Blocage ciblé d'anticorps par un conjugaison bifonctionnel de peptide antigénique et de mimétrie fc-III (DCAF)

Xue Bai; Lin Zhang; Jin Hu; Xiuxiu Zhao; Jinheng Pan; Haiteng Deng; Shan Feng

doi:10.3791/60063

Article de méthode

Blocage ciblé d'anticorps par un conjugaison bifonctionnel de peptide antigénique et de mimétrie fc-III (DCAF)

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DOI :

10.3791/60063

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17 septembre 2019

Xue Bai^*¹^,² , Lin Zhang^*³ , Jin Hu² , Xiuxiu Zhao² , Jinheng Pan² , Haiteng Deng³ , Shan Feng¹^,²

¹Key Laboratory of Structural Biology of Zhejiang Province, School of Life Sciences, Westlake University, ²Mass Spectrometry Core Facility, School of Life Sciences, Westlake University, ³MOE Key Laboratory of Bioinformatics, Center for Synthetic and Systems Biology, School of Life Sciences, Tsinghua University

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Le développement d'une conjugaison bifonctionnelle de peptide antigénique et de mimétique Fc-III (DCAF) est nouveau pour l'élimination des anticorps nocifs. Ici, nous décrivons un protocole détaillé pour la synthèse de la molécule DCAF1, qui peut bloquer sélectivement l'anticorps 4G2 pour éliminer l'effet d'amélioration dépendant des anticorps pendant l'infection de virus de dengue.

Résumé

L'élimination des anticorps nocifs des organismes est une approche précieuse pour l'intervention de maladies associées aux anticorps, telles que la dengue hémorragique et les maladies auto-immunes. Puisque des milliers d'anticorps avec différentes épitopes circulent dans le sang, aucune méthode universelle, excepté la conjugaison dual-fonctionnelle du peptide antigénique et de la mimétique de Fc-III (DCAF), n'a été rapportée pour cibler les anticorps nocifs spécifiques. Le développement de molécules DCAF apporte une contribution significative aux progrès de la thérapie ciblée, qui ont été démontrés pour éliminer l'effet d'amélioration dépendante des anticorps (ADE) dans un modèle d'infection par le virus de la dengue (DENV) et pour stimuler l'acétylcholine l'activité des récepteurs dans un modèle de myasthénie gravis. Ici, nous décrivons un protocole pour la synthèse d'une molécule de DCAF (DCAF1), qui peut bloquer sélectivement l'anticorps 4G2 pour atténuer l'effet d'ADE pendant l'infection de virus de dengue, et illustrer la liaison de l'anticorps de DCAF1 à 4G2 par un test d'ELISA. Dans notre méthode, DCAF1 est synthétisé par la conjugaison d'un dérivé d'hydrazine d'un peptide fc-III et d'un recombinant exprimé longtemps -helix avec séquence antigénique par la ligature chimique indigène (NCL). Ce protocole a été appliqué avec succès à DCAF1 ainsi qu'à d'autres molécules d'ADFA pour cibler leurs anticorps cognate.

Introduction

Les anticorps jouent un rôle important dans la réponse immunitaire humoristique pour la neutralisation des bactéries pathogènes et des virus¹. Cependant, certains anticorps présentent des effets nocifs sur les organismes, tels que les anticorps réactifs croisés dans l'effet ADE pendant l'infection à DENV et les anticorps surréactifs dans les gravis de myasthénie, qui est une maladie auto-immune²^,³. L'effet ADE est médié par les anticorps réactifs qui font le pont pour relier les cellules de présentation de DENV et de récepteur fc⁴^,⁵