Les auteurs décrivent le développement d’un modèle de souris SOPK type maigre avec une boulette de dihydrotestostérone afin d’étudier la physiopathologie du SOPK et la progéniture de ces barrages de SOPK-like.
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Article de méthode
Un modèle de souris Hyperandrogenic d’étudier le Syndrome des ovaires polykystiques
Dans cet article
Résumé
Résumé
Hyperandrogénie joue un rôle essentiel dans la fonction de reproduction et le métabolisme chez les femmes et est le signe distinctif du syndrome des ovaires polykystiques. Élaboration d’un modèle de souris de SOPK type maigre qui imite les femmes atteintes de SOPK est cliniquement significative. Dans ce protocole, nous décrivons un tel modèle. En insérant une longueur de 4 mm de pastille de poudre cristal DHT (dihydrotestostérone) (longueur totale de pellet est 8 mm), et remplacer tous les mois, nous sommes en mesure de produire un modèle de souris de SOPK type avec pli de niveaux 2 de DHT sérique plus élevé que les souris ne pas implantés avec DHT (no-DHT). Nous avons observé des dysfonctions métaboliques et reproduction sans changer le poids corporel et la composition corporelle. Bien que présentant un degré élevé de l’infertilité, un petit sous-ensemble de ces souris femelles de type SOPK peut tomber enceinte et leur progéniture montre la puberté retardée et une augmentation de testostérone en tant qu’adultes. Ce modèle de souris maigre SOPK-like est un outil utile pour étudier la physiopathologie du SOPK et la progéniture de ces barrages de SOPK-like.
Introduction
Hyperandrogénie est la marque distinctive du syndrome des ovaires polykystiques (SOPK) selon des critères de NIH et de la société SOPK (AE-SOPK) et de l’excès d’androgènes. Les femmes atteintes de SOPK ont du mal à tomber enceinte et ont augmenté le risque de complications de grossesse1. Même si elles tombent enceintes, leur progéniture femelle aurait une santé résultats2,3. Des modèles animaux ont été développés en utilisant diverses stratégies4,5,6,7,
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Protocole
Nous présentons ici des protocoles détaillés pour une insertion et préparation de boulette DHT et pour tester les reproducteurs et métaboliques. Les souris utilisées dans cette étude ont un fond mixte (C57/B6, CD1, 129Sv) et ont été maintenues avec de la nourriture et eau ad libitum dans un cycle lumière/obscurité de 14/10 h à 24 ° C dans l’animalerie de Broadway Research Building à la Johns Hopkins University School of Médecine. Toutes les procédures ont été approuvées par le Comité de l’emploi et de Johns Hopkins University animalier.
1. Créez le modèle murin de SOPK-like
- Préparation de boulette DHT <....
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Résultats
Sérique de la DHT et test de tolérance au Glucose
Les niveaux de DHT sont mesurées de sérum prélevé par les deux ELISA et par LC-MS selon protocole 1,24 – 1,25 et 2.9, 3.0. Les valeurs absolues DHT sont différents entre la spectrométrie de masse et ELISA, cependant, le pli relative (environ 2 fois) de DHT vs insertion no-DHT est similaire de deux essais et à travers des expériences15,
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Discussion
Hyperandrogénie est une caractéristique essentielle du SOPK. Les niveaux DHT de sérum (deux fois supérieur chez les souris de la DHT que chez les souris no-DHT) utilisés dans le présent protocole sont inférieurs à ceux rapportés par d’autres chercheurs dans des études antérieures et sont étalonnés pour imiter proportionnellement les femmes atteintes de SOPK5,19, 20,21. Contrairement aux autres.......
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Déclarations de divulgation
Rien à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par le National Institutes of Health (subventions R00-HD068130 à S.W.) et le centre de recherches de diabète Baltimore : pilotes et subvention de faisabilité (à S.W.).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Poudre cristalline 5&alpha ;-DHT | Sigma-Aldrich | A8380-1G | |
| Tube Silastic Dow Corning | Fisher Scientific | 11-189-15D | Diamètre intérieur 0,04 po/1 mm x 0,085 po/2,15 mm diamètre extérieur |
| Adhésif médical silicone | Facteur II, InC. | A-100 | |
| Lunettes de protection, blouses de laboratoire, gants et masques. | |||
| 10 et micro ; Pointes de pipette L sans filtre | USA Scientific | 11113700 | |
| Lame de microscope pour frottis | Fisher Scientific | 12-550-003 | |
| Diff Quik pour coloration des cellules | Fisher Scientific | NC9979740 | |
| Lancet | Fisher Scientific | NC9416572 | |
| 3 mL Seringue | Becton, Dickinson and Company (BD), | 30985 | |
| aiguille attachée : 20 G | BD | 305176 | |
| Règle : toute longueur supérieure à 10 cm avec échelle millimétrique. | |||
| Xylazine | Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise | NDC13985-704-10 | 100 mg/mL |
| Chlorhydrate de kétamine | Hospira, Inc | NDC 0409-2051-05 | 100 mg/mL |
| Agrafe chirurgicale | AutoClip® ; Système, outil scientifique fin | 12020-00 | |
| Seringue à insuline | BD | 329461 | 1/2 CC, faible dose Seringue à insuline U-100 |
| Trocar | Innovative Research of America | MP-182 | |
| Microscope | Carl Zeiss Primo Star | 415500-0010-001 | Allemagne |
| Poinçon d’oreille | Fisher Scientific | 13-812-201 | |
| Testostérone rat/souris ELISA kit | IBL | B79174 | |
| DHT Kit ELISA | Alpha Diagnostic International | 1940 | |
| Ultra-glucomètre à une touche | Life Scan, Inc. | ||
| Bandes de test ultra à une touche | Life Scan, Inc. | ||
| Tube Eppendorf | Fisher Scientific | 05-402-18 | |
| Lame de rasoir | Fisher Scientific | 12-640 | |
| Clidox | Fisher Scientific | NC0089321 | |
| coussin chirurgical | Fisher Scientific | 50587953 | Fabricant : Andwin Scientific 56616018 |
| Betadine Solution antiseptique | Walgreens | ||
| 3M Vetbond (cyanoacrylate de n-butyle) | 3M Science. Appliqué à la vie |
Références
- Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome. Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).
- Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. Implicati....
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