L'échantillonnage continu de sang dans la tomographie d'émission de positron de petit animal/tomographie calculée permet la mesure de la fonction d'entrée artérielle

La tomographie par émission de positrons/tomographie calculée (TEP/TC) est une technologie d'imagerie nucléaire qui permet de visualiser les processus métaboliques dans l'organisme après l'injection d'un ligand étiqueté radioactif, également appelé traceur. Alors que le ligand est une molécule qui est impliquée dans une voie métabolique ou cible les protéines de surface cellulaire, l'étiquette radioactive est un radionucléide émettant du positron. Les rayons gamma sont indirectement émis par la désintégration du positron et permettent la détection de sa distribution dans l'organisme avec des détecteurs de TEP extracorporelles. De cette façon, différentes molécules cellulaires peuvent être ciblées : récepteurs et transporteurs de neurotransmetteurs, processus métaboliques comme la glycolyse ou des protéines mitochondriales comme la protéine translocator 18 kDa (TSPO) pour détecter les cellules gliales activées.

Dans la recherche préclinique, le TEP/CT est une méthode attrayante pour étudier les processus biochimiques d'une manière non-invasive in vivo, permettant ainsi des études longitudinales. Les données de TEP/CT appuient l'analyse des mécanismes de la maladie, l'évaluation des caractéristiques et de la pharmacocinétique des nouveaux médicaments et la validation des radiotraceurs actuels et nouveaux pour la recherche translationnelle.

Au cours des analyses PET/CT, trois états traceurs peuvent être définis (exemple du modèle de compartiment à 2 tissus) : Premièrement, le traceur circule dans le sang après son application (état 1; conc._[sang]). Deuxièmement, il pénètre dans le tissu par le lit capillaire et peut-il soit se déplacer librement dans l'espace extracellulaire ou est inspécifiquement lié à diverses structures cellulaires ou extracellulaires (état 2; conc._[unspec]). Troisièmement, le traceur peut être spécifiquement lié (avec ou sans piégeage métabolique) à sa molécule cible (état 3, conc._[spec]). Tous ces processus dynamiques entre les compartiments sont dans une certaine mesure bidirectionnels et les processus de diffusion sont décrits par des constantes de taux (K1, K2, K3 et k4). Bien que la concentration du traceur dans le sang (c.-à-d. l'état 1) soit appelée « Entrée », la concentration de traceurs liés de manière spécifique et spécifique (c.-à-d. état 2 et état 3) est appelée « Sortie » et peut être directement dérivée de l'image PET. Cette relation physiologique peut être affichée dans le modèle de compartiment à 2 tissus (figure 1).

Figure 1 : Le modèle compartimenté à deux tissus. Les conditions physiologiques des trois états traceurs différents et les processus dynamiques entre eux sont affichés. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.

Dans le cas idéal, le conc._[spec] est proportionnel à la concentration de sa molécule cible. Toutefois, la production de la mesure PET/CT est la somme de conc._[spec] et conc._[unspec]. Pour déterminer le conc._[spec] dans la région d'intérêt, en parallèle, le conc._[unspec] d'une région de référence dépourvue de la protéine/voie cible est déterminé. En utilisant des équations mathématiques appropriées, on peut maintenant calculer conc._[spec], le plus souvent en utilisant le modèle de compartiment (une approche de modélisation bio-cinétique). Cependant, dans de nombreux cas, une telle région de référence dépourvue de la protéine cible n'est pas disponible^1,2. Dans ces cas, le conc._[sang] peut être utilisé pour déterminer conc._[spec]. Puisque le conc._[sang] varie en raison de l'effacement différent de foie et de rein, de l'excrétion, du flux sanguin, de la pénétration différente de barrière hémato-encéphalique et des facteurs liés à la maladie^3,l'étalon-or actuel est de mesurer le conc._{[ en} parallèle à la TEP/TDM par prélèvement sanguin continu. Cela donne la fonction d'entrée artérielle (AIF), qui est définie comme conc._[sang] au fil du temps⁴. Il est à noter que l'échantillonnage continu du sang est considéré comme techniquement très difficile, en particulier chez les petits animaux comme les rats ou les souris⁵.

Ici, nous fournissons un protocole facile et pratique pour échantillonner continuellement le sang des rats par l'intermédiaire d'un shunt artériovenous (a-v) entre la veine fémorale et l'artère. Couplé à un système de détecteur-pompe disponible dans le commerce, nous sommes en mesure de générer un aIF continu en temps réel lors de la dynamique [¹⁸F]fluorodeoxyglucose ([¹⁸F]FDG)-PET/CT scans chez les rats et l'a comparé à des approches alternatives. La formation image de PET/CT a été exécutée dans les rats dawley mâles de sprague à un âge de 4 mois avec un poids moyen de 462 g - 33 g (déviation moyenne et standard) utilisant un balayage de PET/CT de multimodality.

Étant donné qu'une grande variété d'appareils est utilisé au cours de la série de mesures (étalonneur de dose, échantillonneur de sang en ligne, TEP/CT et compteur de puits), une procédure de contrôle de la qualité appelée étalonnage croisé est nécessaire pour vérifier l'exactitude quantitative de tous les systèmes et pour compenser les différences. L'étalonnage croisé dans le contexte de l'échantillonnage sanguin en ligne signifie que le taux de comptage d'une concentration d'activité donnée mesurée dans des images corrigées de TEP peut être converti en concentration mesurée avec le système twilite pour la même concentration. Par conséquent, une procédure d'étalonnage croisé entre le TEP/CT, le système d'échantillonnage de sang et le compteur de puits a été établie.

Cette méthodologie hautement standardisée fournit une approche puissante pour quantifier les processus métaboliques et cellulaires dans la recherche préclinique sur les petits animaux et constitue un moyen élégant d'améliorer la fiabilité et la reproductibilité du SIA. L'AIF peut ensuite être utilisé pour quantifier le traceur spécifiquement lié dans les tissus dans les données précliniques TEP/CT à l'aide de la modélisation biocinétique.

Toutes les manipulations et expériences sur les animaux ont été approuvées par le Comité national de recherche sur les animaux du Mecklembourg-Poméranie occidentale (LALLF M-V/7221.3-1.1-004/18, approbation: 03.04.2018). Les expériences ont été réalisées conformément aux Lignes directrices de l'ARRIVE.

REMARQUE : Les animaux ont été gardés dans des conditions standard (22 '2 'C, 12 h jour et nuit cycle) avec de l'eau et de la nourriture ad libitum. Tous les équipements nécessaires à la préparation du système de shunt, à la procédure d'exploitation et aux mesures réelles sont répertoriés dans le Tableau des matériaux.

1. Préparation et intervention chirurgicale pour le cathétérisation de l'animal

1. Jeûnez l'animal pendant au moins 12 h avec un accès gratuit à l'eau. Pour l'anesthésie, placez le rat dans une chambre d'induction et remplissez-le continuellement avec un mélange d'oxygène/isoflurane. Pour l'utilisation d'initiation 2.5-3.5% isoflurane et pour l'entretien 1.5-3.0% (taux de flux de 1.2-1.5 L/min).
   REMARQUE : Le jeûne est nécessaire pour les études utilisant le traceur [¹⁸F]FDG, mais pas pour d'autres traceurs. Il est recommandé de mesurer les taux sanguins de glucose à l'aide de tirages manuels de sang décrits à la section 4 afin d'assurer des valeurs stables ou de corriger la modélisation cinétique.
2. Placez le rat anesthésié en position dorsale sur un tapis chauffant, sous le microscope chirurgical et ajoutez de l'onguent vétérinaire sur ses yeux. Surveiller et maintenir la température corporelle du rat en permanence pendant l'expérience (37 à 0,5 oC) à l'égard d'une sonde rectale.
3. Tapez les pattes du rat à la surface de travail pour tenir les jambes en position. Désinfecter le site d'opération à l'avance à l'œil d'un désinfectant muqueux et raser la jambe et l'entrejambe (côté opération) du rat. Terminer avec un nettoyage final avec le désinfectant.
4. Faire une incision d'environ 20 mm à l'aide de forceps chirurgicaux et de ciseaux à l'aine du rat. Disséquer les couches fines de la peau et exposer la veine fémorale, l'artère et le nerf avec les micro forceps. Placez deux filaments fins sous chaque veine fémorale et artère.
5. Sceller la veine et l'artère avec chaque filament distal et tenir sous tension avec une pince à bulldog.
   Utilisez les filaments de suture proximal pour faire pression sur le navire à l'aide des pinces à bulldog (sans noeud).
6. Bloquer la veine avec une pince d'anévrisme proximal, mais 2-3 mm distal de la suture avec la pince bulldog. Utilisez des ciseaux cornéens pour faire une petite incision dans la veine (1/3 du diamètre) et enlever le sang qui fuit avec un échange de coton stérile. Dilate la veine avec un forceps terne et la tenir ouverte. Insérez le cathéter aiguisé (diamètre intérieur [ID] : 0,58 mm, diamètre externe [OD] : 0,96 mm) dans la veine et poussez-le dans une direction proximale, jusqu'à l'anévrisme.
7. Ouvrez le clip d'anévrisme et poussez le cathéter plus loin dans la direction proximale (environ 2-3 cm), si le cathéter est placé à droite, le sang coulera dans le cathéter. Fixer le cathéter avec la suture proximale en faisant deux noeuds; si nécessaire, placez une suture supplémentaire autour de la veine et du cathéter. Vérifiez la fonctionnalité du cathéter en rinçant et en s'aspirant à l'utilisation d'une seringue à insuline (aiguille de 30 G) remplie de 100 l de solution saline héparinisée (50 unités/mL).
8. Placez le cathéter dans l'artère en répétant les étapes 1.6 et 1.7.
9. Lorsque les deux cathéters sont correctement placés, fermez la jambe avec des sutures et transportez l'animal jusqu'au PET/CT.
   REMARQUE : Soyez aussi prudent que possible avec les cathéters pendant le transport de l'animal, sinon le déplacement du cathéter pourrait se produire.

2. Configuration du système de shunt

Figure 2 : Schéma de la configuration de mesure. (A) Dessin schématique de la configuration de mesure. (B) Photo du système de shunt connecté avec le détecteur de twilite, la pompe péristétique et différents types de connecteurs. Le cours temporel de la radioactivité dans le sang d'un rat est détecté tandis que l'animal (1) est scanné dans le PET/CT (2). Par conséquent, le cathéter artériel (a) et veineux (b) est relié au système de pompe détecteur par l'intermédiaire de pièces d'adaptateur (connecteur orange, connecteur bleu et connecteur vert). Le sang artériel est ensuite pompé du cathéter artériel par le détecteur (3) à une pompe péristtaltique (4) et de nouveau dans le corps par le cathéter veineux. Une valve à trois voies (7) est intégrée dans le système de tube pour effectuer l'injection de traceur, les tirages manuels de sang et le rinçant. Une pièce En (8) est assemblée pour injecter de l'activité. Le détecteur est connecté à un ordinateur pour visualiser, calibrer et corriger les données sanguines continues. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.

1. Couper 6 parties du tube en polyéthylène (FBPT) (ID: 0.58 mm, OD: 0.96 mm) avec une longueur de c '735 mm; e 100 mm; f 171 mm, g 875 mm; h 90 mm et i 75 mm (Figure 2). Couper 8 parties des tubes de pompe en silicone (noir/noir/noir, ID: 0,76 mm, OD: 2,48 mm) d'une longueur d'environ 20 mm.
2. Connexions de réduction de place (de 2,5 mm à 1,5 mm DI) aux deux extrémités du tube de pompe en silicone d (jaune/bleu/jaune, ID : 1,52 mm, OD : 3,20 mm). Placez une partie préparée de 20 mm des tubes de silicone (noir/noir/noir) à l'autre extrémité des connecteurs de réduction utilisés (voir le connecteur bleu dans la figure 2).
3. Placez la partie c préparée du FBPT dans le connecteur bleu assemblé à l'une des extrémités du tube de pompe en silicone d (jaune/bleu/jaune) et la partie préparée e du FBPT dans le bleu de connecteur assemblé sur le l'autre extrémité. Placez une partie préparée de 20 mm des tubes de silicone (noir/noir/noir) sur les extrémités de deux T-pièces 5 et 6 (tube T-connector ID: 1.5 mm; voir connecteur vert dans la figure 2).
4. Connectez l'extrémité libre de la partie e du FBPT sur le côté gauche du connecteur vert assemblé (5) et placez la partie préparée f du FBPT du côté opposé du connecteur vert (5). Placez l'extrémité libre de la partie f du FBPT sur le côté gauche du vert connecteur assemblé (6) et placez la partie g préparée du FBPT du côté opposé du connecteur vert (6). Ajouter la partie h préparée du FBPT à l'extrémité libre du connecteur vert assemblé (5) et la partie i préparée du FBPT à l'extrémité libre du vert connecteur assemblé (6).
5. Connectez un combi-stopper à une aiguille hypodermique (G 23 x 1 1/4'/0,60 mm x 30 mm) et ajoutez-le à une valve à trois voies. Placez la soupape à trois voies préparée avec l'aiguille à l'extrémité libre de la partie h du FBPT. Connectez un combi-stopper à une aiguille hypodermique et placez l'aiguille à l'extrémité libre de la partie i du FBPT.
   REMARQUE : Avant de commencer l'échantillonnage sanguin en ligne, voir la section 5.
6. Mettez les extrémités libres de la partie c et g du FBPT dans un bécher de 100 ml rempli de 20 ml de solution saline héparinisée (50 unités/mL). Démarrer la pompe péristatique avec un débit de 1,52 ml/min afin que le système de shunt soit complètement rempli de la solution saline physiologique. Ensuite, mettre trois pinces à ciseaux aux extrémités de la partie c et g et au milieu de la partie i du FBPT.
7. Relâchez les pinces à ciseaux de la partie c et g du FBPT. Connectez le cathéter artériel a à l'extrémité libre de la partie c du FBPT et connectez le cathéter veineux b à l'extrémité libre de la partie g du FBPT (voir connecteur orange à la figure 2).

3. Acquisition et reconstruction d'images

1. Placez l'animal en position tête sur la palette du lit de la navette (70 mm). Contrôlez la respiration du rat et maintenez la température corporelle à 37 à 0,5 oC à l'aide d'un coussin chauffant et d'une sonde rectale tout au long de l'acquisition de l'image. Déplacez le lit de la navette vers la position de lit allongée pour l'injection (pré-acquisition) et connectez les cathéters insérés au système de shunt.
2. Maintenir l'animal sous anesthésie avec de l'isoflurane (2,5% d'isoflurane en oxygène, débit de 1,2 à 1,5 L/min) via un cône nasal.
3. Démarrer la pompe péristatique avec un débit de 1,52 ml/min pour remplir le système de shunt avec le sang de l'animal. Déplacez le lit de la navette vers le centre du champ de vision de l'anneau de détection de TEP et démarrez le système d'échantillonnage sanguin en ligne (voir la section 5).
4. Démarrer le flux de travail PET/CT à l'aide de paramètres décrits à la section 3.5 après 60 s et ensuite injecter une dose d'environ 22 MBq [¹⁸F]FDG dans un volume d'environ 0,5 à 0,1 ml par voie intraveineuse par l'intermédiaire de la pièce T. Rincer la pièce T avec environ 150 l de solution saline héparinisée par la suite.
5. Acquérir un TEP dynamique de plus de 60 min et une tomodensitométrie à la fin de l'imagerie TEP.
   1. Pour l'acquisition d'émissions de TEP, définir 3600 s (60 min) dans l'option d'acquisition par le temps. Sélectionnez Le F-18 comme isotope d'étude et utilisez 350 à 650 keV comme niveau d'énergie et 3 438 ns comme fenêtre de chronométrage.
   2. Pour l'acquisition de CT, sélectionnez l'atténuation de l'option d'acquisition. Dans le champ des paramètres de projection, choisissez 120 projection s'agit d'une rotation totalede moitié. Pour le champ de vision (FOV) et les paramètres de résolution, sélectionnez faible comme grossissement et 4 x 4 comme liaison avec 275 mm de longueur de balayage axiale et 3328 px comme taille de CCD transaxial. Dans le champ des paramètres d'exposition, définir 500 'A pour le courant, 80 kV pour la tension et 180 ms pour le temps d'exposition.
   3. Pour l'histogramme d'émission de PET, définiz une série de 20 images (6 x 10 s, 8 x 30 s, 5 x 300 s et 1 x 1800 s) comme cadragedynamique. Sélectionnez soustraire comme retards. Choisissez dans le champ de réglages avancés 128 que la largeur de sinogramme, 3 comme envergure, 79 comme différence d'anneau et correction de temps mort.
   4. Pour la reconstruction PET, utilisez la maximisation des attentes de sous-ensembles commandés en deux dimensions (2D-OSEM) avec un sinogrammede diffusion, d'application et d'enregistrement de la diffusion, 4 itération et Fourier pour le rebinning comme algorithmede reconstruction. Sélectionnez 128 x 128 comme taille de matrice et utilisez 1 comme zoom d'image, tous comme cadres et tous comme segments.

4. Procédure d'échantillonnage manuel du sang

1. Effectuer un échantillonnage manuel du sang 30 s, 60 s, 90 s, 600 s et 1800 s après le début de l'acquisition d'imagerie.
   REMARQUE : Il est fortement recommandé d'augmenter le nombre de prises de sang manueles, surtout dans la première minute suivant l'injection de traceurs. Par conséquent, le volume de l'échantillon de sang doit être réduit à 20-30 L par échantillon⁶.
   1. Ouvrez la première valve à trois voies et collectez 100 l de sang artériel dans une collecte de sang capillaire EDTA tube 30 s après injection traceur. Répétez l'opération pour les autres points de temps. Déterminez le poids du tube vide et du tube rempli de sang.
   2. Mesurer l'activité (compte/unité temporelle) du sang entier pendant 180 s dans un compteur de puits, qui est ensuite recensé pour obtenir des données en kBq/mL. Enregistrez l'heure de début de la contre-mesure du puits. Calculez l'activité du sang entier pour chaque point de temps de l'échantillonnage manuel de sang dans kBq/mL, appliquez la correction de carie et transférez les données dans une courbe d'activité de temps.

5. Procédure de l'échantillonnage sanguin en ligne

1. Placez le tube dans le détecteur à l'aide du guide du tube. Démarrer le logiciel de prélèvement de sang (p. ex. PSAMPLE) et ouvrir l'interface d'acquisition. Assurez-vous que l'ordinateur de la configuration d'échantillonnage de sang en ligne et de la TEP / CT est synchronisé dans le temps.
2. Appuyez sur le bouton de démarrage exactement 60 s avant que le traceur est injecté pour acquérir suffisamment de données pour la correction de fond. Enregistrez les données brutes via le bouton enregistrer dans la base de données PMOD après la mesure.
3. Pour la correction et l'étalonnage des données sanguines en ligne, passez à l'interface de correction. Activez la correction de désintégration et sélectionnez 18 F. Définissez l'heure de début de l'acquisition d'image et activez le bouton moyen pour effectuer la correction de fond. Activer l'étalonnage et le type dans le facteur d'étalonnage précédemment déterminé (voir la section 7.1).
4. Enregistrez les données sanguines corrigées et calibrées à l'aide du bouton Save TAC et choisissez le fichier blood.crv. Ce fichier peut alors être chargé comme courbe d'entrée de sang entier dans l'outil de modélisation cinétique et la modélisation cinétique peut être effectuée. Découpler les cathéters du système de shunt extra corporel.
5. Détachez l'animal du scanner PET/CT et euthanasiez-le avec du pentobarbital.
   REMARQUE : Dans cette expérience, les animaux ont été euthanasiés après les mesures pendant que les cerveaux ont été employés pour des analyses in vitro dans la conception expérimentale. Avec cette configuration, les mesures répétées dans les études longitudinales sont également implémentables⁷. Utilisez un système de tube complètement nouveau pour le prochain animal.

6. Fonction d'entrée dérivée d'image

1. Ouvrez l'outil Fuse it sur PMOD. Chargez l'image PET comme entrée et le CT comme référence. Cliquez déjà assorti.
2. Ouvrez l'outil voxel d'intérêt (VOI). Placez le curseur dans l'aorte ascendante dans le CT. Cliquez sur VOI sphérique prédéfini. Définir un rayon d'exactement 0,7 mm. Extraire les informations d'activité temporelle avec le bouton statistique VOI et copier les valeurs moyennes au presse-papiers.

7. Procédure d'étalonnage croisé du système twilite, PET/CT et compteur de puits

1. Twilite-PET/CT-calibrage
   REMARQUE : Le flux de travail présenté pour l'étalonnage de la twilite est en partie basé sur les procédures décrites dans le manuel de référence du module PSAMPLE de PMOD.
   1. Remplissez une seringue avec environ 100 MBq de [¹⁸F]FDG. Mesurez l'activité exacte A_F à l'égard d'un étalonneur à dose calibré et documentez-le avec la date et l'heure de la mesure et le volume de la seringue complète. Le temps enregistré est le point de référence pour toutes les corrections de pourriture à effectuer.
   2. Remplir un bécher de 500 ml d'eau du robinet. Le volume exact est déterminé par la méthode de pesage. Mesurer le poids m_e du bécher vide à l'aide d'une échelle de précision appropriée et calibrée (au moins la classe II de précision). Remplir le bécher avec l'eau du robinet et mesurer le poids m_f du bécher complet.
   3. Calculer le volume V_b du bécher en utilisant la différence de la masse et la densité de l'eau du robinet (r -0,998 g/mL à 20 oC) :
      
   4. Injecter le [¹⁸F]FDG dans le bécher rempli et remplir la seringue vide à son volume d'origine avec de l'eau du robinet inactive et mesurer l'activité A_E de la seringue remplie dans le caler de dose. La concentration d'activité c_b de la solution dans le bécher est donnée par , qui devrait être d'environ 200 kBq/mL.
   5. Remplissez un tube conique de centrifugeuse de 50 ml avec la solution du bécher (éviter les grosses bulles d'air) et placez-le au centre dans le champ de vision du scanner PET/CT. Remplissez un cathéter identique au type utilisé dans l'expérience d'imagerie TEP/CT et placez-le dans le guide tube du système de twilite. Remplissez le cathéter avec la solution traceur du bécher à l'aide de la pompe péristatique.
   6. Commencez la mesure de la courbe d'activité temporelle telle que décrite à la section 5, en utilisant le même paramètre pour le temps d'intégration, et en rebinning comme dans l'expérience, sans un guide cathéter à l'intérieur de la tête de mesure. Cette étape assure l'acquisition de suffisamment de données pour une correction de fond appropriée. Après 2 min, sans arrêter l'acquisition de données du système de twilite, placez le guide de cathéter avec le tube rempli dans la tête de mesure, et continuez l'acquisition de données pendant environ 5 min.
   7. Démarrer une acquisition de 10 min PET du tube conique de centrifugeuse de 50 ml en parallèle suivie d'une acquisition cT standard pour la correction d'atténuation. Reconstruire une image PET statique du tube conique centrifugeur de 50 ml à l'aide du même algorithme de reconstruction de TEP et des paramètres décrits dans la section 3. Utilisez un outil d'imagerie post-traitement (p. ex. PVIEW) et placez un VOI cylindrique couvrant environ 70 % du volume à l'intérieur des images PET reconstruites du tube conique de centrifugeuse de 50 ml. Extraire la concentration d'activité moyenne c_PET dans kBq/mL dans le VOI.
   8. Retournez au logiciel de l'échantillonneur de sang et utilisez le mode d'étalonnage pour corriger le TAC acquis pour la pourriture, la fraction de ramification et l'arrière-plan. Ajoutez toutes les informations nécessaires pour le nucléide, la concentration d'activité et l'heure de début de l'acquisition de TEP. En interne, le logiciel extrait le taux de comptage mesuré avec le système de twilite (CR_twilite) et calcule le facteur d'étalonnage croisé pour le TEP et le système twilite (CF_PET/twilite) :
      
      REMARQUE : Il est important que le même isotope soit utilisé pour les expériences d'étalonnage et de TEP/CT, car la fraction de ramification varie entre les différents isotopes, ce qui est corrigé dans le processus de reconstruction du TEP. Cette procédure doit être répétée régulièrement en termes de contrôle de la qualité, si des composants importants du système sont modifiés (p. ex. tubes, paramètres d'acquisition et de reconstruction) et après des travaux de réparation.
2. Étalonnage du contre-puits PET/CT
   1. Pour calculer le facteur d'étalonnage CF_bien-contrer du compteur de puits, utilisez la même solution d'activité qui a été produite dans le bécher pour l'étalonnage du système twilite. Attendez environ 6 h pour permettre la réduction de l'activité spécifique par la décomposition afin de minimiser les effets de temps mort du détecteur de scintillation du compteur de puits. Couvercle du bécher pour éviter l'évaporation.
   2. Calculez le décalage horaire exact jusqu'au point de référence et déterminez la concentration d'activité réelle c_b(t₎ de la solution du bécher en corrigeant la concentration d'activité d'origine. Pipette a prédéfini des volumes (échantillonV)qui sont identiques au volume des échantillons de sang mesurés dans les expériences (p. ex., 200 l), du bécher en cinq tubes de verrouillage sécuritaire. Mesurer l'activité de chacun des cinq tubes avec le compteur de puits pendant 180 s.
      REMARQUE : Si le coefficient de variation pour une seule mesure est supérieur à 1 %, le temps de mesure devrait être augmenté. Enregistrez le taux de comptage mesuré en nombres par minute [cpm] pour chaque tube et l'heure de début de la mesure. Effectuer une correction de désintégration.
   3. Calculer le facteur d'étalonnage CF_bien-contrer pour chaque mesure en divisant le taux de décomposition corrigé CR_bien-contrer du compteur de puits par la concentration d'activité corrigée de décomposition du bécher c_{beaker (t)}:
      
   4. Moyenne des cinq facteurs d'étalonnage pour obtenir le facteur d'étalonnage moyen.

La configuration du système de shunt est affichée dans la figure 2. Les résultats représentatifs des données d'échantillonnage continu du sang par rapport aux données manuelles d'échantillonnage du sang chez trois rats de type sauvage sur une période de 30 min sont présentés à la figure 3A,C. Au début de l'échantillonnage sanguin continu, un pic initial (maximum de concentration en radioactivité) peut être observé à 5 s après l'injection de traceurs. Ensuite, l'activité dans le sang diminue rapidement et atteint un plateau à environ 15 min. Dans les données manuelles d'échantillonnage du sang, le pic détecté est plus petit et le plateau n'est pas facile à définir (Figure 3A,C). La comparaison de l'échantillonnage sanguin continu aux données dérivées de l'image est affichée dans la figure 3B,D. Dans les données dérivées de l'image, le pic et le point de départ du plateau sont clairement visibles, néanmoins le maximum du pic est plus petit par rapport aux données continues d'échantillonnage du sang pour tous les animaux (Figure 3B,D).

Un résultat sous-optimal de l'échantillonnage continu de sang avec notre configuration est montré dans la figure 3E,F. Au début de l'échantillonnage sanguin continu, aucune acquisition de données dans les 3,5 premières minutes n'a été possible en raison de la coagulation du sang. En déconnectant le système de tube à l'orange de connecteur et flottant avec la solution saline héparinisée, le flux dans le système de tube a été redémarré et la mesure a continué. Un pic peut être vu à environ 4 min, ce qui n'enregistre pas le maximum de radioactivité dans le sang (Figure 3E,F). L'échantillonnage manuel du sang (figure3E) et les analyses dérivées d'images (figure 3F) étaient encore possibles et comparables aux résultats corrects.

Figure 3 : Résultats représentatifs de l'échantillonnage sanguin continu par rapport à l'échantillonnage manuel de sang. Les fonctions d'entrée artérielle typiques dérivées de l'échantillonnage sanguin continu par rapport à l'échantillonnage manuel du sang (colonne gauche) et à l'échantillonnage continu du sang par rapport à l'approche dérivée de l'image (colonne droite) sont montrées. Les panneaux A-D démontrent les résultats de la mise en œuvre correcte du protocole chez deux animaux différents. Les panneaux E et F illustrent un résultat sous-optimal de la mesure. Toutes les données présentées ont été corrigées pour le facteur d'étalonnage croisé et l'arrière-plan. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.

Les auteurs n'ont rien à révéler.