La découpe et la méthode flottante pour tissus inclus en paraffine pour le sectionnement

Summary

Nous présentons ici un protocole visant à améliorer le sectionnement de la paraffine. Cette méthode combine coupe et flottant à l’aide d’une simple chambre thermostatique pour éviter le processus de transfert requis par la méthode conventionnelle. En conséquence, l’efficacité et le nombre de sections de paraffine intacts ont été grandement améliorées.

Abstract

Découpe des tissus inclus en paraffine est largement utilisé en histologie et pathologie. Toutefois, il est fastidieux. Pour améliorer cette méthode, plusieurs sociétés commerciales ont mis au point des systèmes de transfert de section complexe à l’aide de l’eau liquide. Pour simplifier cette technologie, nous avons créé une méthode simple à l’aide de matériel fait maison qui combine coupe et flottant dans une enceinte thermostatique simple ; par conséquent, les sections automatiquement dans le bain d’eau à la surface de l’eau. L’hippocampe du cerveau de souris adultes, reins de souris adulte, cerveaux embryonnaires de souris et yeux de poisson-zèbre adulte ont été coupés à l’aide de paraffine conventionnelle de sectionnement et de la méthode présentée aux fins de comparaison. L’analyse statistique montre que notre méthode améliorée enregistrés fois et produit des Articles de qualité supérieures. En outre, il est facile pour les opérateurs juniors de paraffine sectionnement d’un spécimen entier en peu de temps.

Introduction

Étude morphologique est importante dans la recherche biologique. Bien que la nouvelle technologie a permis aux chercheurs d’observer leurs cibles directement du tissu entier ou organismes^1,2,3, coupant le spécimen en lames minces, suivie d’une coloration, reste le principal la morphologie tissulaire seule méthode fornot mais aussi protéine ciblant directement dans le tissu. Microscopie optique utilise trois types de section : paraffine, congelé et semi-fines. Bien que cryosectioning est commun pour protéger l’antigénicité des tissus, et la préparation des échantillons est sim....

Protocol

Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvés par le Comité emploi de l’Université de Nanchang et animalier.

1. Assemblez l’équipement et le Microtome

1. Concevoir le paramètre aux exigences (supplémentaire Figure 1).
2. Envoyer le paramètre à une usine locale pour fabriquer les panneaux acryliques.
3. Assembler toutes les pièces dans l’ordre : chloroforme permet de combiner les 7 planches acryliques commerciales dans un réservoir avec un bain section de canal et de l’eau (Figure 1).
   ATTENTION : Chloroforme produit des substances toxiqu....

Results

La méthode améliorée a augmenté le nombre de sections de paraffine intact. Nous avons testé cette nouvelle méthode sur souris adulte tissu hippocampique, reins de souris adultes, cerveaux embryonnaires de souris et yeux de poisson-zèbre. L’eau a été ajoutée au réservoir, et la température de l’eau a été maintenue entre 38,0 ° C à 40,0 ° C. Après une série de préparation les échantillons de tissus, ils étaient sectionnés et par rapport aux coupes classiques. La nouvelle méthode évité la pe.......

Discussion

Pour améliorer la paraffine section morphologie et résoudre le problème de perte de temps au cours de la paraffine conventionnelle de sectionnement, nous avons créé une paraffine meilleure méthode qui combine la coupe et du dépliage de sectionnement. Cette méthode améliorée s’appuie sur des équipements simples qui comprend un canal de section, un bain d’eau et un appareil de chauffage avec un interrupteur de détection de température. Le ruban de la section entre le bain d’eau à travers le canal de la section et se déploi.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Incubateur	Boekel Scientific	133000-2
Ethanol  ;	Sinopharm Chemical Reagent Co., Couvercle	64-17-5
Xylène  ;	Sinopharm Chemical Reagent Co., Couvercle	1330-20-7
Paraplast	Leica	39601006
Module d’enrobage de paraffine chauffée	Leica
Carte
Trichlorométhane	Sinopharm Chemical Reagent Co., Couvercle	67-66-3
Élément chauffant électrique tubulaire (12 V 200 W)
Régulateur de température (12 V 120 W)	Mingsuo	XH-W3002
Microtome rotatif	Leica
	Reliez le canal d’eau avec le porte-couteau microtome
		BA-4025
Eosin  ;	Baso Diagnostics Inc.	BA-4025
Microslide	Sail Marque	7105
Baume neutre	Sinopharm Chemical Reagent Co., Couvercle	10004160
Coverslip  ;	Citoglas	10212424C
Microscope	Carl Zeiss
Acide chlorhydrique	Xilong Chemical	7647-01-0
Bain-marie pour coupes de paraffine	Leica
HistoCore Arcadia C  ;- Plaque froide	Leica
spray répulsif pour paraffine  ;	Thermo Scientific	9990420