Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de méthode

Un modèle orthotopic de cancer de l'endomètre avec lymphadénopathie rétropéritonel fabriqué à partir de cellules VX2 propagées et cultivées

8K vues

DOI :

10.3791/59340

12 septembre 2019

Dans cet article

Résumé

Ce protocole présente une méthode normalisée pour cultiver des cellules VX2 dans la culture et pour créer un modèle orthotopic VX2 du cancer de l'endomètre avec des métastases rétropéritonéales de ganglion lymphatique chez les lapins. Les modèles orthotopiques de cancer de l'endomètre sont importants pour l'étude préclinique des modalités d'imagerie nouvelles pour le diagnostic des métastases de ganglion lymphatique.

Résumé

Le cancer de l'endomètre est la malignité gynécologique la plus courante en Amérique du Nord et l'incidence augmente dans le monde entier. Le traitement consiste en une chirurgie avec ou sans traitement adjuvant en fonction de la participation des ganglions lymphatiques telle que déterminée par lymphadenectomy. Lymphadenectomy est une procédure morbide, qui n'a pas été montrée pour avoir un avantage thérapeutique dans beaucoup de patients, et ainsi une nouvelle méthode pour diagnostiquer des métastases de ganglion lymphatique est exigée. Pour tester de nouveaux agents d'imagerie, un modèle fiable de cancer de l'endomètre avec métastases rétropéritones des ganglions lymphatiques est nécessaire. Le modèle de cancer endomètre vX2 a été décrit fréquemment dans la littérature ; toutefois, il existe des variations importantes en ce qui concerne la méthode d'établissement du modèle. En outre, aucune étude n'a rapporté sur l'utilisation de cellules VX2 cultivées pour créer ce modèle que seules les cellules propagées in vivo ont été précédemment utilisés. Ici, nous présentons une méthode chirurgicale normalisée et une méthode de surveillance postopératoire pour l'établissement du modèle de cancer de l'endomètre VX2 et rapportons sur la première utilisation des cellules VX2 cultivées pour créer ce modèle.

Introduction

Le cancer de l'endomètre, ou cancer de la muqueuse de l'utérus, est la deuxième malignité gynécologique la plus commune dans le monde et la malignité la plus commune dans les nations développées1. L'incidence du cancer de l'endomètre n'a cessé d'augmenter, augmentant de 2,3 % par an entre 2005 et 2013, avec une augmentation correspondante de 2,2 % de la mortalité1,2,3. Le diagnostic des métastases de ganglion lymphatique est primordial car la présence des ganglions lymphatiques positifs est un prédicteur négatif fort de la survie4

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Protocole

Fermeture profonde de la paroi abdominale : Identifiez le sommet de l'incision péritonéale et saisissez le péritoine, le rectus muscle et le fascia avec des forceps de tissu. Toutes les études sur les animaux ont été menées dans des installations approuvées par le Réseau universitaire de santé du Centre de ressources animales (ARC) et conformément aux protocoles approuvés d'utilisation et de soins des animaux (AUP #3994/#4299). La lignée cellulaire VX2 a été obtenue du laboratoire du Dr Aken au Réseau universitaire de santé.

1. Création d'une lignée cellulaire VX2 in vitro

  1. Récoltez la tumeur de VX2 du muscle de quadricep de lapin ....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Résultats

Vingt-huit lapins ont été utilisés pour la création du modèle du cancer de l'endomètre. Les lapins avaient un poids moyen de 2,83 kg (2,71-3,58 kg) au moment de l'expérience. Les tumeurs utérines ont avec succès grandi dans 21 lapins pour un taux global de succès de modèle de 75%. Avant l'inclusion de la suture utérine dans le protocole, le taux de réussite était de 57% comparé à 81% après que la suture utérine ait été ajoutée. La suture utérine a été ajoutée au protocole après le 7e.......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Discussion

Ici, nous avons rapporté une méthode chirurgicale normalisée pour l'établissement d'un modèle de cancer de l'endomètre VX2 et rapporté sur la première utilisation des cellules VX2 cultivées pour créer ce modèle. Le taux de prise de tumeur de 75% est inférieur au taux de 100% pour cent précédemment rapporté dans la littérature35,37,53,56; cependant, thw 90% taux de métastases pathologiquement co.......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Déclarations de divulgation

Les auteurs n'ont rien à révéler.

Remerciements

Cette étude a été financée par l'Institut de recherche Terry Fox (PPG-1075), l'Institut canadien de recherche en santé (Fondation Grant #154326), l'Institut de recherche de la Société canadienne du cancer (704718), le Conseil de recherches en sciences naturelles et en génie du Canada, Fondation pour l'innovation et Fondation Du Cancer Princess Margaret.

Je tiens à remercier le Dr Marguerite Akens d'avoir fourni les cellules VX2 initiales pour l'établissement du modèle VX2 initial et des blocs tumoraux VX2 congelés. Je tiens à remercier Marco DiGrappa pour avoir aidé à effectuer des expériences initiales de culture cellulaire VX2 et Lili Din....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Scalpel à 11 lames, Stérile, DisposibleAspen Surgical (VWR)80094-086
Cathéter veineux auriculaire à 22 gaguesCDMV14332
Suture poly-filament résorbable résorbable 3-0 (Polysorb)Suture
3-0 (Polysorb)Crépine à cellules Covidien356718
70uM, Emballé individuellement, NylonFalcon352350
Acépromazine (Atravet)CDMV1047
Savon à la bétadine (Poviodone iode 7,5 %)CDMV4363
Solution de bétadine (Poviodone iode 10 %)UHN Magasins457955
BuprénorphineUniversité
CefazolinUHN Pharmacie pour patients hospitalisésNo Cat # Needed
Solution de chlorhexidineCDMV119872
Corning BioCoatCellware, Collagène de type I, Plats de 100 mmCorning354450marque non importante
Corning BioCoatCellware, Collagène de type I, plaques 24 puitsCorning354408marque non importante
Corning BioCoatCellware, Collagène de type I, plaques 6 puitsCorning354400marque non important
Corning Matrigel Membrane Membrane Matrix, *sans LDEV, 10 mLCorning354234
DMEM/HAM F12 1:1Life Technologies11320marque non important
DMSOCaledon Lab Chem1/10/4100
Enrofloxacine (injectable Baytril)CDMV11242
Falcon TubeCorning Centri-Star430828
Sérum fœtal de bovin, qualifié, d’origine canadienne, 500mlLife Technologies12483020marque/source non importante
IsofluraneUHN pharmacie hospitalièreNo Cat # Nécessaire
Isohexol contrasteGE Healthcare407141210
Meloxicam (Metacam 0,5 %)CDMV104674
Normal SalineHouse Brand (UofT Medstore)1011
PBSMulticell ou Sigma331-010-CL ou D8537-500mL
Pénicilline/Streptomycine (100mL ; 10000U Pénicilline, 10000ug Streptomycine)Corning-CellgroCA45000-652
Solution saline équilibrée stérile Hanks (-Ca++, -Mg++, -Phenol Red)T.C.M.F (Dr Bristow)28-Jan-11
Colle chirurgicale (adhésif tissulaire)3M Vetbond14695B
Trypsine (0,25 %), Protéomique QualitéSigmaT-6567-5X20UG
Trypsine-EDTA, 0,05 %, 100mlWisent Inc325-542-ELmarque pas important
résorbable tressable 356718 McGill

Références

  1. Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: Sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. International Journal of Cancer. 136, E359-E386 (2015).
  2. Canada, S. Canadian Cancer Statistics Special topic: Pancreatic canc....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Réimpressions et autorisations

Étiquettes

Cancer de l endom tre VX2cellules propag es in vivoinjection dans la corne ut rinetablissement d un mod le chirurgicalm tastases ganglionnairespr paration de culture cellulaireanalyse histologiquetechnique chirurgicale st rile