Induction et notation de la maladie de graft-Versus-Host dans un modèle xénogéné de murine et quantification des cellules t humaines dans des tissus de souris utilisant PCR numérique

Amara Seng; Mary  A. Markiewicz

doi:10.3791/59107

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Article de méthode

Induction et notation de la maladie de graft-Versus-Host dans un modèle xénogéné de murine et quantification des cellules t humaines dans des tissus de souris utilisant PCR numérique

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DOI :

10.3791/59107

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23 mai 2019

Amara Seng¹ , Mary A. Markiewicz¹

¹Department of Microbiology, Molecular Genetics, and Immunology, University of Kansas Medical Center

Dans cet article

Résumé

Ici, nous présentons un protocole pour induire et marquer la maladie dans un modèle xnogeneic de greffe-contre-hôte de la maladie (xenoGVHD). xenoGVHD fournit un modèle in vivo pour étudier l'immunosuppression des lymphocytes T humains. En outre, nous décrivons comment détecter les lymphocytes T humains dans les tissus avec PCR numérique comme outil pour quantifier l'immunosuppression.

Résumé

La maladie aigue de greffe-contre-hôte (GVHD) est une limitation significative pour des patients recevant la greffe hématopoïétique de cellules souches comme thérapie pour des insuffisances hématologiques et des malignités. Le GVHD aigu se produit lorsque les lymphocytes T de donneur reconnaissent les tissus d'hôte comme un antigène étranger et montent une réponse immunitaire à l'hôte. Les traitements actuels impliquent des médicaments immunosuppresseurs toxiques qui rendent les patients sensibles à l'infection et à la récidive. Ainsi, il y a la recherche continue pour fournir un traitement aigu de GVHD qui peut effectivement cibler des cellules de T de distributeur et réduire des effets secondaires. Une grande partie de ce travail préclinique utilise le modèle murine xénogène GVHD (xenoGVHD) qui permet d'tester des thérapies immunosuppressives sur les cellules humaines plutôt que des cellules murines dans un système in vivo. Ce protocole décrit comment induire le xénoGVHD et comment aveugler et normaliser la notation clinique pour assurer des résultats cohérents. En outre, ce protocole décrit comment utiliser le PCR numérique pour détecter les lymphocytes T humains dans les tissus de souris, qui peuvent ensuite être utilisés pour quantifier l'efficacité des thérapies testées. Le modèle xenoGVHD fournit non seulement un modèle pour tester les thérapies GVHD, mais toute thérapie qui peut supprimer les lymphocytes T humains, qui pourrait ensuite être appliquée à de nombreuses maladies inflammatoires.

Introduction

La greffe de cellules souches hématopoïétiques allogéniques (HSCT) est devenue un traitement de routine pour les patients souffrant de malignités hématologiques telles que la leucémie avec un pronostic médiocre. Une complication significative de HSCT est la maladie aigue de greffe-contre-hôte (GVHD). Une étude de 2012 a rapporté que le GVHD aigu s'est développé dans 39% de patients deHSCT recevant des greffes des donateurs de frère et 59% de patients recevant des greffes des donateurs non apparentés 1. Le GVHD aigu se produit quand les lymphocytes T d'origine donneuse attaquent les organes du receveur. La seule thérapie réussie pour GVHD est