Quantification de l’adhérence des cellules tumorales dans les cryosections des ganglions lymphatiques

Elisa  Helena Farias Jandrey; Mayra  Akemi Kuroki; Anamaria  Aranha Camargo; Erico  Tosoni Costa

doi:10.3791/60531

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Article de méthode

Quantification de l’adhérence des cellules tumorales dans les cryosections des ganglions lymphatiques

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DOI :

10.3791/60531

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9 février 2020

Elisa Helena Farias Jandrey¹ , Mayra Akemi Kuroki¹ , Anamaria Aranha Camargo¹ , Erico Tosoni Costa¹

¹Molecular Oncology Center, Hospital Sírio-Libanês

Dans cet article

Résumé

Ici, nous décrivons une méthode simple et peu coûteuse qui permet la quantification des cellules adhésives de tumeur aux cryosections de ganglion lymphatique (LN). Les cellules de tumeur LN-adhérentes sont facilement identifiées par microscopie légère et confirmées par une méthode fluorescence-basée, donnant un index d’adhérence qui indique l’affinité de cellule-contraignante de tumeur au parenchyme de LN.

Résumé

Les ganglions lymphatiques drainant les tumeurs (LN) ne sont pas seulement des filtres de déchets tumoraux. Ils sont l’un des sites régionaux les plus communs de résidence provisoire des cellules de tumeur disséminées dans les patients présentant différents types de cancer. La détection de ces cellules tumorales LN-résidantes est un biomarqueur important lié au pronostic pauvre et aux décisions adjuvantes de thérapie. Des modèles récents de souris ont indiqué que les cellules tumorales LN-résidantes pourraient être une source substantielle de cellules malignes pour les métastases lointaines. La capacité de quantifier l’adhérence des cellules tumorales au parenchyme LN est une jauge critique dans la recherche expérimentale qui se concentre sur l’identification des gènes ou des voies de signalisation pertinentes pour la diffusion lymphatique/métastatique. Parce que les LN sont des structures 3D complexes avec une variété d’apparences et de compositions dans les sections tissulaires selon le plan de la section, leurs matrices sont difficiles à reproduire expérimentalement in vitro d’une manière entièrement contrôlée. Ici, nous décrivons une méthode simple et peu coûteuse qui permet la quantification des cellules adhésives de tumeur aux cryosections de LN. En utilisant des sections sériedes de la même LN, nous adaptons la méthode classique développée par Brodt pour utiliser des étiquettes non radioactives et comptons directement le nombre de cellules tumorales adhérant par surface ln. Les cellules tumorales adhérentes à LN sont facilement identifiées par microscopie légère et confirmées par une méthode basée sur la fluorescence, donnant un indice d’adhérence qui révèle l’affinité cell-contraignante au parenchyme de LN, qui est l’évidence suggestive des altérations moléculaires dans la liaison d’affinité des intégrines à leurs LN-ligands corrélés.

Introduction

La métastes du cancer est la principale raison de l’échec du traitement et l’aspect dominant du cancer qui met la vie en danger. Comme postulé il y a 130 ans, la propagation métastatique résulte quand une élite de cellules tumorales disséminées (DTC, les « graines ») acquièrent des capacités biologiques spécifiques qui leur permettent d’échapper aux sites primaires et d’établir une croissance maligne à des sites éloignés (le « sol »)¹. Récemment, plusieurs concepts nouveaux concernant les relations « semences et sols » ont vu le jour, tels que l’induction de niches prémétastatiques (conceptualisées comme « sol fertile » nécessaires à la croissa....