Nous présentons ici un protocole afin de mesurer le résultat de l’application de la lumière rouge sur la croissance de Candida albicans biofilms. Un dispositif rouge non cohérentes avec la longueur d’onde de 635 nm et densité d’énergie de 87,6 J·cm-2 a été appliqué tout au long de la croissance de Candida albicans biofilms pendant 48 h.
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Article de méthode
Photothérapie quotidienne avec lumière rouge pour réglementer Candida albicans biofilms croissance
Dans cet article
Résumé
Résumé
Nous présentons ici un protocole pour évaluer les résultats du taux quotidien lumière rouge traitement sur la croissance de Candida albicans biofilms. Pour augmenter la croissance planctonique de SN425 de c. albicans , l’inocule a grandi sur des supports de Base d’azote de levure. Pour la formation de biofilm, RPMI 1640 media, qui ont des concentrations élevées d’acides aminés, ont été appliqués afin de contribuer à la croissance de biofilm. Biofilms de 48 h ont été traités deux fois par jour pendant une période de 1 min avec un dispositif de lumière non-cohérente (lumière rouge, longueur d’onde = 635 nm, la densité d’énergie = 87,6 J·cm-2). Tel qu’un contrôle positif (CP), chlorhexidine 0,12 % (CHX) a été appliqué et comme témoin négatif (NC), 0,89 % NaCl a été appliquée sur les biofilms. Unités (UFC), formant des colonies des exopolysaccharides poids sec, solubles et insolubles ont été quantifiés après traitements. En bref, le protocole présenté ici est simple, reproductible et apporte des réponses au sujet de la viabilité, des quantités de polysaccharides extracellulaires et de poids sec après le traitement de la lumière rouge.
Introduction
L’augmentation de l’incidence du diabète, des applications de traitement immunosuppresseur, infection par le VIH, épidémie de sida, cliniques invasives et la consommation d’antibiotiques à large spectre au cours des années ont augmenté l’incidence de Candida albicans des maladies1,2. Les infections de c. albicans sont communément associées au développement du biofilm et peuvent provoquer des manifestations cliniques, telles que la candidose, ou des manifestations systémiques, par exemple une candidémie1,2. Un des facteurs de virulence....
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Protocole
1. préparation des milieux de culture
- Préparer la sabouraud dextrose agar (SDA). Suspendre 65 g de SDA additionné de chloramphénicol (50 mg/L) dans 1 000 mL d’eau distillée. Ébullition pour dissoudre le milieu complètement. Stériliser à l’autoclave à 15 PSI (121° C) pendant 30 min. laisser refroidir à 45-50 ° C. Bien mélanger et verser 20 mL de SDA dans les plats de pétri stériles (taille : 100 x 15 mm).
- Préparer la levure azote (YNB) milieu de base additionné de 100 mM de glucose en mélangeant 6,7 g de YNB et 18 g de dextrose à 1 000 mL d’eau ultrapure. Mélanger à l’aide d’un agitateur et stériliser le milieu à l’aide d’un système de filtration so....
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Résultats
Figure 2 affiche les résultats de Log10 UFC/mL de c. albicans après des traitements journaliers avec lumière rouge pour 1 min. rouge réduit significativement le Log10 UFC/mL par rapport à la NC (p = 0,004). La figure 3 présente les résultats de la biomasse (mg) de c. albicans biofilms après traitements quotidiens. Tous traités groupes ont montré de réduction de la biomasse par rapport à la .......
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Discussion
Les étapes plus critiques pour la culture réussie de c. albicans biofilms sont : 1) pour faire l’inoculum pré et l’inoculum dans un milieu YNB complété avec 100 mM de glucose ; 2) d’attendre 90 min pour la phase d’adhérence et de laver soigneusement deux fois les puits avec 0,89 % NaCl pour éliminer les cellules non-respecté ; et 3) pour ajouter le milieu RPMI pour les cellules adhérentes pour commencer la formation de biofilm, depuis RPMI stimulera la croissance d’hyphes. Aneuploïdies peuvent se produire lorsqu.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Nous remercions le Dr Paula da Silveira, Dr Cecília Atem Gonçalves de Araújo Costa, Shawn M. Maule, Shane M. Maule, Dr N. Martin José et Dr Iriana Zanin pour l’élaboration de cette étude. Nous remercions également m. Alexander D. Johnson (UCSF) pour le don de la souche analysée dans cette étude.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Clorhexidine 20 % ; | Sigma-Aldrich | C9394 | |
| Dextrose (D-Glucose) Anhydre | Fisher Chemical | D16-500 | |
| Éthanol 200 proof | Decon Laboratories | DSP-MD.43 | |
| LumaCare LC-122 A ; | LumaCare Medical Group, Newport Beach, CA, États-Unis. | ||
| NaCl ; | Fisher Chemical | S641-500 | |
| NaOH ; | Fisher Bioreagents ; | BP 359-500 | |
| Phénol 5 % | Milipore Sigma | 843984 | |
| RPMI 1640 tamponné avec 3-(N-morpholino) | Sigma | R7755 | |
| Gélose au dextrose Sabouraud complétée par du chloramphénicol | Acumedia | 7306A | |
| Acide sulfurique ; | Fisher Chemical | SA200-1 | |
| Base d’azote de levure | Difco | DF0392-15-9 | |
| Acide 3-(N-morpholino)propanesulfonique MOPS | Sigma-Aldrich | M1254 | |
| ; Plaque de polystyrène à 24 puits ; | Faucon | 353935 |
Références
- Sardi, J. C. O., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, J. M. Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options. Journal of Medical Microbiology. 62 (Pt 1), 10-24 (2013).
- Harriott, M. M., Noverr, M. C.
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Réimpressions et autorisations
