525225	À commander par un vétérinaire agréé.
Lapins	Universität Politè ; cnica de Valè ; ncia	Ligne A	D’autres lignées maternelles, telles que la ligne V ou la ligne HP, peuvent être utilisées.

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