Divulgation de la collection d’hémolymphe et inoculation des blastospores de Métarhizium dans les tiques de Rhipicephalus MICROPLUS vers les études de pathologie des invertébrés

Résumé

L’analyse de l’hémolymphe des tiques représente une source importante d’information sur la façon dont certains agents pathogènes causent la maladie et comment les tiques réagissent immunologiquement à cette infection. La présente étude montre comment inoculer les propagules fongiques et recueillir l’hémolymphe des femelles de Rhipicephalus MICROPLUS engorgés.

Résumé

Les tiques sont obligatoires ectoparasites hematophages et Rhipicephalus MICROPLUS a une grande importance en médecine vétérinaire parce qu’il provoque l’anémie, perte de poids, l’amortissement du cuir des animaux et peut également agir comme un vecteur de plusieurs agents pathogènes. En raison des coûts exorbitants pour contrôler ces parasites, les dommages à l’environnement causés par l’utilisation inappropriée d’acaricides chimiques, et la résistance accrue contre les parasiticides traditionnels, le contrôle alternatif des tiques, par l’utilisation de les champignons entomopathogènes, par exemple, ont été considérés comme une approche intéressante. Néanmoins, peu d’études ont démontré comment le système immunitaire de la tique agit pour combattre ces entomopathogènes. Par conséquent, ce protocole démontre deux méthodes utilisées pour l’inoculation ENTOMOPATHOGÈNE dans les femelles engorgées et deux techniques utilisées pour la collecte de l’hémolymphe et la récolte des hémocytes. L’inoculation de pathogènes à l’insertion de la jambe dans le corps de la femelle de tique permet l’évaluation des paramètres biologiques femelles contrairement à l’inoculation entre le Scutum et le capitulum, qui endommage fréquemment l’orgue de Gené. La collecte de l’hémolymphe dorsale a donné une récupération plus importante que la collecte par les jambes. Certaines limitations de la collecte et de la transformation de l’hémolymphe des tiques comprennent i) des taux élevés de perturbation des hémocytes, II) une contamination par l’hémolymphe avec un intestin moyen perturbé et III) une faible récupération du volume de l’hémolymphe. Lorsque l’hémolymphe est recueilli par la coupe des jambes, l’hémolymphe prend du temps pour s’accumuler à l’ouverture de la jambe, favorisant le processus de coagulation. En outre, moins d’hémocytes sont obtenus dans la collection par la jambe par rapport à la collection dorsale, même si la première méthode est considérée plus facile à effectuer. La compréhension de la réponse immunitaire dans les tiques médiées par des agents entomopathogènes aide à dévoiler leur pathogenèse et à développer de nouvelles cibles pour le contrôle des tiques. Les processus d’inoculation décrits ici exigent des ressources technologiques très faibles et peuvent être utilisés non seulement pour exposer les tiques à des microorganismes pathogènes. De même, la collecte de l’hémolymphe des tiques peut représenter la première étape pour de nombreuses études physiologiques.

Introduction

La tique du bétail, Rhipicephalus MICROPLUS, est un hématophage ectoparasite avec un énorme impact négatif sur le bétail dans les zones tropicales. Cette tique est le vecteur d’agents pathogènes tels que Babesia bovis, Babesia bigemina, et Anaplasma marginale qui, combinée avec les dommages hémoalimentaires directs, peut réduire le lait et la production de viande, provoquer l’anémie et, finalement, la mort. Les pertes causées par cette ectoparasite ont été estimées en 3,24 milliards dollars annuellement au Brésil¹. Des méthodes durables sont exigées et l’utilisation d’agents entomopathogènes est considérée co....

Protocole

Les tiques utilisées dans la présente étude ont été obtenues à partir d’une colonie artificielle, conduite à l’Université fédérale rurale de Rio de Janeiro, quelles méthodes ont été approuvées par le Comité d’éthique pour l’utilisation des vertébrés (CEUA-IV/UFRRJ #037/2014).

1. Cochez les femelles engorgées

1. Après la cueillette des tiques, lavez les femelles engorgées à l’aide d’eau du robinet et immergez-les dans une solution d’hypochlorite de sodium à 0,5% (v/v) pendant 3 min dans un récipient en verre de 500 mL, pour l’hygiène des cuticules (figure 1), puis séchez toutes les femelles à l’aide de se....

Résultats

Cet article aborde les méthodes de prélèvement de l’inoculation et de l’hémolymphe appliquées aux tiques. Après l’inoculation entre la cuisse de jambe et le corps de la femelle de tique, un certain liquide (hémolymphe) peut être sécrété pendant le processus; Cependant, il est important de noter que lorsque l’inoculation est terminée, aucun liquide ou aucun tissu n’est présent dans l’embout de l’aiguille ou au site d’inoculation, ce qui garantit que la suspension fongique a été complètemen.......

Discussion

L’inoculation d’agents pathogènes est utile lorsque l’étude vise à étudier l’action in vivo des microorganismes dans les modèles expérimentaux d’arthropodes, car elle assure que l’agent pathogène est à l’intérieur de l’hôte. La technique peut également être appliquée pour inoculer des molécules telles que l’interférence d’ARN (RNAi). L’inoculation entre le Scutum et le capitulum est considérée comme plus facile à effectuer mais endommage fréquemment l’orgue de Gené, ce qui compromet la viabilité des oeufs

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Solution alcaline d’hypochlorite	Sigma-Aldrich	A1727
D-(+)-Glucose	Sigma-Aldrich	G8270-1KG
EDTA	Synth	2706
Sérum de veau fœtal	Gibco	16000036
Caoutchouc souple	BD
Giemsa coloration	Sigma-Aldrich	48900-500ML-F
Capillaire en verre	CTechGlass	CT95-02
Seringue à insuline (aiguille)	BD	SKU :  ; 324910
KH2PO4	Vetec	60REAVET014512
Milieu de culture Leibovitz’s L-15  ;	Gibco	11415-064
Méthanol	Sigma-Aldrich	34860-1L-R
Lames de microscope	Kasvi	K5-7105
Microtubes	BRAND	Z336769-1PAK
Na2HPO4	Vetec	60REAVET014593
NaCl	Sigma-Aldrich	S7653-1KG
Chambre Neubauer  ;	Kasvi	K5-0111
Pénicilline	Gibco	15140163
protéase	Sigma-Aldrich	P2714
Tween 80	Vetec	60REAVET003662

Cocktail d’inhibiteursde