Afin d'observer l'ultrastructure de la sensibilité d'insecte, le protocole de préparation d'échantillon de balayage et de transmission d'électron (SEM et TEM, respectivement) ont été présentés dans l'étude. Tween 20 a été ajouté dans le fixatif pour éviter la déformation de l'échantillon dans LA microscopie de fluorescence DE SEM a été utile pour améliorer la précision de tranchage dans TEM.
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Article de méthode
Méthode de préparation d'échantillons de microscope électronique de balayage et de transmission pour les appendices du bec de bois
Dans cet article
Résumé
Résumé
Ce rapport décrit les méthodes de préparation d'échantillon qui scannent et canalysent des observations de microscope électronique, démontrées en préparant des appendices du coléopter de bois, Chlorophorus caragana Xie et Wang (2012), pour les deux types de microscopie électronique. Le protocole de préparation de l'échantillon de microscopie électronique à balayage (SEM) était basé sur la fixation chimique de l'échantillon, la déshydratation dans une série de bains d'éthanol, le séchage et le revêtement par pulvérisation. En ajoutant Tween 20 (Polyoxyethylene sorbitan laurate) au fixatif et à la solution de lavage, la surface du corps d'insecte du scétis boisé a été lavée plus proprement dans SEM. La microscopie électronique de transmission de cette étude (TEM) comprenait une série d'étapes, y compris la fixation, la déshydratation de l'éthanol, l'intégration dans la résine, le positionnement à l'aide de la microscopie à fluorescence, la sectionnement et la coloration. Fixative avec Tween 20 permis pénétrer la paroi du corps d'insecte de colégon boisé plus facilement qu'il ne l'aurait été sans Tween 20, et par la suite de meilleurs tissus fixes et organes dans le corps, ainsi donné des observations électroniques de microscope de transmission claire des ultrastructures de sensilla d'insecte. L'étape suivante de cette préparation a été de déterminer les positions des insectes sensilla dans l'échantillon incorporé dans le bloc de résine en utilisant la microscopie de fluorescence pour augmenter la précision du positionnement sensilla cible. Cette précision de découpe améliorée.
Introduction
La microscopie électronique de balayage est un outil important dans beaucoup d'études de morphologie, que SEM montre des structures de surface1,2. L'attrait de la microscopie électronique de transmission est qu'elle peut être utilisée pour étudier un large éventail de structures biologiques à l'échelle nanométrique, de l'architecture des cellules et de l'ultrastructure des organites à la structure des complexes macromoléculaires et des protéines. TEM montre les structures intérieures3,4,5.
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Protocole
CAUTION : Consultez les fiches de données sur la sécurité des matériaux des réactifs avant de les utiliser. Plusieurs des produits chimiques utilisés lors de la préparation de l'échantillon sont toxiques, mutagènes, cancérigènes et/ou reprotoxiques. Utilisez de l'équipement de protection individuelle (gants, blouse de laboratoire, pantalon sépuldage et chaussures à boutfermé) et travaillez sous une hotte de fumée tout en manipulant l'échantillon.
1. Préparation et imagerie de l'échantillon SEM
- Fixation et nettoyage d'échantillon
- Travailler dans une zone où C. caragana se produisent, attirer les adultes dans les pi....
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Résultats
En utilisant le nettoyage et la solution fixative avec Tween 20, une image SEM plus propre a été observée que celle sans Tween 20 (Figure 3). La solution de fixation de tween 20 a pénétré la solution de fixation de glutaraldéhyde dans le tissu. La structure de microtubule a été clairement vue. L'image TEM de la structure interne de l'échantillon a été floue sans Tween 20 (Figure 4).
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Discussion
Dans cet article, nous avons présenté un schéma de préparation d'échantillon pour la microscopie électronique de balayage et de transmission pour le colégon laborieux. En utilisant l'appendice d'insecte comme sujet représentatif d'étude, nous avons démontré plusieurs améliorations au-dessus des méthodes traditionnelles de préparation d'échantillon.
L'huile liquide détachée de la surface solide est émulsionnée en petites gouttelettes, qui peuvent être bien dispersées et suspendues dans le milie.......
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Déclarations de divulgation
Nous n'avons aucun conflit d'intérêts à divulguer.
Remerciements
Nous apprécions l'aide généreuse du Beijing Vocational College of Agriculture, de l'Institute for the Application of Atomic Energy (Chinese Academy of Agricultural Science), du Bioresearch Center de l'Université forestière de Beijing et du professeur Shan-gan Zhang de l'Institut de Zoologie, Académie chinoise des sciences. Cette recherche a été soutenue par le National Key R-D Program of China (2017YFD06000103), la National Natural Science Foundation of China (Grant No. 31570643, 81774015), Forest Scientific Research in the Public Welfare of China (201504304), Inner Mongolia Agriculture University High-level Talent Research Startup Plan (203206038), and Inner Mongolia....
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Lentille anatomique | Chongqing Auto Optical société à responsabilité limitée | 1425277 | |
| Ruban adhésif en carbone | SPI Supplies, Division de Structure Probes, Inc. | 7311 | |
| Tétrachlorure | de carbone Sigma | 56-23-5 | |
| Grilles de cuivre | GilderGrids | G300 | |
| Hydrogénophosphate disodique | Sinopharm group chemical reagent co., LTD | 10039-32-4 | |
| Éthanol | J.T. Baker | 64-17-5 | |
| Moules d’enrobage plats | Hyde Venture (Beijing) Biotechnology Co., Ltd. | 70900 | |
| Microscope à fluorescence | LEICA | DM2500 | |
| Glutaraldéhyde | Sigma-Aldrich | 111-30-8 | Anhydre EM Grade |
| Isophorone | Sigma | 78-59-1 | |
| Citrate | de plomb Sigma | 512-26-5 | |
| Méthanol | Sigma | 67-56-1 | |
| Phosphate de sodium monobasique | Its group chemical reagent co., LTD | 7558-80-7 | |
| Micromètre objectif | Olympus | 0-001-034 | |
| Tétroxyde d’osmium | Sigma | 541-09-3 | |
| Boîte de Pétri | Aldrich | 1998 | |
| Lame de rasoir | Gillette | ||
| Resin | Spurr | ERL4221 | |
| Scalpel | Lianhui | GB/ T19001-2008 | |
| SEM | Hitachi | S-3400 | |
| Gel de silice déshydratant | Suzhou Longhui Desiccant Co., Ltd. | 112926-00-8 | |
| Petite brosse | Martol | G1220 | |
| Hydroxyde de sodium | Sigma | 1310-73-2 | |
| Instrument de pulvérisation ionique | Hitachi Koki Co. Ltd., Tokyo, Japon | E-1010 | |
| Stéréomicroscope | Leica | EZ4 HD | |
| TEM | Hitachi | H-7500 | |
| Tween 20 | Tianjin Damao Réactif chimique | 9005-64-5 | |
| Ultramicrotome | Leica | UC6 | |
| Nettoyeur à ultrasons | GT Sonic | GT-X1 | |
| Acétate d’uranyle | Sigma | 6159-44-0 |
Références
- Song, Y. Q., Dong, J. F., Sun, H. Z. Scanning Electron Microscope Technology of Insect Material. Hubei Agricultural Sciences. 52, 1064-1065 (2013).
- Liu, C. The develo....
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Réimpressions et autorisations
