Le composant de complément C1q est une molécule pro-inflammatoire fortement exprimée dans le microenvironnement de tissu qui peut interagir avec la matrice extracellulaire. Ici, nous décrivons une méthode pour tester comment C1q lié à l'acide hyaluronique affecte l'adhérence cellulaire.
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Article de méthode
Évaluation de l'interaction entre le complément protéique C1q et l'acide hyaluronique dans la promotion de l'adhérence cellulaire
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
Il a été de plus en plus démontré que le microenvironnement de tumeur joue un rôle actif dans la croissance et la métasse de néoplasia. Par différentes voies, les cellules tumorales peuvent recruter efficacement des cellules stromales, immunitaires et endothéliales en sécrétant des facteurs stimulants, des chimiokines et des cytokines. À leur tour, ces cellules peuvent modifier les propriétés de signalisation du microenvironnement en libérant des signaux favorisant la croissance, des métabolites et des composants de matrice extracellulaire pour soutenir une forte prolifération et la compétence métastatique. Dans ce contexte, nous identifions que le composant complémentaire C1q, fortement exprimé localement par une gamme de tumeurs malignes humaines, en interagissant avec l'acide hyaluronique de matrice extracellulaire, affecte fortement le comportement des cellules primaires isolées de la tumeur humaine Spécimens. Ici, nous décrivons une méthode pour tester comment C1q lié à l'acide hyaluronique (HA) affecte l'adhérence de cellules de tumeur, sous-jacente au fait que les propriétés biologiques des composants principaux de la matrice extracellulaire (dans ce cas HA) peuvent être façonnées par des signaux bioactifs vers la tumeur progression.
Introduction
Le microenvironnement de tumeur (TME) influence le développement et la progression de cancer puisqu'il peut fournir une niche permissive pour la survie, la croissance et l'invasion cellulaires. L'identification de nouveaux acteurs clés dans le TME peut être utile pour la découverte de nouveaux outils moléculaires pour la thérapie ciblée. TME comprend un réseau complexe et dynamique de cellules non malignes, telles que les cellules endothéliales, les fibroblastes et les cellules du système immunitaire, intégrées dans les composants de la matrice extracellulaire environnante (ECM), y compris les collagènes, les laminins, les fibronectines, protéoglycanes et hyaluronans.....
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Protocole
Des échantillons de tissus prélevés sur des patients ont été prélevés après consentement éclairé à la suite de l'approbation des considérations éthiques par le conseil institutionnel de l'hôpital universitaire de Trieste, en Italie.
1. Isolement et culture des cellules tumorales (Jour 1)
- Isoler les cellules du mésothéliome humain à partir de spécimens solides MPM. Hacher finement le tissu à l'aide d'un cutter pour obtenir des fragments d'environ 2-3 mm2 de taille et incuber dans 5 mL de solution de digestion composée de Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS) complétée par 0,5 mM Ca2/Mg2 ,0,5% trypsin....
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Résultats
L'HA est un polysaccharide à poids moléculaire élevé chargé négativement, qui est composé de répéter (1-4) -Acide glucuronique-(1-3)-N-acétyl-D-glucosamine unités de disaccharide (figure 1B)7. L'occurrence de la liaison de L'HA sur la plaque de 96 puits ainsi que l'efficacité de son immobilisation ont été testées en tirant parti de l'HA biotinylated (bio-HA). Différentes concentrations de Bio-HA, allant de 10 g/mL à 1 mg/mL, ont été re.......
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Discussion
Nous décrivons une méthode facile pour étudier comment le composant de complément C1q, interagissant avec l'acide hyaluronique, est capable de moduler le comportement des cellules primaires isolées des tissus tumoraux humains. Les deux HA et C1q sont abondamment présents dans le microenvironnement tissulaire à la fois dans des conditions physiologiques et pathologiques, participant à plusieurs processus biologiques cellulaires. Par exemple, C1q a été montré pour être présent dans le microenvironnement du placenta où il f.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs déclarent que la recherche a été menée en l'absence de relations commerciales ou financières qui pourraient être interprétées comme un conflit d'intérêts potentiel.
Remerciements
Nous remercions Ivan Donati pour la fourniture de HA, Leonardo Amadio, Gabriella Zito (Département de gynécologie de l'IRCCS "Burlo Garofolo", Trieste, Italie) et Andrea Romano (Unité Clinique Opérationnelle d'Anatomie et d'Histologie Pathologique, Hôpital Cattinara, Trieste, Italie ) pour la collecte d'échantillons de tissus. Nous remercions également Nicolo Morosini pour l'aide dans la préparation vidéo et Alex Coppola, la voix. Ce travail a été soutenu par des subventions de l'Institut pour la santé maternelle et infantile, IRCCS "Burlo Garofolo", Trieste, Italie (RC20/16) et Fondazione Cassa di Risparmio Trieste à R.Bulla.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 100&thinsp ; et micro ; m filtre à pores | BD Falcon | 352360 | |
| Solution d’amphotéricine B (fungizone) | Sigma-Aldrich ; | 1397-89-3 | |
| FGF de base | Sciences immunologiques | GRF-15595 | |
| Chlorure de calcium | Sigma-Aldrich ; | C-4901 | |
| Collagénase de type I | Worthington Biochemical Corporation, DBA | MX1D12644 | |
| D-Glucose | Sigma-Aldrich ; | 50-99-7 | |
| DNase I ; | Roche | 10 104 159 001 | |
| EDTA | Sigma-Aldrich ; | 60-00-4 | |
| EGF | Sciences immunologiques | GRF-10544 | |
| FAST DiI | Sondes moléculaires, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific | D7756 | |
| Sérum fœtal bovin | Gibco, ; Thermo Fisher Scientific | 10270-106 | |
| Fibronectine | Roche | 11051407001 | |
| Fiole pour culture cellulaire | Corning | 430639 | Solution de |
| gentamicine | Sigma-Aldrich ; | G1397-10ML | |
| Hank' s Solution saline équilibrée (HBBS) ; | Sigma-Aldrich ; | H6648 | Supplémenté en EDTA, glucose, pénicilline-streptamicine, gentamicine et fongizone |
| Acide hyaluronique de haut poids moléculaire | Cadeau aimable du Prof. Ivan Donati | ||
| Sérum endothélial humain moyen libre ; | Gibco, ; Thermo Fisher Scientific | 11111-044 | Supplémenté en EGF (5&thinsp ; ng/mL), FGF basique (10&thinsp ; ng/mL), et ; 1 % pénicilline&ndash ; streptomycine (Sigma-Aldrich) |
| Chlorure de magnésium | Carlo Erba | 13446-18-9 | |
| Medium 199 avec Hank' s | sel Sigma-Aldrich ; | M7653 | |
| Pénicilline-Streptomycine | Sigma-Aldrich ; | P0781 | |
| Microscopie à intervalle de temps ; | Nikon·s ; | Système d’imagerie BioStation IM-Q | |
| Titertek Multiskan Lecteur ELISA | Flow Labs | ||
| Trypsin | Sigma-Aldrich ; | Réf. T4674 |
Références
- Zamboni, F., Vieira, S., Reis, R. L., Oliveira, J. M., Collins, M. N. The potential of hyaluronic acid in immunoprotection and immunomodulation: Chemistry, processing and function. Progress in Materials Science. 97, 97-122 (2018).
- Lorusso, G., Ruegg, C.
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Réimpressions et autorisations
