Mesure spécifique au cycle cellulaire de h2AX et d'apoptose après stress génotoxique par cytométrie de flux

Ramon Lopez Perez; Franziska Münz; Jonas Kroschke; Jannek Brauer; Nils  H. Nicolay; Peter  E. Huber

doi:10.3791/59968

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Article de méthode

Mesure spécifique au cycle cellulaire de h2AX et d'apoptose après stress génotoxique par cytométrie de flux

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DOI :

10.3791/59968

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1 septembre 2019

Ramon Lopez Perez¹^,² , Franziska Münz¹^,² , Jonas Kroschke¹^,² , Jannek Brauer¹^,² , Nils H. Nicolay¹^,²^,³ , Peter E. Huber¹^,²

¹CCU Molecular and Radiation Oncology, German Cancer Research Center, ²Department of Radiation Oncology, Heidelberg University Hospital, ³Department of Radiation Oncology, Freiburg University Medical Center

Dans cet article

Résumé

La méthode présentée combine l'analyse quantitative des ruptures à double brin d'ADN (DSB), de la distribution du cycle cellulaire et de l'apoptose pour permettre l'évaluation par cycle cellulaire de l'induction et de la réparation de l'ASD ainsi que les conséquences d'une défaillance de réparation.

Résumé

La méthode présentée ou les versions légèrement modifiées ont été conçues pour étudier les réponses spécifiques de traitement et les effets secondaires de divers traitements anticancéreux utilisés en oncologie clinique. Il permet une analyse quantitative et longitudinale de la réponse aux dommages à l'ADN après un stress génotoxique, induit par la radiothérapie et une multitude de médicaments anticancéreux. La méthode couvre toutes les étapes de la réponse aux dommages à l'ADN, fournissant des points de terminaison pour l'induction et la réparation des ruptures à double brin d'ADN (DSB), l'arrêt du cycle cellulaire et la mort cellulaire par apoptose en cas de défaillance de réparation. La combinaison de ces mesures fournit des informations sur les effets du traitement dépendant du cycle cellulaire et permet ainsi une étude approfondie de l'interaction entre la prolifération cellulaire et les mécanismes d'adaptation contre les dommages à l'ADN. Comme l'effet de nombreux traitements contre le cancer, y compris les agents chimiothérapeutiques et le rayonnement ionisant, est limité ou varie fortement selon les phases spécifiques du cycle cellulaire, les analyses corrélatives reposent sur une méthode robuste et faisable pour évaluer les effets du traitement. sur l'ADN d'une manière spécifique au cycle cellulaire. Ce n'est pas possible avec des essais à extrémité unique et un avantage important de la méthode présentée. La méthode n'est pas limitée à une ligne cellulaire particulière et a été soigneusement testé dans une multitude de tumeurs et de lignées cellulaires tissulaires normales. Il peut être largement appliqué comme un test complet de génotoxicité dans de nombreux domaines de l'oncologie en plus de la radio-oncologie, y compris l'évaluation des facteurs de risque environnemental, le dépistage des médicaments et l'évaluation de l'instabilité génétique dans les cellules tumorales.

Introduction

Le but de l'oncologie est de tuer ou d'inactiver les cellules cancéreuses sans nuire aux cellules normales. De nombreuses thérapies induisent directement ou indirectement le stress génotoxique dans les cellules cancéreuses, mais aussi dans certaines d'autres qui s'étendent dans les cellules normales. La chimiothérapie ou les médicaments ciblés sont souvent combinés avec la radiothérapie pour améliorer la radiosensibilité de la tumeur irradiée¹^,²^,³^,⁴^,⁵, ce qui permet une réduction de la dose de rayonnement p....