Article de méthode

Enquêter sur les altérations dans le microbiote de Caecum après une lésion cérébrale traumatique chez les souris

DOI :

10.3791/59410

⸱

19 septembre 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Emergency and Trauma Center, The International Medical Center, The First Affiliated Hospital, School of Medicine, Zhejiang University

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Présenté ici est un protocole pour induire des lésions cérébrales traumatiques diffuses à l'aide d'un dispositif de percussion de fluide latéral suivi de la collecte de la teneur en caecum pour l'analyse du microbiome intestinal.

Résumé

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De plus en plus de preuves montrent que l'axe microbiote-intestin-cerveau joue un rôle important dans la pathogénie des maladies du cerveau. Plusieurs études démontrent également que les lésions cérébrales traumatiques causent des changements au microbiote intestinal. Cependant, les mécanismes sous-jacents à la régulation bidirectionnelle de l'axe cerveau-intestin restent inconnus. Actuellement, peu de modèles existent pour étudier les changements dans le microbiote intestinal après des lésions cérébrales traumatiques. Par conséquent, l'étude présentée combine des protocoles pour induire des lésions cérébrales traumatiques à l'aide d'un dispositif latéral de percussion de fluide et l'analyse des échantillons de caecum après des dommages pour étudier des altérations dans le microbiome d'intestin. Des modifications de la composition de microbiote d'intestin après des dommages traumatiques de cerveau sont déterminées utilisant le séquençage 16S-rDNA. Ce protocole fournit une méthode efficace pour étudier les relations entre les micro-organismes entériques et les lésions cérébrales traumatiques.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Les lésions cérébrales traumatiques (ITT) sont un problème de santé publique mondial et la principale cause de décès et d'invalidité chez les jeunes adultes1,2. TBI provoque de nombreux décès chaque année, et les survivants éprouvent une variété de handicaps physiques, psychiatriques, émotionnels et cognitifs. Par conséquent, l'ITC est un lourd fardeau pour la famille et les ressources sociétales d'un patient. TBI implique à la fois les lésions cérébrales primaires qui se produisent au moment du traumatisme et les lésions cérébrales secondaires qui se développent des heures à des mois après les blessures initi....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Protocole

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Toutes les procédures effectuées ont été approuvées par le Comité expérimental d'éthique animale de l'Université du Zhejiang. Tous les instruments et matériaux utilisés en chirurgie sont stériles. Le proceudre TBI prend environ 20 minutes.

1. Soins aux animaux

  1. Utilisez des souris mâles de 5 à 6 semaines C57BL/6J (20-25 g de poids) dans cette expérience.
  2. Maintenir les souris sur un cycle de 12 h/12 h de lumière/obscurité, et assurez-vous qu'elles reçoivent de la nourriture et de l'eau ad libitum. Fournir les mêmes quantités de nourriture et d'eau aux groupes fictifs et TBI tout au long de l'étude.
  3. Faites tous le....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Résultats

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

L'établissement de l'ITC est indiqué à la figure 1. Après anesthésie et désinfection, le cuir chevelu a été incisé sagittalement (Figure 1A). Une craniotomie (3 mm de diamètre) a été trephined dans le crâne sur le cortex pariétal droit avec une perceuse électrique, le dura a été maintenu intact (Figure 1B, C). Une canule de dommages en plastique a été placée au-dessus de la fenêtre d.......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Présenté ici est un protocole simple et efficace pour déterminer les changements dans le microbiote cécal après TBI chez les souris. L'induction des lésions cérébrales et la collecte d'échantillons de contenu de caecum sont des parties critiques du protocole.

Bien que les chercheurs aient étudié les changements du microbiote intestinal à la suite de l'ITC, les lésions cérébrales utilisées dans ces études étaient l'ICC- 8 et les modèles induits par la baissede poids et l.......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Déclarations de divulgation

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Les auteurs remercient sincèrement Baohong Wang pour ses conseils techniques.

Remerciements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Les auteurs n'ont rien à révéler.

....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Kit d’isolement de l’ADN  ;QIAGEN51604Pour la purification rapide de l’ADN génomique à partir d’échantillons de selles
Service d’analyse génétiqueGENEWIZService d’analyse génétique
Coussin chauffantShanghai SAFE Biotech Co.Injecteur de coussin chauffantTR-200
Le premier hôpital affilié, école de médecine, l’injecteur de l’Université
Dispositif LFPIVirginia
Commonwealth University		FP302Dispositif LFPI
Micro exercice crânienRWD Life Science78061Micro exercice crânien
Povidone IodeLe premier hôpital affilié, École de médecine, Université duPovidone Iode
du Zhejiang Zhejiang

Références

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cheng, P., et al. Trends in traumatic brain injury mortality in China, 2006-2013: A population-based longitudinal study. 14, e1002332(2017).
  2. Maas, A. I. R., et al. Traumatic brain injury: integrated....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Réimpressions et autorisations

Demander l’autorisation de réutiliser le texte ou les figures de cet article JoVE

Demander une autorisation

Mots-clés

Microbiote intestinalpercussion fluidique lat rales quen age de l ADNr 16Saxe microbiote intestin cerveaumod le murinanalyse histologiqueanalyse du microbiomeaxe intestin cerveau

Articles connexes