L'hémisection spinale thoracique de rat est un modèle valable et reproductible des dommages unilatéraux de moelle épinière pour étudier les mécanismes neurals de la récupération locomotrice et de l'efficacité de traitement. Cet article comprend un guide détaillé étape par étape pour effectuer la procédure d'hémisection et d'évaluer les performances locomotrices dans une arène de champ ouvert.
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Article de méthode
Chirurgie de l'hémisection de la moelle épinière thoracique et évaluation locomotrice à champ ouvert chez le rat
Dans cet article
Résumé
Résumé
Les lésions de la moelle épinière (SCI) causent des perturbations dans la fonction motrice, sensorielle et autonome au-dessous du niveau de la lésion. Les modèles animaux expérimentaux sont des outils précieux pour comprendre les mécanismes neuronaux impliqués dans la récupération locomotrice après SCI et pour concevoir des thérapies pour les populations cliniques. Il existe plusieurs modèles expérimentaux de SCI, y compris la contusion, la compression et les blessures par transsection qui sont utilisés dans une grande variété d'espèces. Une hémisection implique la transection unilatérale de la moelle épinière et perturbe toutes les voies ascendantes et descendantes d'un seul côté. L'hémisection spinale produit une blessure fortement sélective et reproductible par rapport aux techniques de contusion ou de compression qui est utile pour étudier la plasticité neurale dans les voies épargnées et endommagées liées à la récupération fonctionnelle. Nous présentons un protocole étape par étape détaillé pour effectuer une hémisection thoracique au niveau vertébral de T8 dans le rat qui a comme conséquence une paralysie initiale du membre postérieur sur le côté de la lésion avec le rétablissement spontané gradué de la fonction locomotrice au-dessus de plusieurs Semaines. Nous fournissons également un protocole de notation locomoteur pour évaluer la récupération fonctionnelle dans le champ ouvert. L'évaluation locomotrice fournit un profil de récupération linéaire et peut être effectuée à la fois tôt et à plusieurs reprises après les blessures afin de filtrer avec précision les animaux pour les points de temps appropriés dans lesquels effectuer des tests comportementaux plus spécialisés. La technique d'hémisection présentée peut être facilement adaptée à d'autres modèles et espèces de transection, et l'évaluation locomotrice peut être utilisée dans une variété de SCI et d'autres modèles de blessures pour marquer la fonction locomotrice.
Introduction
Les dommages de moelle épinière (SCI) sont associés aux perturbations graves dans la fonction motrice, sensorielle, et autonome. Les modèles animaux expérimentaux de SCI sont des outils précieux pour comprendre les événements anatomiques et physiologiques impliqués dans la pathologie de SCI, pour étudier les mécanismes neuronaux dans la réparation et la récupération, et pour dépister l'efficacité et l'innocuité de la thérapeutique potentielle Interventions. Le rat est l'espèce la plus couramment utilisée dans la recherche SCI1. Les modèles de rat sont peu coûteux, faciles à reproduire, et une grande batterie de tests comportementaux sont dispon....
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Protocole
Les expériences décrites dans cet article ont été réalisées conformément aux lignes directrices du Conseil canadien de protection des animaux et ont été approuvées par le comité d'éthique de l'Université de Montréal.
1. Chirurgie de l'hémisection thoracique
- Portez l'équipement de protection approprié (gants, masque et robe) pour maintenir un environnement aseptique pour la chirurgie. Nettoyez la zone chirurgicale avec des lingettes d'alcool, et placez des rideaux chirurgicaux stériles sur le champ chirurgical. Stériliser les outils chirurgicaux et les placer sur le terrain chirurgical.
- Anesthésiez le rat sous un mélange ....
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Résultats
Des lésions reproductibles avec un degré élevé de cohérence peuvent être générées avec la technique d'hémisection. Pour évaluer et comparer des tailles de lésions entre les groupes expérimentaux, la zone maximale de la lésion en pourcentage de la section transversale totale de la moelle épinière peut être facilement calculée avec la coloration histologique des sections de moelle épinière. La figure 1 montre une lésion représentative de l'hémicorde gauche et une couche de la proportion de la .......
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Discussion
Une force majeure de la technique d'hémisection est la sélectivité et la reproductibilité de la lésion qui conduit à une variabilité réduite dans les phénotypes histologiques et comportementaux entre les animaux25. Afin d'assurer une lésion unilatérale au niveau spinal approprié, l'identification précise du segment vertébral approprié et de la ligne médiane de moelle épinière est critique. Comme il peut y avoir une tendance pour la moelle épinière à tourner dans la direction de la coupe au cours d.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n'ont rien à révéler.
Remerciements
Ces travaux ont été appuyés par les Instituts de recherche en santé du Canada (IRSC; MOP-142288) à M.M. M.M. a été appuyé par une bourse salariale du Fonds de Recherche Québec Santé (FRQS), et A.R.B a été soutenu par une bourse de FRQS.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Baytril | CDMV | 11242 | |
| Ciseaux de dissection émoussée | World Precision Instruments | 503669 | |
| Buprénorphine hydrochlorure | CDMV | ||
| Objectif de caméra | Pentax | C31204TH | 12.5-75mm, f1.8, format 2/3", monture C |
| Caméra vidéo CMOS | Basler | acA2000-165uc | Format 2/3", 2048 x 1088 pixels, jusqu’à 165 ips, monture C, USB3 |
| Gaz d’oxygène comprimé | Praxair | ||
| Applicateurs à embout en coton | CDMV | 108703 | |
| Coupe-os délicats | Outils de science fine | 16109-14 | |
| Couteau à dissection | Outils de science fine | 10055-12 | |
| Pince fine Dumont | Outils de science | fine11254-20 | |
| Ethicon Vicryl 4/0 Violet Tressé FS-2 suture (J392H) | CDMV | 111689 | |
| Coussin chauffant contrôlé par rétroaction | Harvard Apparatus | 55-7020 | |
| Rats Long-Evans femelles | Charles River Laboratories | Code de souche : 006 | 225-250g |
| Gelfoam | CDMV | 102348 | |
| Pince à hémostatique incurvée | Fine Science Tools | 13003-10 | |
| Stérilisateur à billes chaudes | Fine Science Tools | 18000-45 | |
| Hydrogel | 70-01-5022 | Clear H20 | |
| Isofluorane | CDMV | 118740 | |
| Lactate Ringer’s solution | CDMV | 116373 | |
| Lidocaïne (2 %) | CDMV | 123684 | |
| Aiguille 30 ga | CDMV | 4799 | |
| Aire ouverte | Circulaire sur mesure | Arène en plexiglas 96 cm de diamètre, hauteur de paroi 40 cm | |
| Pommade ophtalmique | CDMV | 110704 | |
| Ordinateur personnel ; | Avec connectivité USB3 pour enregistrer des vidéos avec la caméra répertoriée | ||
| Saline physiologique | CDMV | 1399 | |
| Proviodine | CDMV | 4568 | |
| Rongeurs diététiques liquides | Bioserv | F1268 | |
| Lame de scalpal #11 | CDMV | 6671 | |
| Enrouleur auto-rétracteur | World Precision Instruments | 14240 | |
| Vannas iridectomie ciseaux à ressort | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Machine d’anesthésie vétérinaire et vaporisateur d’isofluarane | Dispomed | 975-0510-000 | |
| VLC lecteur multimédia | VideoLAN | videolan.org/vlc |
Références
- Sharif-Alhoseini, M., et al. Animal models of spinal cord injury: a systematic review. Spinal Cord. 55 (8), 714-721 (2017).
- Sedy, J., Urdzikova, L., Jendelova, P., Sykova, E. Methods for behavioral testing of spinal cord injured rats. Neuroscience and Biobeha....
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Réimpressions et autorisations
