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Article de méthode

Une Nanoémulsion Tripeptide-stabilisé de l’acide oléique

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DOI :

10.3791/59034

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27 février 2019

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1Department of Chemistry, Brooklyn College, The City University of New York, 2Ph.D. Program in Chemistry, The Graduate Center of The City University of New York, 3Ph.D. Program in Biochemistry, The Graduate Center of The City University of New York, 4Department of Genetics and Genomic Sciences, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 5Women's Health Research Institute, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 6Laboratory for Translational Research, Western Connecticut Health Network

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit une méthode efficace pour synthétiser une nanoémulsion d’un conjugué de la teneur en acide oléique acids-platinum(II) stabilisé avec un tripeptide lysine-tyrosine-phénylalanine (KYF). Les formes nanoémulsion dans des conditions douces synthétiques par auto-assemblage de la KYF et le conjugué.

Résumé

Les auteurs décrivent une méthode pour produire une nanoémulsion composée d’un noyau de acids-Pt(II) en acide oléique et d’un revêtement (KYF) de lysine-tyrosine-phénylalanine (KYF-Pt-NE). La KYF-Pt-NE encapsule pt (ii) à 10 % m/m, a un diamètre de 107 ± 27 nm et une charge négative de la surface. La KYF-Pt-NE est stable dans l’eau et dans le sérum et est biologiquement active. La conjugaison d’un fluorophore à KYF permet la synthèse d’une nanoémulsion fluorescente qui convient pour l’imagerie biologique. La synthèse de la nanoémulsion s’effectue dans un environnement aqueux et les formes de KYF-Pt-NE par auto-assemblage d’un peptide KYF court et un conjugué de acids-platinum(II) en acide oléique. Le processus d’auto-assemblage dépend de la température de la solution, le rapport molaire des substrats et la vitesse d’écoulement de l’addition du substrat. Étapes cruciales incluent maintenant le taux d’agitation optimal pendant la synthèse, permettant un délai suffisant pour l’auto-assemblage et pré concentre la nanoémulsion progressivement dans un concentrateur centrifuge.

Introduction

Ces dernières années, il y a eu un intérêt croissant pour l’ingénierie des nanoparticules pour des applications biomédicales comme medicaments et bioimaging1,2,3,4. La multifonctionnalité des systèmes à base de nanoparticules nécessite souvent incorporant plusieurs composants dans une formulation. Les blocs de construction qui reposent souvent sur des lipides ou des polymères se distinguent par leurs propriétés physico-chimiques ainsi que leur biocompatibilité et biodégradabilité, qui finalement pourrait affecter la fonction de la nanostructure1, 5,6. Des matériaux biologiques, tels que des protéines et des peptides, ont longtemps été reconnus comme éléments prometteurs de nanostructures multifonctionnel en raison de leur séquence flexibilité7,8. Peptides s’auto-assembler en ordonnées architectures supramoléculaires formant hélicoïdale rubans9,10, échafaudages fibreuse11,12et bien d’autres encore, ouvrant ainsi la voie au renforcement des nanostructures hybrides axée sur la biomolécule utilisant un ascendant approche13.

Peptides ont été explorées pour des applications en médecine et en biotechnologie, en particulier pour la thérapie anticancéreuse14 et maladies cardiovasculaires15 aussi bien en ce qui concerne les antibiotiques développement16,17, métabolique troubles18et les infections19. Il y a plus d’une centaine de petit-peptide thérapeutique, l’objet d’essais cliniques20. Les peptides sont faciles à modifier et rapide à synthétiser à petit prix. En outre, ils sont biodégradables, ce qui facilite grandement leur applications biologiques et pharmaceutiques21,22. L’utilisation de peptides comme éléments structuraux comprend l’ingénierie des nanoparticules peptidique, rompus et des dépôts d’hydrogel pour Liberation controlee23,24,25,26 , 27, biocapteurs à base de peptides28,29,30,31ou des dispositifs bio-électroniques32,33,34. Ce qui est important, même petits peptides avec deux ou trois résidus d’acide aminé qui incluent la phénylalanine trouvées pour guider l’auto-assemblage traite35,36,37 et créer des émulsions stabilisées38 .

Médicaments à base de platine, en raison de leur grande efficacité, sont utilisés dans de nombreux régimes de traitement du cancer, aussi bien seul ou en combinaison avec d’autres agents39,40. Composés de platine induisent des lésions de l’ADN en formant des liaisons transversales des monotypes et système ou interstrand. Les lésions de l’ADN-Pt sont reconnues par la machinerie cellulaire et, si ne pas réparés, conduisent à l’apoptose cellulaire. Le plus important mécanisme, par lequel pt (ii) contribue à la mort des cellules cancéreuses, est l’inhibition de l’ADN transcription41,,42. Toutefois, les avantages de la thérapie de platine sont diminués par une toxicité systémique du PT (ii) qui déclenche des effets secondaires graves. Ceci mène à plus faible dosage clinique de PT (ii)43, qui aboutit souvent à des concentrations sous thérapeutiques du platine pour atteindre l’ADN. En conséquence, la réparation de l’ADN qui suit contribue à la survie des cellules du cancer et l’acquisition de résistance pt (ii). La chimio-résistance de platine est un problème majeur dans la thérapie anticancéreuse et la principale cause d’échec de traitement44,45.

Nous avons développé une conception stable qui encapsule l’agent pt (ii) afin de fournir un effet protecteur dans la circulation systémique et pour diminuer les effets secondaires induits par Pt II. Le système est basé sur un noyau de acids-Pt(II) en acide oléique stabilisé avec un tripeptide KYF pour former une nanoémulsion (KYF-Pt-NE)46. Les éléments constitutifs de la KYF-Pt-NE, les acides aminés de tripeptide ainsi que l’acide oléique, ont le statut de Generally Recognized As Safe (GRAS) avec la Food and Drug Administration (FDA). La KYF-Pt-N’est préparé à l’aide d’une méthode de nanoprécipitation47. En bref, le conjugué de acids-Pt(II) en acide oléique est dissous dans un solvant organique et ensuite ajouté goutte à goutte d’une solution aqueuse de KYF (Figure 1) à 37 ° C. La solution est agitée pendant plusieurs heures pour permettre à l’auto-assemblage de la la KYF-Pt-NE. La nanoémulsion est concentrée dans 10 kDa centrifuge concentrateurs et laver trois fois avec de l’eau. La modification chimique de la KYF avec un fluorophore permet la synthèse de fluorescent FITC-KYF-Pt-NE convient d’imagerie biomédicale.

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Protocole

1. synthèse de la teneur en acide oléique Acids–Platinum(II) conjugué

  1. Activation du cisplatine
    1. Suspendre 50 mg (0,167 mmol) de cisplatine dans 4 mL d’eau (p. ex., nanopure) à 60 ° C.
    2. Ajouter goutte à goutte 55,2 mg (0.325 mmol) de AgNO3 dans 0,5 mL d’eau à la solution de cisplatine et de remuer la réaction pendant au moins 2 h à 60 ° C. Le précipité blanc de AgCl formera indiquant l’état d’avancement de la réaction.
    3. Pour déterminer si la réaction d’activation est terminée, effectuez le test avec 10 % HCl pour la présence d’ions Ag+ libres en solution. Le critère devrait être négatif (aucun précipité d’AgCl supplémentaire ne devrait former).
    4. Centrifuger le mélange réactionnel à 3 220 x g pendant 10 min et enlever le précipité blanc de AgCl.
    5. Récupérer le surnageant et filtrez-le via un filtre de seringue 0,2 mm. Tester le surnageant pour la présence de platine en appliquant 2 à 3 gouttes de la solution par l’intermédiaire de pipette Pasteur à SnCl2 cristaux. Le test est positif si la couleur du complexe coordonnée d’étain avec platinum jaune/orange foncé.
    6. Utiliser le liquide surnageant avec PT (ii) activés pour la deuxième étape.
  2. Réaction de l’acide oléique avec activés pt (ii)
    1. Suspendre 94,2 mg d’acide oléique (0.333 mmol) dans 3 mL d’eau à 60 ° C.
    2. Ajouter 13,3 mg (0.333 mmol) de NaOH dans 1 mL d’eau et mélanger avec la solution d’activés pt (ii) de l’étape 1.1
    3. Remuer la réaction pendant 2 h à 60 ° C et ensuite à température ambiante pendant la nuit. Le produit brut est un précipité brun/jaune huileux.
    4. Centrifuger le mélange réactionnel à 3 220 x g pendant 10 min et enlever le surnageant. Sécher le produit brut à 25 ° C à l’aide d’un évaporateur rotatif. Purifier le produit par plusieurs lavages avec de l’acétonitrile. La couleur finale de acids–Pt(II) en acide oléique pure conjugué est jaune pâle.

2. synthèse de la KYF-Pt-NE et le FITC marqués Nanoémulsion FITC-KYF-Pt-NE

  1. Synthèse du tripeptide KYF et le tripeptide fluorescent étiqueté FITC-KYF
    1. Synthétiser la KYF en utilisant la chimie des peptides à semi-conducteurs standard. Utiliser la norme suivante conditions de couplage pour fixer chaque acide aminé : Wang résine (2,19 mmol), d’acides aminés Fmoc protégé (4.38 mmol), tétrafluoroborate de 2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium (TBTU) (4.38 mmol) et diisopropyléthylamine (DIPEA) (8,76 mmol). Dissoudre les acides aminés avec TBTU dans le diméthylformamide (DMF) et DIPEA.
    2. Faire tremper de 5,7 g de résine d’alcool Fmoc-L-Phe 4-alkoxybenzyl (0,382 meq/g) dans 25 mL de DMF pour 1 h avant son utilisation.
    3. Déprotéger le groupe amine de l’acide aminé L-phénylalanine avec 15 mL de solution de pipéridine/DMF de 20 % pendant 5 min, jeter le solvant et répéter le lavage avec cycle de 20 min.
    4. Laver la résine pendant 1 min avec les solvants suivants : DMF, alcool isopropylique (IPA), IPA, DMF, IPA, DMF, DMF, DMF. Éliminer le solvant après chaque lavage.
    5. Effectuer le test de Kaiser pour déterminer la présence du groupe de2 NH gratuit sur la résine (voir sous-étapes) et si positif (la graine de résine est violette), ajouter de l’acide aminé Fmoc-L-tyrosine et effectuer l’accouplement pendant la nuit.
      1. Préparer les solutions de test dans des flacons séparés Kaiser.
      2. Dissoudre 5 g de ninhydrine dans 100 mL d’éthanol.
      3. Dissoudre les 80 g de phénol dans 20 mL d’éthanol.
      4. Mélanger 2 mL de solution aqueuse de 0,001 M de cyanure de potassium avec
        98 mL de pyridine.
      5. Ajouter 2-3 gouttes de chaque Kaiser tester des solutions d’échantillon et de la chaleur dans l’eau bouillante pendant 5 min.
    6. Sur le couplage réussi du second acide aminé, effectuer le test de Kaiser et si négatif procéder avec protocole de déprotection (étapes 2.1.3 à 2.1.5). Répétez le processus avec l’acide aminé phénylalanine-Fmoc.
      1. Sur le couplage de tous les acides aminés, laver la résine pendant 1 min avec 5 mL de DMF, IPA, DMF, méthanol, dichlorométhane et l’éther diéthylique, après chaque lavage jeter le solvant. Économiser la résine pour un traitement ultérieur.
      2. Utiliser la moitié de la résine pour les prochaines étapes (2.1.7-2.1.9) pour modifier le peptide avec FITC. Pour obtenir la non modifiés KYF tripeptide, suivez la procédure à partir de 2.1.10.
    7. Modifier l’acide aminé N-terminal de la KYF KYF-N3 avec de l’acide 6-azidohexanoic. À cette fin, mélanger 1 g (0,382 mmol) de résine KYF Wang et 120,1 mg (0.764 mmol) de l’acide 6-azidohexanoic avec 245,2 mg (0.764 mmol) de TBTU et 197,1 mg (1.528 mmol) de DIPEA dans 30 mL de DMF. Remuer la réaction du jour au lendemain à la température ambiante.
    8. Obtenir la KYF-FITC de la synthèse de la KYF-N3 à la fluorescéine propargylique via une réaction de clic. À cette fin, se mêlent 253 mg (0,097 mmol) de la KYF-N3 Wang résine 3,78 mg (0,019 mmol) de CuI solide, 71,9 mg (0,193 mmol) de fluorescéine propargylique et 2,24 mg (0.017 mmol) de DIPEA. La réaction doit changer de couleur du vert au brun.
    9. Après 24h, laver trois fois la résine pendant 1 min en alternant avec 5 mL de DMF et IPA cinq fois, le méthanol et l’eau trois fois, DMF et l’eau trois fois et avec le dichlorométhane et éther diéthylique. Éliminer le solvant après chaque lavage.
    10. Fendre la KYF-FITC ou peptide KYF de la résine avec une solution d’acide trifluoroacétique (TFA) / triisopropylsilane (conseils) / h2O le rapport de 95/2.5/2.5 plus de 3 heures.
    11. Précipiter le peptide brut dans un froid l’éther diéthylique, laver trois fois avec de l’éther froid et sec puis sous le vide.
  2. Synthèse de nanoémulsion FITC-KYF-stabilisé avec PT (ii) (FITC-KYF-Pt-NE) et KYF-Pt-NE
    1. Dissoudre 10 mg (0.0126 mmol) de acids–Pt(II) en acide oléique conjugué dans 1,5 mL d’isopropanol et place dans une seringue de 5 mL.
    2. Placer la seringue avec la teneur en acide oléique acids–Pt(II) conjugué dans un pousse-seringue et régler le débit à 0,1 mL/min.
    3. Pour synthétiser le FITC-KYF-Pt-NE, dissoudre 1 mg (0.00105 mmol) de FITC-KYF et 1 mg (0.00219 mmol) de KYF (rapport molaire de 1:2 de FITC-KYF:KYF) dans 20 mL d’eau et régler la température de la solution à 37 ° C. Couvrir les parois du récipient avec du papier aluminium pour éviter le Photoblanchiment du fluorophore FITC. Pour synthétiser la KYF-Pt-NE, dissoudre 2 mg (0,0044 mmol) de tripeptide KYF dans 20 mL d’eau et régler la température de la solution à 37 ° C.
    4. Ajouter le conjugué de la teneur en acide oléique acids–Pt(II) goutte à la solution du tripeptide FITC-KYF/KYF ou KYF. Effectuez cette étape sous le capot.
    5. Agiter la solution du jour au lendemain à la température ambiante pour évaporer les solvants organiques et permettre l’auto-assemblage de FITC-KYF-Pt-NE ou KYF-Pt-né
    6. Concentrer le FITC-KYF-Pt-NE ou KYF-Pt-NE dans un concentrateur centrifuge (10k MWCO) et se laver trois fois avec 4 mL de l’eau nanopure.
    7. Stocker les solutions aqueuses de KYF-Pt-NE et FITC-KYF-Pt-NE à 4 ° C.
    8. Analyser pour platine contenu à l’aide de la spectroscopie d’absorption atomique (AAS), suivant guide48 les directives du fabricant.
      1. Élaborer des normes platine dans HCl 10 % pour la courbe d’étalonnage (efficace pour AAS se situe entre 100 à 1 200 ppb (parties par milliard)).
      2. Dissoudre 50 µL de solution de KYF-Pt-NE d’étape 2.2 dans 100 µL d’eau régale (mélange 3:1 d’acide chlorhydrique concentré et acide nitrique) et laisser à température ambiante une nuit. Ajouter 850 µL d’eau pour atteindre un volume d’échantillon final de 1 mL. Analyser l’échantillon à l’aide d’AAS. La concentration en acide finale devrait être de 10 % dans tous les échantillons analysés.
      3. Enregistrer la lecture de la concentration de Pt en ppb et calculer le contenu final de platine dans l’échantillon (compte de la dilution de l’échantillon et le volume initial de nanoémulsion).

3. confocal imagerie de l’assimilation de la FITC-KYF-Pt-NE

  1. 6 lignées cellulaires de cancer de l’ovaire (A2780, CP70, SKOV3, OV90, TOV21G et ES2), des graines en 4 plats confocal de puits-chambre à la densité de 4. 7 x 104 cellules par chambre et la culture avance une nuit à 37 ° C.
  2. Après 24h, laver les cellules trois fois avec une solution saline du tampon phosphate (PBS) et incuber avec FITC-KYF-Pt-NE dans un milieu de culture cellulaire (voir étape 6.1 pour cellule ligne détails spécifiques) pendant 15 min à 37 ° C.
  3. Après incubation, retirez le support et laver les cellules trois fois avec du PBS.
  4. Fixer les cellules avec du méthanol froid pendant 5 min à-20 ° C et laver trois fois avec 1 mL de PBS.
  5. Permeabilize les cellules avec 1 mL de 0.1 % Triton-X pendant 10 min à température ambiante et de la laver trois fois avec 1 mL de PBS.
  6. Incuber les cellules pendant 90 min avec LAMP1 anticorps conjugué avec Alexa Fluor 647 (1 mL) à 01:50 dilution dans du PBS à température ambiante. Ensuite, laver les cellules 3 fois avec du PBS.
  7. Diluer la solution mère de DAPI (1 mg/mL) à 1 mg/mL dans du PBS. Ensuite, ajouter 1 mL de la solution diluée dans chaque chambre et incuber pendant 15 min à température ambiante. Laver les cellules 3 fois avec du PBS.
  8. Monter les lamelles couvre-objet sur une diapositive à l’aide du milieu de montage.
  9. Image des cellules à l’aide de microscope confocal de cellules vivantes à excitation longueur d’onde de 405 nm, 488 nm et 633 nm. Définissez les paramètres de détection comme suit : Gain de puissance de laser de 0,2 % et pas plus de 1 %, unité 1 de Pinole aérée, maître offset numérique de 650-750, 0.
  10. Ouvrir une image dans le logiciel d’imagerie. Sous image affichée, sélectionnez le graphique et sélectionnez Insert barre d’échelle, d’insérer de la barre d’échelle à l’image.

4. études de libération de médicaments

  1. Effectuer les études de libération de médicaments dans du PBS. Ajustez les valeurs de pH de trois tampons de PBS à 7,4, 6.8 et 5.0 respectivement.
  2. Diluer 5 μL de KYF-Pt-NE dans le 180 μL de tampon PBS pH approprié, transfert à 3,5 Coupe du mini dialyse MWCO kDa et incuber à 37 ° C dans du PBS.
  3. Retirer le tampon de chaque trois tubes dialyse mini à 2, 4, 6, 24, 48 et 140 h et de mesurer les concentrations de platine par AAS. Préparer tous les échantillons selon étape 2.2.8 mais ajuster le volume final de l’échantillon à 500 µL.

5. méthodes de Culture cellulaire

  1. Les lignées de culture cellulaires A2780, CP70, SKOV-3, OV-90, TOV - 21G, ES-2 dans le milieu de culture cellulaire (DMEM) complété avec 10 % (A2780, CP70, SKOV-3, ES-2) ou 15 % (TOV - 21G, OV-90) sérum fœtal (SVF), avec la L-Glutamine et la pénicilline/streptomycine. Faites pousser toutes les cellules dans un 5 % de CO2, atmosphère saturée d’eau à 37 ° C.
  2. Graines de 3 x 105 cellules dans chaque plaque à 96 puits et de la culture avant toute la nuit pour des expériences d’incubation in vitro. Préparer les solutions de carboplatine, cisplatine et KYF-Pt-NE dans l’eau. Ajuster la concentration de PT (ii) en KYF-Pt-NE pour correspondre à la concentration de carboplatine et cisplatine pour chaque lignée cellulaire. Incuber pendant 72 heures à 37 ° C.
  3. Après incubation, évaluer la viabilité cellulaire par dosage colorimétrique (le test de prolifération cellulaire MTT). En bref, éliminer le milieu et ajouter 110 μL de 10 % MTT en moyenne à chaque puits et incuber pendant 2 h à 37 ° C. Puis ajouter un détergent 100 μl à chaque puits et incuber pendant 5 h à 37 ° C.
  4. Vérifier l’absorbance à 570 nm en utilisant le lecteur de plaques. Analyser les résultats en utilisant une analyse statistique avec le test Z et P-test.

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Résultats

Image représentant TEM KYF-Pt-ne préparé à l’aide de ce protocole est montré dans la Figure 2 a. La KYF-Pt-NEs sont sphériques en morphologie, bien dispersée et de taille uniforme. Le diamètre du noyau de la KYF-Pt-NEs, mesurés directement à partir de trois images TEM avec un minimum de 200 mesures fait, est de 107 ± 27 nm. Le diamètre hydrodynamique des KYF-Pt-NE, analysée par spectroscopie lumineuse dynamique (DLS), s’est avéré pour être de 240 nm avec un i...

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Discussion

Des étapes cruciales dans la synthèse de nanoémulsion incluent le rapport molaire des substrats de réglage, maintenir contrôle température et le débit de la fréquence pendant l’ajout de acids–Pt(II) en acide oléique, fournissant suffisamment de temps pour l’auto-assemblage et purifier le produit à l’aide une colonne de concentrateur centrifuge. Ces paramètres influent sur la taille et la morphologie de la KYF-Pt-NE ; ainsi, il est particulièrement important maintenir le bon rapport molaire et ajuster les conditions synth...

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Déclarations de divulgation

Auteurs n’ont pas de conflit d’intérêts à divulguer.

Remerciements

Nous reconnaissons l’appui financier de l’Institut National du Cancer, grant SC2CA206194. Aucun intérêts financiers concurrents ne sont déclarés.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
2-(1H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tétraméthyluronium
tétrafluoroborate (TBTU)		ANASPEC INC. :AS-20376SPPS
Boîte confocale à 4 puitsLab-Tek II, Thermo Fisher Scientific154526Pour l’imagerie
l’acide 6-bromohexanoïqueChem-Impex INT' L INC.24477Modification par clic pour le peptide
A2780Généreusement offert par le professeur John Martignetti de l’hôpitalLignée cellulaire du cancer de l’ovaire
Barnstead NanopureThermo FisherD11901Système de filtration d’eau
BUCHI rotavapor R-3BuchiZ568090Pour l’élimination des solvants et le séchage des échantillons
Centrifugeuse 5810 Reppendorf5811FPour la séparation du complexe de platine
Cis-dichlorodiamineplatinum (II) 99 %Acros Organics19376-0050Tests in vitro
CP70Généreusement offert par le professeur John Martignetti de l’hôpitalLignée cellulaire du cancer de l’ovaire
Bain d’eau numériqueVWR97025-134Pour réchauffer les milieux de culture cellulaire
Diffusion dynamique de la lumière (DLS)Brookhaven Instrument CorporationPour les mesures de la taille des nanoparticules
ES-2ATCCCRL-1978Lignée cellulaire du cancer de l’ovaire
Fmoc-L-Lys(Boc)-OH 99,79 %Chem-Impex INT' L INC.00493SPPS
Fmoc-L-Phe Résine d’alcool 4-alkoxybenzyle (0,382 meq/g),Chem-Impex INT' L INC.01914SPPS
Fmoc-LTyr(tBu)-OH 98 %Alfa AesarH59730Incubateur CO2 SPPS
HERACELL 150iIncubateur Fisher
Pousse-seringue haute pressionNew Era1010-USPour l’ajout de complexes de platine dans la synthèse de nanoparticules
Plaque chauffante/agitateurVWR12365-382Pour l’agitation et le chauffage
des échantillonsLAMP-1 Anticorps (conjugué avec Alexa Fluor 647)Santa Cruz Biotechnologysc-18821 AF647Pour l’imagerie
N,N-diisopropyléthylamine (DIPEA)Oakwood Chemical005027SPPS
Ninhydrin 99 %Alfa AesarA10409Kaiser
test Acide oléiqueChem-Impex INT' L INC.01421Pour la synthèse du complexe de platine
OV90ATCCCRL-11732Lignée cellulaire du cancer de
l’ovaire PBSCorning21-031-CVPour le lavage cellulaire
Support de montage PermountFisher ChemicalSP15-100Pour l’imagerie
PhénolFisher ChemicalA92500Test Kaiser
Acide phosphotungstiqueFisher ChemicalA248-25coloration négative pour TEM
Piperidine 99 %BTC219260-2.5LSPPS
Platinum AAS standard soultionAlfa Aesar880861000ug/ml pour courbe d’étalonnage
Bromure de propargyle 97 %Alfa AesarL10595Pour modification d’alcyne de fluorescéine
Armoire biologique scientifiqueThermo Scientific Fisher1385Bio-hood pour culture cellulaire
Système d’aspiration autonettoyantWelch2028Pompe à vide pour rotavapor
Nitrated’argent Acros Organics19768-0250Activation du cisplatine
SKOV3ATCCHTB-77Lignée cellulaire du cancer de l’ovaire
Hydroxyde de sodiumFisher ScientificS313-1Pour la synthèse du complexe de platine
Chlorured’étain (II)Sigma Aldrich208256Test de présence de platine
TOV21GATCCCRL-11730Lignée cellulaire du cancer de l’ovaire
Acide trifluoroacétique 99 % (TFA)Alfa AesarL06374SPPS
Triisopropylsilane (TIPS)Chem-Impex INT' L INC.01966SPPS
Triton-XSigma AldrichT8787-100MLPour l’imagerie
Poudre d’uranine 40 %Fisher ScientificS25328APour la modification alcyne de la fluorescéine
Vivaspin 20 (10000 MWCO)SartoriousVS2001Pour le lavage et la condensation des nanoparticules
VWR Microscope inverséVWR89404-462Pour la surveillance des cultures cellulaires
de Mount Sinai Mount Sinai Thermo Scientific

Références

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  4. Roy Chowdhury, M., Schumann, C., Bhakta-Guha, D., Guha, G. Cancer nanotheranostics: Strategies, promises and impediments. Biomedicine & Pharmacotherapy. 84, 291-304 (2016).
  5. Jeevanandam, J., Chan, Y. S., Danquah, M. K. Nano-formulations of drugs: Recent developments, impact and challenges. Biochimie. , 99-112 (2016).
  6. Meerum Terwogt, J. M., Groenewegen, G., Pluim, D., Maliepaard, M., Tibben, M. M., Huisman, A., ten Bokkel Huinink, W. W., Schot, M., Welbank, H., Voest, E. E., Beijnen, J. H., Schellens, J. M. Phase I and pharmacokinetic study of SPI-77, a liposomal encapsulated dosage form of cisplatin. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 49 (3), 201-210 (2002).
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