Le protocole illustre l’utilisation de l’examen histopathologique et immunohistochimie à profil macrophage folate récepteurs bêta et sa relation avec la cellule immunitaire totale s’infiltrent dans les biopsies de l’artère temporale dans l’artérite à cellules géantes.
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Article de méthode
Une étude Immunohistopathologic pour profiler le Folate récepteurs bêta Macrophage et vasculaire microenvironnement immunitaire dans l’artérite à cellules géantes
Dans cet article
Résumé
Résumé
Artérite à cellules géantes (GCA) est une chronique auto-immune maladie des artères de tailles moyenne à grande qui affecte les personnes âgées. GCA manifestes souffrant d’arthrite et symptômes occlusifs de maux de tête, accident vasculaire cérébral ou de perte de vision. Les macrophages et les lymphocytes T-helper s’infiltrer dans la paroi vasculaire et produisent une réponse pro-inflammatoire qui mènent à une lésion vasculaire et une ischémie. A ce jour, il n’y a aucun biomarqueur de GCA qui peut surveiller la maladie activité et guide de réponse thérapeutique.
Acide folique récepteurs bêta (FRB) est une protéine glycosylphosphatidylinositol ancrée sur les membranes cellulaires et normalement exprimée dans la lignée de myélomonocytaire et dans la majorité des cellules de leucémie myéloïde, ainsi que dans la tumeur et les macrophages synoviaux rhumatoïdes, où son expression est corrélée avec la sévérité de la maladie. La capacité de la FRB pour lier des composés de l’acide folique, acide folique-conjugués et médicaments antifoliques a fait une cible thérapeutiques dans le cancer et la recherche sur les maladies inflammatoires. Ce rapport décrit les méthodes histopathologiques et immunohistochemical utilisés pour évaluer l’expression et la distribution de FRB en ce qui concerne les GCAimmunopathology.
Biopsies de l’artère temporale fixés au formol et inclus en paraffine de GCA et témoins normaux ont été colorées à l’hématoxyline et éosine revue histologie du tissu et identifier les fonctionnalités pathognomoniques. L’immunohistochimie a été utilisé pour détecter l’expression FRB, CD68 et CD3. Une analyse microscopique a été réalisée afin de quantifier le nombre de cellules colorées positivement sur les 10 sections de high-power-champ sélectionnées et leurs emplacements respectifs dans la paroi artérielle.
L’inflammation des Lymphohistiocytes (LH) accompagné de l’hyperplasie intimale et limitante élastique perturbé chez GCA avec aucun trouvé chez les témoins. L’infiltrat LH se composait d’environ 60 % de lymphocytes et 40 % de macrophages. L’expression FRB était restreinte aux macrophages, composée de 31 % de la population totale de macrophage CD68 + et localisée à la média et l’adventice. Aucun FRB a été observée chez les témoins.
Ce protocole a démontré une nette tendance numérique et spatiale du macrophage FRB par rapport au micro-environnement immunitaire vasculaire de GCA.
Introduction
Artérite à cellules géantes (GCA) est une maladie inflammatoire des artères moyennes à grandes, ciblant l’aorte et ses branches et qui touchent les personnes âgées. Il présente avec légère à des complications ischémiques sévères tels que maux de tête, douleur à la mâchoire, une perte de vision, accidents vasculaires cérébraux et les tissus de la gangrène. Le diagnostic est confirmé par les marqueurs de l’inflammation élevées comme la vitesse de sédimentation globulaire (VSG) et un modèle histopathologique distinct sur l’artère temporale biopsie (onglet)1. GCA est la vascularite adulte plus commun, et l’accessibilité de l’artère temporale obtenu....
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Protocole
Toutes les méthodes décrites ont été approuvées par le Conseil d’examen institutionnel Penn State.
1. histopathologique préparation et le traitement après l’obtention de biopsie de l’artère temporale
Remarque : La biopsie de l’artère temporale (onglet) est réalisée sous anesthésie locale et en conditions stériles par un chirurgien. Après l’obtention d’une section artérielle de 3 cm sur le côté plus affecté chirurgicalement, le spécimen est fixé dans du formol immédiatement pendant 24 h, divisé en sections de 3 à 4 mm et incorporé à la paraffine, en faisant attention à l’alignement correct des tissu....
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Résultats
Constatations histopathologiques
H & E les taches en anatomie artérielle normale démontrée de spécimens normaux avec des cellules endothéliales dans l’intima de tunica, cellules musculaires lisses dans les médias de tunica, et une matrice de collagène hétérogènes incluent des fibroblastes et navires feeder appelé vasa vasorum dans l’adventitia tunica. Il n’y a aucun infiltrat inflammatoire identifié. Artères.......
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Discussion
GCA est la vascularite plus courante chez les adultes, et sa caractéristique pathologique illustre une combinaison puissante des lymphocytes de T helper et activé macrophages que l'on retrouve également dans d’autres maladies granulomateuses ou vasculopathies comme la sarcoïdose et Polyangéite granulomateuse2,3. En GCA, l’artère temporale fournit une bonne représentation d’une artère de taille moyenne à grande, et la biopsie TA donne un échantillon non négligeabl.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été rendu possible grâce au soutien du Dr. Douglas Stairs, Marianne Klinger, Ann Benko, la Division de rhumatologie du département de médecine et le moléculaire et histopathologique Core laboratoire, Penn State University College of Medicine, Hershey ' s PA.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Microtome | Reichert-Jung | ||
| lames de microscope unies et givrées et lamelles de recouvrement | Fisher Scientific ; | ||
| Rack vertical | Fisher Scientific ; | ||
| Microscope optique | Olympus BX60 Microscope | ||
| Xylène | |||
| Acétone dans l’eau | Concentrations 100 %, 90 %, 70 % | ||
| saline tamponnée au Tris (TBS) ; | Dako Wash BufferS3006 | ||
| 3 % de peroxyde d’hydrogène dans TBS | |||
| Diaminobenzidine (DAB) | Sigma Fast Tablet set | ||
| Chemical Permount ; Support de montage | Fisher Scientific ; | SP-15-100 | |
| Harleco Gill’s III Hematoxylin | Fiisher Scientific 23-750-019 | ||
| Harleco Eosin Y 1 % Solution mère alcoolique | Fisher Scientific ; | 23-749-977 | |
| 10 mM d’acide citrique monohydraté (pH 6,0) | |||
| Récepteur polyclonal anti-folate de lapin bêta | Manohar Ratnam | optimisé au 1:800 | |
| Souris monoclonale anti-humaine CD68 | Dako ; | M071801 | optimisé au 1:200 |
| Lapin polyclonal anti-CD3 | Agilent Dako | A0452 | optimisé au 1:100 |
| Chèvre polymère anti-lapin/souris Anticorps secondaire | Dako | ||
| Tissu | ; pour commande positive FRB |
Références
- Klippel, J. H., Stone, J. H., White, P. H. Primer on the rheumatic diseases. , Springer Science & Business Media. (2008).
- Weyand, C. M., Goronzy, J. J. Immune mechanisms in medium and large-vessel vasculitis. Nature Reviews Rheumatol. 9 (12), 731-740 (2013).
- Weyand, C. M., Liao, Y. J., Goronzy, J. J.
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Réimpressions et autorisations
