Prélèvement du sperme de qualité différentielle en utilisant la Centrifugation en Gradient de densité

Summary

Dans cet article, nous visons à décrire les performances de la technique de centrifugation en gradient de densité et de son application dans la recherche de la physiologie de sperme.

Abstract

Dans la reproduction sexuée, un gamète mâle ou spermatozoïde fusionne avec un gamète femelle pour parvenir à la fécondation. Toutefois, un grand nombre de spermatozoïdes avec capacité de fertilisation est requises pour interagir avec un gamète femelle pour assurer la fécondation. Par conséquent, la capacité fécondante des spermatozoïdes individuels est critique pour la reproduction réussie. Centrifugation en gradient de densité a été utilisée pendant plusieurs décennies comme une méthode reproductible, rapide, efficace et extrêmement adaptable pour recueillir seulement qualité sperme devant servir à la reproduction assistée. Les protocoles que nous décrit ci-après portent sur l’utilisation de la technique de centrifugation en gradient (PDGC) densité de Percoll discontinue pour isoler les trois populations distinctes de sperme du coq par leur qualité. Nous avons pu recueillir, faible, moyen et haute qualité sperme. Nous décrivons également les protocoles reproductibles qui entraînent déterminant potentiel de fertilité du sperme en évaluant leur viabilité, la mobilité et la pénétrabilité. Collection de spermatozoïdes par leur qualité à l’aide de la technique de PDGC serait utile à avec précision et caractériser complètement sperme avec différentielle fertilité potentielle.

Introduction

Chez les vertébrés, les gamètes mâles subissent une intense pression sélective ; reproduction remise en forme d’un mâle est donc essentiel pour la réalisation de fécondation réussie. Les hommes de toute espèce de vertébrés donnée doivent être en mesure de produire des spermatozoïdes en grande quantité et de qualité suffisante pour répondre aux besoins de fertilisation. Cellules du sperme, avoir une tête de sperme et d’un flagelle, sont des cellules plus polarisées dans le corps. Ils sont également très hétérogènes dans la qualité du sperme (vivant et mort, morphologiquement normal et anormal et immobile, low haut et mobile mobile), qui se révèle à travers la grande va....

Protocol

Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvés par l’animalier institutionnel et utilisation Comité (IACUC) de l’Université de Georgie.

1. laver à l’aide de Centrifugation traditionnel

1. Préparer la solution de tampon phosphate (PBS). Ajouter 8,0 g de NaCl, 0,2 g de KCl, 1,44 g de Na₂HPO₄ et 0,24 g de KH₂PO₄ à 800 mL d’eau distillée (dH₂O). Ajuster le pH à 7,4 avec 0,1 N HCl et porter la solution à 1 L avec dH₂O.
2. Préparer le tampon de la motilité. Ajouter 6,5 g de NaCl, 4,5 g de glucose, 0,444 g de CaCl₂ et 11,5 g de N - tris-[hydroxyméthyl] a....

Results

La technique PDGC a été nette séparation de trois couches de sperme par degré de qualité à travers tous les paramètres. Spermatozoïdes se sépare en une couche de qualité inférieure à la solution de densité plus élevée, une couche de qualité moyenne entre le supérieur et solution de densité plus faible et une couche de faible qualité au-dessus de la solution de densité plus faible. Ces différences de qualité sont mis en évidence de différences évidentes dans la viabilité (

Discussion

Fécondité non seulement détermine la rentabilité de la production animale, mais agit également comme un moyen de sélection naturelle des espèces pour l’existence. La fonction ultime d’un spermatozoïde doit féconder un ovule. L’oviducte de la femelle choisit seulement ces spermatozoïdes plus forts afin d’assurer la fécondation de l’ovule^23,24. Des études in vitro ont révélé également une étroite corrélation entre les caractéristiques qualitatives de sperm.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Accudenz	Accurate Chemical and Scientific Corporation, Westbury, NY, États-Unis	AN7050
Percoll  ;	Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, États-Unis	P7828
Schiff' s	réactif Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, États-Unis	3952016
TES	Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, États-Unis	T1375
Eosin Y	Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, États-Unis	E4009
Nigrosin	Sigma-Aldrich, Corp., St. Louis, MO, États-Unis	198285
Centrifugeuse ST 40R.	Thermo Scientific, Waltham, MA, États-Unis	75004524
DU 530 Life Sciences Spectrophotomètre UV/Vis	Beckman Coulter, Brea, CA, USA		Aucun catalogue n’a été trouvé
Olympus IX 71 Microscope à fluorescence inversée et à contraste de phase	Olympus America Inc., PA, USA		Aucun catalogue n’a été trouvé