Nous avons offert aux mangoustes captives des appâts vaccinales contre la rage buccale placebo avec de l'acide éthylique ou méthyle iophenoxique comme biomarqueur et vérifié l'utilisation d'appâts à l'aide d'une nouvelle chromatographie liquide avec la spectrométrie de masse en tandem (LC-MS/MS).
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Article de méthode
Analyse des analogues de l'acide iophénoxique chez la petite mangouste indienne (Herpestes Auropunctatus) Sera pour utilisation comme marqueur biologique de vaccination contre la rage buccale
Dans cet article
Résumé
Résumé
La petite mangouste indienne (Herpestes auropunctatus) est un réservoir de virus de la rage (RABV) à Porto Rico et comprend plus de 70% des cas de rage animale signalés chaque année. Le contrôle de la circulation du RABV dans les réservoirs fauniques est généralement réalisé par une stratégie de vaccination antirabique orale (VVA). À l'heure actuelle, il n'existe aucun programme ORV sur la faune à Porto Rico. Des recherches sur les vaccins antirabiques oraux et divers types d'appâts pour les mangoustes ont été menées avec des résultats prometteurs. La surveillance du succès de l'ORV repose sur l'estimation de l'étude des appâts par les espèces cibles, ce qui implique généralement l'évaluation d'un changement dans les anticorps neutralisants RABV (RVNA) après la vaccination. Cette stratégie peut être difficile à interpréter dans les zones ayant un programme actif de VRO pour la faune ou dans les zones où le RABV est enzootique et où les niveaux de fond de l'ARV sont présents chez les espèces réservoirs. Dans de telles situations, un biomarqueur incorporé avec le vaccin ou la matrice d'appâtpeut-nous peut être utile. Nous avons offert 16 appâts ORV placebo de mangouste captifs contenant de l'acide éthylo-iophenoxique (et-IPA) dans des concentrations de 0,4 % et 1 % à l'intérieur de l'appât et de 0,14 % dans la matrice externe de l'appât. Nous avons également offert 12 appâts ORV en captivité contenant de l'acide méthyl-iophénoxique (me-IPA) dans des concentrations de 0,035%, 0,07% et 0,14% dans la matrice d'appâts externes. Nous avons recueilli un échantillon de sérum avant l'offre d'appâts, puis hebdomadaire pour un jusqu'à huit semaines après l'offre. Nous avons extrait des acides iophenoxic de sérum dans l'acétonitrile et quantifiés utilisant la chromatographie liquide/spectrométrie de masse. Nous avons analysé le sérum pour et-IPA ou moi-IPA par spectrométrie liquide de chromatographie-masse. Nous avons trouvé la capacité de marquage adéquate pendant au moins huit et quatre semaines pour et- et- et moi-IPA, respectivement. Les deux dérivés de l'API pourraient convenir à l'évaluation sur le terrain de l'utilisation des appâts ORV chez les mangoustes. En raison de la longévité du marqueur dans le sérum de mangouste, il faut veiller à ne pas confondre les résultats en utilisant le même dérivé DE l'API lors d'évaluations consécutives.
Introduction
Le virus de la rage (RABV) est un lyssavirus échoué unique de sens négatif, et circule parmi diverses espèces de réservoir satifieux dans les ordres Carnivora et Chiroptera. Plusieurs espèces de mangouste sont des réservoirs de RABV, et la petite mangouste indienne (Herpestes auropunctatus) est le seul réservoir à Porto Rico et d'autres îles des Caraïbes dans l'hémisphère occidental1,2,3 . Le contrôle de la circulation du RABV dans les réservoirs fauniques est généralement réalisé grâce à une stratégie de vaccination antirabique orale (VVA). Aux États-Unis, cette act....
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Protocole
Toutes les procédures ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d'utilisation des animaux du Centre national de recherche sur la faune de l'USDA dans le cadre du protocole de recherche approuvé QA-2597.
REMARQUE : Le protocole suivant décrit la procédure d'analyse pour détecter l'acide méthyl-iophénoxique dans le sérum de mangouste. Cette méthode est la version finale d'un processus itératif qui a commencé par l'analyse de l'acide éthylo-iophenoxique dans le sérum de mangouste. Au cours de l'évaluation initiale des modifications mineures d'acide éthylo-iophénoxique ont été faites aux méthodes, ayant pour résultat le protoc....
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Résultats
Les chromatogrammes ioniques représentatifs d'une analyse me-IPA sont présentés à la figure 1. Le sérum de mangouste de contrôle (figure 1A) illustre le temps de rétention de et-IPA (analyte de substitution) et l'absence de me-IPA au moment de rétention indiqué. L'échantillon de contrôle de la qualité (figure 1B) illustre la séparation de base de l'API-et-IPA ainsi que les transitions de quantificate.......
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Discussion
La méthode LC-MS/MS développée pour les études a utilisé la sélectivité de la surveillance des réactions multiples pour quantifier avec précision l'IpA et l'IPA dans le sérum de mangouste. La sélectivité de la détection de la SP/MS a également permis un protocole de nettoyage simple qui repose uniquement sur l'acétonitrile pour précipiter les protéines du sérum avant l'analyse.
Les acides iophénoxiques sont solubles dans l'ACN mais sont pratiquement insolubles dans l'eau. Pour exclure l'eau de.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs AV et SO sont des employés à temps plein d'un fabricant d'appâts vaccinaux antirabiques oraux.
Remerciements
Cette recherche a été soutenue en partie par le programme de recherche intra-muros du Us Department of Agriculture, Animal and Plant Health Inspection Service, Wildlife Services, National Rabies Management Program et IDT Biologika (Dessau-Rosslau, Allemagne).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Acétonitrile, grade Optima | Fisher | A996 | |
| Balance analytique | Mettler Toledo | XS204 | |
| C18 colonne, 2,1 x 50 mm, 2,5 & micro ; m taille des particules | Waters Corp. | ||
| ESI Source | Agilent ; | G1958-65138 | |
| Acide éthyl-iophénoxique, 97 % | Sigma Aldrich | N/A | Lot MKBP5399V |
| Acide formique, grade LC/MS | Fisher | A117 | |
| Logiciel LCMS | Agilent | MassHunter Acquisition de données et analyse | |
| Acide méthyl-iophénoxique, 97 % (p/p) | PR EuroChem Ltd. | N/A | Lot PR0709514717 |
| Balance microanalytique | Mettler Toledo | XP6U | |
| Microcentrifugeuse | Eppendorf | 5415C | |
| MS/MS | Agilent | G6470A | |
| N-Evap | Organomation | 115 | |
| Appâts oraux pour vaccins contre la rage | IDT Biologika, Dessau Rossleau, Allemagne | N/A | |
| Acide propyl-iophénoxique, 99 % (p/p) | PR EuroChem Ltd. | N/A | Lot PR100612108RR |
| pipette à répétition | Eppendorf | M4 | |
| Bouchons de flacons d’échantillonneur automatique à vis, doublés de PTFE | Agilent | 5190-7024 | |
| Chlorure de sodium, certifié ACS grade | Fisher | S271 | |
| Statistical Software Package | SAS Institute, Cary, Caroline du Nord, États-Unis N | /A | |
| Acide trifluoroacétique, 99 % | Alfa Aesar | L06374 | |
| UPLC | Agilent | 1290 Series | |
| Vortex Mixer | Glas-Col | 099A PV6 | |
| 0,2 mL pointes de pipette | Eppendorf | 30089.413 | |
| Pointes de pipette de 0,5 mL | Eppendorf | 30089.421 | |
| Tubes de microcentrifugation de 1,5 mL | Fisher | 14-666-325 | |
| 1250-& micro; Pointes de pipette d’une capacité L | Pointes | P-1233-1250 | |
| Pointes de pipette de 1 mL | Eppendorf | 30089.43 | |
| Flacons ambrés de 2 mL à vis | Agilent | 5182-0716 | |
| Pointes de pipette de 5 mL | Eppendorf | 30089.456 | |
| Porte-tubes de microcentrifugation à 80 positions | Fisher | 05-541-2 | |
| Flacons ambrés de 8 mL avec Capuchons doublés de PTFE | Wheaton | 224754 | |
| 70 % (v/v) isopropanol | Fisher | A459 | |
| 100-1000 µ ; Pipette à déplacement d’air L | Eppendorf | ES-100 |
Références
- Nel, L. H., et al. Mongoose rabies in southern Africa: a re-evaluation based on molecular epidemiology. Virus Research. 109 (2), 165-173 (2005).
- Zieger, Z., et al. The phylogeography of rabies in Grenada, W....
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Réimpressions et autorisations
