Nous décrivons ici 3 modèles de lésion de poisson-zèbre adulte et leur utilisation combinée avec un traitement immunosuppresseur. Nous fournissons des conseils sur l’imagerie de la régénération des tissus et sur la détection de la minéralisation des os qui y sont.
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Article de méthode
Modèles de lésion du poisson-zèbre adulte pour étudier les effets de la Prednisolone dans la régénération de tissu osseux
Dans cet article
Résumé
Résumé
Poisson zèbre sont capables de régénérer des divers organes, y compris les appendices (nageoires) suite à une amputation. Il s’agit de la régénération des os, ce qui repousse dans environ deux semaines après une blessure. En outre, poisson zèbre sont capables de guérir les os rapidement après trépanation du crâne et réparer les fractures qui peuvent être facilement introduits dans les rayons des nageoires osseuses poisson zèbre. Ces tests de blessures représentent des paradigmes expérimentaux faisables pour tester l’effet des médicaments administrés sur la formation rapide d’os. Nous décrivons ici l’utilisation de ces modèles de 3 lésions et leur utilisation combinée avec un traitement aux glucocorticoïdes systémiques, qui exerce des effets inhibiteurs et immunosuppressives osseuse. Nous fournissons un flux de travail sur la façon de préparer un traitement immunosuppresseur chez le poisson zèbre adulte, montrent comment effectuer la nageoire amputation, trépanation de substance OS et fractures de la nageoire et décrire comment l’utilisation des glucocorticoïdes affecte les deux os formant les ostéoblastes et les cellules de la lignée monocyte/macrophage dans le cadre de l’immunité innée dans le tissu osseux.
Introduction
Poisson zèbre représentent un puissant modèle animal pour étudier la maladie et du développement des vertébrés. Cela est dû au fait qu’ils sont des petits animaux qui se reproduisent très bien et que leur génome est entièrement séquencé et ouvert aux manipulations1. D’autres avantages incluent la possibilité d’effectuer une imagerie live continue à différentes étapes, y compris en vivo imagerie du poisson-zèbre adulte2et la capacité d’exécuter des écrans de drogues à haut débit dans les larves de poisson zèbre3. En outre, poisson zèbre possèdent une grande capacité régénératrice dans une ....
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Protocole
Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvées par la Landesdirektion de Dresde (numéros de permis : AZ 24D-9168.11-1/2008-1, 24-9168.11-1/2011-52 AZ, AZ 24-9168.11-1/2013-5, AZ 24-9168.11-1/2013-14, AZ DD24.1-5131/354/87).
1. préparation des matériaux et des Solutions
NOTE : Prednisolone, comme autres glucocorticoïdes, mène à l’immunosuppression. Ainsi, la précaution doit être prise pour prévenir l’infection chez les animaux traités pendant l’expérience. À cette fin, autoclave le verre et « l’eau du poisson » (c.-à-d., l’eau qui sert à élever le poisson-zèbre adulte) avant de commencer l’expérience.<....
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Résultats
Le protocole présenté ici a été utilisé à plusieurs reprises pour induire la formation osseuse rapide au cours de la régénération du poisson-zèbre nageoire et crâne10,11,16. En combinaison avec la méthode présentée de l’administration de prednisolone, études sur les effets de la prednisolone pendant la régénération osseuse peuvent être poursuivis. Par exemple, les études sur la formation osseuse .......
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Discussion
Poisson zèbre sont avérés utiles pour la recherche squelettique à bien des égards. Des mutants sélectionnés reproduisent les aspects des maladies humaines telles que l’ostéogenèse imparfaite ou arthrose23,24,25,26,27, et des larves ainsi que des échelles sont utilisées pour identifier les composés anabolisants osseux en petites molécules écrans
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Cette étude a été financée par une subvention de la centre de régénérative thérapies Dresde (« poisson-zèbre comme un modèle à élucider les mécanismes de la perte osseuse induite par les glucocorticoïdes ») et, en outre, grâce à une subvention de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (Transregio 67, projet 387653785) au FK. Nous sommes très reconnaissants à Jan Kaslin et Avinash Chekuru pour leurs conseils et leur aide sur l’exécution de trépanation du cranienne et fractures dans les rayons des nageoires osseuses. Des expériences ont été conçus, effectués et analysés par KG et FK. FK a écrit le manuscrit. Nous tenons également à remercier Katrin Lambert, Nicole Cudak et ....
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Prednisolone | Sigma-Aldrich | P6004 | |
| Diméthylsulfoxyde (DMSO) | Sigma-Aldrich | D8418 | |
| Ethyl-3-aminobenzoate méthanesulfonate (MS-222) | Sigma-Aldrich | A5040 | |
| Pince émoussée | Aesculap | BD027R | |
| Pince fine | Dumont | 91150-20 | |
| Scalpel | Braun | 5518059 | |
| Agarose | Biozym | 840004 | |
| Aiguille d’injection (0,3 mm x 13 mm) | BD Beckton Dickinson | 30400 | |
| Micro foret | Cell Point Scientific | 67-1000 | distribué e.g. par Harvard Apparatus |
| Meules en acier (0,5 µ ; m diamètre) | Outils Fine Science | 19007-05 | |
| Artemia ssp. | Sanders | 425GR | |
| Pipette Pasteur (plastique, Pastette) | Alpha Labs | LW4111 | |
| Paraformaldéhyde | Sigma-Aldrich | 158127 | |
| Rouge d’alizarine S poudre | Sigma-Aldrich | A5533 | |
| Bleu Alcian 8 GX | Sigma-Aldrich | A5268 | |
| Calcein | Sigma-Aldrich | C0875 | |
| Trypsin | Sigma-Aldrich | T7409 | |
| Stéréomicroscope | Leica | MZ16 FA | avec appareil photo QIMAGING RETIGA-SRV |
| Stéréomicroscope | Olympus | MVX10 | avec appareil photo Olympus DP71 ou DP80 |
Références
- Westerfield, M. The Zebrafish Book. A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). 385, (2000).
- Xu, C., Volkery, S., Siekmann, A. F. Intubation-based anesthesia for long-term time-lapse imaging of adult zebrafish. Nature Protocols.
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Réimpressions et autorisations
