Optimisation des processus à l’aide de micro-bioréacteurs automatisés à haut débit dans la culture chinoise de cellules d’ovaires de Hamster

Summary

Ici, nous présentons une procédure détaillée pour exécuter une conception de l’expérience dans un micro-bioréacteur automatisé suivi par la récolte cellulaire et la quantification des protéines à l’aide d’une colonne de protéines A.

Abstract

L’optimisation des bioprocessus pour augmenter le rendement des produits désirés est importante dans l’industrie biopharmaceutique. Ceci peut être réalisé par la sélection des souches et par le développement de paramètres de bioprocessus. Des flacons de secousse ont été utilisés à cette fin. Ils n’ont toutefois pas la capacité de contrôler les paramètres du processus tels que le pH et l’oxygène dissous (DO). Cette limitation peut être surmontée à l’aide d’un micro-bioréacteur automatisé. Ces bioréacteurs imitent la culture à plus grande échelle. L’un des principaux avantages de ce système est l’intégration de la conception de l’expérience (DOE) dans le logiciel. Cette intégration permet d’établir une conception où plusieurs paramètres de processus peuvent être variés simultanément. Les paramètres critiques du processus et les conditions optimales de bioprocessus peuvent être analysés dans le logiciel. L’objectif du travail présenté ici est d’introduire l’utilisateur aux étapes impliquées dans la conception de processus dans le logiciel et l’incorporation du DOE dans la culture.

Introduction

Le marché biopharmaceutique mondial valait plus de 250 milliards de dollars AMÉRICAINS en 2018 et n’a cessé d’augmenter^{de 1}. Les sociétés pharmaceutiques s’éloignent de la production de petits médicaments moléculaires à des thérapies biotechno logiquement produites telles que des protéines recombinantes. À eux seuls, ils représentent un chiffre d’affaires de plus de 150 milliards de dollars¹. Les cellules mammifères sont maintenant largement utilisées pour la production de ces protéines recombinantes pharmaceutiques. Dans la période actuelle, parmi les 68 produits approuvés produits par des cellules de mammifères, 57 son....

Protocol

1. Procédure de préculture

REMARQUE: Recombinant CHO DG44 cellules avec une concentration cellulaire viable de 1 x 10⁷ cellules/mL sont utilisés pour ce protocole.

1. Décongeler la fiole contenant 1,2 ml de cellules à température ambiante et transférer immédiatement la suspension cellulaire dans un tube de centrifugeuse conique de 15 ml contenant 10 ml de milieu de graines froides.
2. Centrifuge le tube de centrifugeuse conique pendant 5 minutes à 190 x g et température ambiante et jeter le supernatant.
3. Préchauffer 150 ml du milieu de graine dans un flacon de secouement de 500 ml ....

Results

Un aperçu de la culture pratiquée dans cette étude est présenté à la figure 2.

Figure 2 : Représentation schématique des conditions expérimentales pour tester les profils de pH et de vitesse d’agitateur dans les stations de culture. Le chiffre représente également la disposition correcte pour placer les navires.

Discussion

L’optimisation du processus d’augmentation du rendement est d’une importance cruciale dans l’industrie biopharmaceutique. Des flacons de secousse pourraient être utilisés pour le criblage de la souche; cependant, la surveillance des paramètres du processus tels que le pH et le DO ne sont pas disponibles dans les flacons. Les micro-bioréacteurs ont un avantage car ils permettent une surveillance et un contrôle continus du processus. Ces boucles de contrôle dans le micro-bioréacteur fournissent également une condition simi.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 mL pointes de pipette jetables, stérilisées	Sartorius Stedim Biotech GmbH	A-0040
200 mM L-glutamine	Corning, Merck	25-005-CV
24 Plaques à puits profonds	Sartorius Stedim Biotech GmbH	A-0038
5 mL pointes de pipette jetables, stérilisées	Sartorius Stedim Biotech GmbH	A-0039
ambr 15 automatisées système de microbioréacteur	Sartorius Stedim Biotech GmbH	001-2804
ambr 15 Culture cellulaire 24 Bioréacteurs jetables - Sparged	Sartorius Stedim Biotech GmbH	001-1B86
Émulsion antimousse C	Sigma-Aldrich, Merck	A8011
Bottle Top Filtre stérile	Corning, Merck	CLS431474	0.1 &mu ;
Détergent CEDEX (3 % de mucosol)	Roche Innovatis AG	05-650-658-001
Compteur de cellules	Roche Innovatis AG	05-650-216-001	CEDEX HiRes
CHO DG44 Cell line	Cellca, Sartorius Stedim Biotech GmbH
CHOKO Feed Media A (FMA)	Sigma-Aldrich, Merck	CR80025
CHOKO Feed Media B (FMB)	Sigma-Aldrich, Merck	CR80026
CHOKO Milieu de production	Sigma-Aldrich, Merck	CR80027
CHOKO Stock Culture Meium	Sigma-Aldrich, Merck	CR80028
Chromaster Système de chromatographie liquide haute pression	VWR International
Tube conique à centrifuger	Corning, Merck	SIAL0790
Ethanol	Merck
Glycine	Carl Roth	56-40-6
Flacons HPLC	VWR International	SUPLSU860181
PBS	Sigma-Aldrich, Merck	P4417
Protéine A Colonne	Thermo Fisher Scientific	1502226	POROS&trade ; A 1,7  ; mL
Chlorure de sodium	Sigma-Aldrich,Merck	7647-14-5
Phosphate de sodium dibasique anhydre	Sigma-Aldrich,Merck	7558-79-4
Trypan Blue	VWR International	VWRVK940
YSI	YSI Inc	2900D	YSI 2900 Sélectionner