L’acide hyaluronique basée Hydrogels pour 3-Dimensional Culture de cellules de glioblastome dérivé de Patient

Weikun Xiao; Arshia Ehsanipour; Alireza Sohrabi; Stephanie K. Seidlits

doi:10.3791/58176

Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de méthode

L’acide hyaluronique basée Hydrogels pour 3-Dimensional Culture de cellules de glioblastome dérivé de Patient

12.1K vues

⸱

DOI :

10.3791/58176

⸱

24 août 2018

Weikun Xiao¹ , Arshia Ehsanipour¹ , Alireza Sohrabi¹ , Stephanie K. Seidlits²

¹Department of Bioengineering, University of California, Los Angeles, ²Department of Bioengineering, Jonsson Comprehensive Cancer Center, Broad Stem Cell Research Center, Brain Research Institute, University of California, Los Angeles

Dans cet article

Résumé

Nous présentons ici un protocole pour la culture de cellules de glioblastome dérivé de patient dans les biomatériaux orthogonalement accordable conçu pour imiter la matrice de cerveau en trois dimensions. Cette approche fournit une in vitro, une plate-forme expérimentale qui conserve plusieurs caractéristiques de in vivo glioblastoma cellules généralement perdus dans la culture.

Résumé

Glioblastome (GBM) est le plus courant, encore plus meurtrière, le cancer du système nerveux central. Ces dernières années, de nombreuses études ont mis l’accent sur comment la matrice extracellulaire (MEC) de l’environnement de cerveau unique, comme l’acide hyaluronique (HA), facilite l’invasion et la progression de GBM. Toutefois, la plupart des modèles in vitro culture incluent les cellules GBM en dehors du contexte d’un ECM. Xénogreffes murins de cellules GBM sont utilisés couramment aussi bien. Cependant, in vivo modèles rendent difficile d’isoler les contributions des caractéristiques individuelles du microenvironnement tumoral complexe au comportement de la tumeur. Nous décrivons ici une plateforme de base d’hydrogel, en trois dimensions (3D) culture HA qui permet aux chercheurs de modifier indépendamment rigidité et concentration HA. Poids moléculaire élevé HA et polyéthylène glycol (PEG) comprennent des hydrogels, qui sont réticulés par addition de Michael-type en présence de cellules vivantes. Hydrogel 3D cultures dérivées de patient GBM cellules exposition viabilité et prolifération tarifs comme, ou mieux, lorsque cultivées en standard gliomaspheres. Le système hydrogel permet également l’incorporation des peptides ECM-mimétique d’isoler les effets des interactions cellule-ECM spécifique. Les hydrogels sont optiquement transparents afin que les cellules vivantes peuvent être photographiées sur la culture 3D. Enfin, HA hydrogel cultures sont compatibles avec les techniques habituelles pour les analyses moléculaires et cellulaires, y compris les PCR, Western Blot et cryosectioning suivie par immunofluorescence souillant.

Introduction

Systèmes en trois dimensions (3D) culture récapitulent les interactions entre les cellules et leur matrice extracellulaire environnante (ECM) dans les tissus natifs mieux que leurs deux dimensions (2D) homologues¹^,². Avancées en génie tissulaire ont donné lieu à des plates-formes de culture sophistiquée, 3D qui permettent une enquête contrôlée 1) Comment chimiques et physiques des composants des comportements cellulaires de matrice microenvironnement affect et 2) l’efficacité de nouvelles thérapeutiques stratégies pour un certain nombre de maladies, y compris les cancers². Alors que les....