Article de méthode

Détermination de la compétence reproduction en confirmant début pubertaire et effectuer un test de fertilité chez des Rats et des souris

DOI :

10.3791/58352

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13 octobre 2018

1Department of Animal Science, Michigan State University

Dans cet article

Résumé

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Beaucoup de traitements et de mutations génétiques incidence sur le calendrier de la maturité sexuelle et la fertilité. Ce protocole décrit une méthode non invasive d’évaluation début pubertaire chez les souris et les rats avant la mise en place d’une étude de fertilité chez des animaux sexuellement matures.

Résumé

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Évaluation de la compétence de reproduction est essentielle pour comprendre l’impact d’un traitement ou de la manipulation génétique sur l’axe de reproduction, également appelé l’axe hypothalamo-hypophyso-gonadique. L’axe de reproduction est un intégrateur de clés d’entrée interne et environnementaux s’adapter à des conditions favorables pour la reproduction, la fertilité. Avant de se lancer dans une étude de fertilité chez des rats et des souris, la maturité sexuelle est évaluée afin d’exclure la possibilité que les phénotypes de reproduction observés sont dus en retard ou absent début pubertaire. Ce protocole décrit une approche non invasive pour évaluer le début pubertaire chez les mâles grâce à la détermination de séparation préputiale et chez les femmes à travers l’orifice vaginal et premier oestrus. Après la confirmation de l’achèvement de la puberté et l’atteinte de la maturité sexuelle, une étude de fertilité peut être lancée. La procédure décrit les conditions de reproduction optimales pour souris et rats, comment mettre en place une étude sur la fertilité et quels sont les paramètres pour évaluer et déterminer si le traitement ou la délétion du gène a un impact sur la fertilité.

Introduction

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La transition à la puberté est nécessaire pour atteindre la maturité sexuelle et génésique compétence. La transition pubertaire et le maintien de la fertilité à l’âge adulte est réglementée par l’axe de reproduction, également appelé l’axe hypothalamo-hypophyso-gonadique (Figure 1). Le moment de déclenchement pubertaire et l’entretien de la fertilité sont étroitement contrôlées par des facteurs internes aussi bien qu’environnementales pour augmenter les chances de survie des parents et la progéniture de1,2. Ce protocole prévoit une approche non invasive pour déterminer le début pu....

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Protocole

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Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvés par le Comité d’utilisation de la Michigan State University et d’institutionnels animalier et menées conformément au Guide pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire.

1. Déterminez le début pubertaire

  1. Suivez les directives institutionnelles pour l’habillement, au minimum, il est nécessaire de porter une blouse propre et gants propres. Toujours manipuler les souris portant des gants propres.
  2. Préparer la zone de travail en plaçant un coussin sur la table.
    1. Placez une cage propre souris avec la grille vers le haut sur le pavé.
    2. Mettre en place....

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Résultats

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Les résultats présentés sont de deux modèles de souris transgéniques différente lorsque la transcription factor boîte homéotique antérieure ventrale 1 (Vax1) a été supprimée dans le corps entier sur un allèle, ici dénommé hétérozygote souris (HET)13, ou Vax1 a été supprimé sous certaines conditions au sein de la GnRH neurones22, ici appelée KO conditionnel (cKO). Avant la mise en place de l’étude de fertilité, il est import.......

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Discussion

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Le bien-être global des souris est essentiel pour un succès de fertilité test21. Lorsque vous effectuez un test de fertilité, il est important de ne vérifier pas physiquement sur les souris tous les jours car cela peut causer un stress. Éviter les changements fréquents de cage, car ce sont aussi stressantes. Changements de la cage se fera idéalement pas plus de 1 à 2 fois par semaine. Exposition à la lumière pendant la période d’obscurité un impact négatif sur la reproduction chez les rongeurs noc.......

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Déclarations de divulgation

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L’auteur n’a rien à divulguer.

Remerciements

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Je remercie les auteurs ayant contribué à le œuvre initiale qui est la base de cette publication. Merci à Aitor Aguirre, Genevieve E. Ryan et Erica L. Schoeller pour aider à préparer le manuscrit. Merci à Jessica Sora Lee et Austin Chin pour l’assistance technique avec le manuscrit. H.M.H. a été pris en charge par Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health & le développement humain de la National Institutes of Health, sous attribution numéro R00HD084759.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Boules de coton stérilesFisher22456885
Protection de surfaceFisher1420637
PosemètreVWR21800-014
Bleu de méthylène  ;Sigma-AldrichM9140
Lames de microscopeGenesee Scientific29-101
Support Optimouse avec cagesAnimalCare systemsC89100
Panier à bouteilles d’eau  ;Systèmes AnimalCareC61011
Couvercles de cage filtrésSystèmes AnimalCareC78210
Optimice Standard FeederSystèmes AnimalCareC40100SG
Porte-cartes de cageSystèmes AnimalCareC43251
Cartes de cageSystèmes AnimalCareM52010
Bouteille AssambleySystèmes AnimalCare
Lit R’Nest NidantThe AndersonsBRN4WSR
1/8" Litière en épis de maïs  ;La souris Andersons8B
Standard chowTeklad7904 (7004)
EchelleVWR10205-004
Bécher en polypropylèneFisher14-955-111F
C79122P

Références

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Schneider, J. E. Energy balance and reproduction. Physiology and Behavior. 81 (2), 289-317 (2004).
  2. Walton, J. C., Weil, Z. M., Nelson, R. J. Influence of photoperiod on hormones, behavior, and immune function. Frontiers Neuroendocrinology. 32 (3), 303-319 (2....

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Mots-clés

S paration pr putialeouverture vaginalelevage de sourislevage de ratsmaturit sexuelletablissement du strusmanipulation animale

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