Nous présentons par la présente un protocole pour mesurer au chevet de l'activité endotoxine des échantillons de sang entiers humains. L'analyse d'activité d'endotoxine est un essai simple à exécuter et peut être un biomarqueur utile dans les patients gravement malades présentant le sepsis.
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Article de méthode
Test d'activité d'endotoxine pour la détection de l'endotoxémie de sang entier dans les patients gravement malades
Dans cet article
Résumé
Résumé
Lipopolysaccharide, également connu sous le nom d'endotoxine, est un composant fondamental des bactéries gram-négatives et joue un rôle crucial dans le développement de la septicémie et le choc septique. L'identification précoce d'un processus infectieux qui évolue rapidement vers une maladie grave pourrait entraîner un traitement plus rapide et plus intensif, ce qui pourrait mener à de meilleurs résultats pour les patients. L'analyse de l'activité d'endotoxine (EA) peut être utilisée au chevet comme biomarqueur fiable de l'endotoxémie systémique. La détection des niveaux élevés d'activité d'endotoxine a été à plusieurs reprises montrée pour être associée à une sévérité accrue de la maladie dans les patients présentant le sepsis et le choc septique. L'astodonte est rapide et facile à réaliser. En bref, après l'échantillonnage, un aliquot de sang entier est mélangé avec un anticorps anti-endotoxine et avec ajouté LPS. L'activité d'endotoxine est mesurée comme l'éclatement oxydant relatif des neutrophiles apprêtés tel qu'détecté par chemioluminescence. La production de l'assay est exprimée sur une échelle de 0 (absent) à 1 (maximum) et classée comme « faible » (0,4 unité), « intermédiaire » (0,4 à 0,59 unité) ou « élevée » (0,6 unité). La méthodologie détaillée et la justification de la mise en œuvre de l'analyse de l'EE sont indiquées dans ce manuscrit.
Introduction
Le Lipopolysaccharide (LPS), également connu sous le nom d'endotoxine, est un composant clé de la structure membranaire des bactéries Gram-negative (GN). Il représente environ 10% de la paroi cellulaire, étant vital pour l'intégrité de la membrane externe et l'homéostasie. En outre, il est un activateur puissant du système immunitaire inné hôte1,2.
L'exposition in vitro des cellules innées du système immunitaire au LPS entraîne des changements dans l'expression de plusieurs gènes3. L'administration de très petites quantités de LPS chez des volontaires humains....
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Protocole
Le protocole est réalisé selon les directives institutionnelles relatives à la manipulation des biospécimens humains et suivant les procédures opérationnelles standard actuelles de notre laboratoire clinique. L'utilisation des données d'évaluation de l'évaluation du travail et de l'information clinique sur les patients testés suit les lignes directrices du comité d'éthique de la recherche humaine de notre établissement.
1. Matériel de laboratoire et contenu de kit d'essais
- Conservez le kit EA à 2'8 oC lorsqu'il n'est pas utilisé.
- Chaque test d'EA se compose de 5 différents types de tubes; utiliser chacun d'eux p....
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Résultats
Un homme de 72 ans a été admis au service des urgences (ED) d'un hôpital urbain universitaire. Quelques jours plus tôt, il s'était présenté à son médecin de soins primaires se plaignant de brûlure à la miction. Une thérapie de court-cours avec la phosphomycine orale a été recommandée. Ses antécédents médicaux ont inclus l'hypertension, le diabète simple de type-2 et l'hyperplasie prostatique bénigne. Ses médicaments comprenaient l'enalapril, l'atorvastatine, la tamsulosine et la metformin.......
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Discussion
Le choc septique est encore aujourd'hui associé à une mortalité aussi élevée que 40%, bien que ce taux varie selon les rapports considérés16. La plupart des experts dans le domaine préconisent la nécessité de nouveaux biomarqueurs et de meilleurs biomarqueurs afin d'aiderles cliniciens à établir un diagnostic précoce, à mieux prendre en charge et à pronostiquer les patients atteints d'un choc septique 6.
L'exécution d'un test d'eE ne nécessite pa.......
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Déclarations de divulgation
Estor SpA a couvert le coût de la publication de la revue et des frais de production vidéo. Les auteurs n'ont aucun conflit d'intérêts à divulguer.
Remerciements
Nous remercions Paolo Braganet Lisa Mathiasen, Ph.D., pour leur examen de la méthodologie du protocole d'analyse. Dario Winterton, MD a fourni une aide substantielle pour examiner le manuscrit pour la maîtrise de la langue anglaise.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Kit EAA | Spectral Medical Inc. | EAAST-20 | Package avec 20 tests + 1 contrôle qualité |
| Smart Line TL | Berthold | EAASL | Luminomètre |
| Agitateur d’incubateur | GRANT | ES-20 | Mini-incubateur |
| Vortexer | VWR | 444-2790 | Instrument Vortex |
Références
- Akira, S., Takeda, K. Toll-like receptor signalling. Nature Reviews Immunology. 4 (7), 499-511 (2004).
- Takeda, K. Evolution and integration of innate immune recognition systems: the Toll-like receptors. Journal of Endotoxin Research. 11 (1....
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Réimpressions et autorisations
