Double injection directe de sang dans la Cisterna Magna comme modèle d’hémorragie subarachnoïde

Martin Pedard; Mohamad El Amki; Antoine Lefevre-Scelles; Vincent Compère; Hélène Castel

doi:10.3791/61322

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Article de méthode

Double injection directe de sang dans la Cisterna Magna comme modèle d’hémorragie subarachnoïde

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DOI :

10.3791/61322

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30 août 2020

Martin Pedard¹ , Mohamad El Amki¹ , Antoine Lefevre-Scelles¹^,² , Vincent Compère¹^,² , Hélène Castel¹

¹University of Rouen Normandy, INSERM U1239, DC2N, Institute for Research and Innovation in Biomedicine (IRIB), Rouen, France, ²Department of Anesthesiology and Critical Care, Rouen University Hospital, Rouen, France

Dans cet article

Résumé

Nous avons décrit dans ce protocole un modèle normalisé d’hémorragie sous-rachnoïde (SAH) de souris par une double injection de sang entier autologue dans la magna de cisterna. Le degré élevé de normalisation de la procédure de double injection représente un modèle moyen à aigu de SAH avec une sécurité relative en ce qui concerne la mortalité.

Résumé

Parmi les accidents vasculaires cérébraux, l’hémorragie subarachnoïde (SAH) consécutive à la rupture d’un anévrisme artériel cérébral représente 5-9% mais est responsable d’environ 30% de la mortalité totale liée à l’AVC avec une morbidité importante en termes de résultats neurologiques. Un vasospasme cérébral retardé (CVS) peut se produire le plus souvent en association avec une ischémie cérébrale retardée. Différents modèles animaux de SAH sont maintenant utilisés, y compris la perforation endovasculaire et l’injection directe de sang dans la cisterna magna ou même la citerne préchiasmatique, chacun présentant des avantages et des inconvénients distincts. Dans cet article, un modèle normalisé de souris de SAH par double injection directe de volumes déterminés de sang entier autologue dans le cisterna magna est présenté. En bref, les souris ont été pesées puis anesthésiées par inhalation d’isoflurane. Ensuite, l’animal a été placé en position inclinable sur une couverture chauffée maintenant une température rectale de 37 °C et placé dans un cadre stéréotaxique avec un virage cervical d’environ 30°. Une fois en place, la pointe d’une micropipette en verre allongé remplie du sang artériel homologue prélevé sur l’artère carotide d’une autre souris du même âge et du même sexe (C57Bl/6J) a été placée à un angle droit en contact avec la membrane atlanto-occipitale au moyen d’un micromanipulateur. Puis 60 μL de sang a été injecté dans la magna de cisterna suivie d’une inclinaison vers le bas de 30° de l’animal pendant 2 minutes. La deuxième perfusion de 30 μL de sang dans le cisterna magna a été effectuée 24 h après la première. Le suivi individuel de chaque animal est effectué quotidiennement (évaluation minutieuse du poids et du bien-être). Cette procédure permet une distribution prévisible et hautement reproductible du sang, probablement accompagnée d’élévation de la pression intracrânienne qui peut être imitée par une injection équivalente d’un liquide céphalo-rachidien artificiel (CSF), et représente un modèle aigu à doux de SAH induisant une faible mortalité.

Introduction

L’hémorragie subarachnoïde (SAH) représente jusqu’à 5% de tous les cas d’AVC et constitue une pathologie relativement commune avec une incidence de 7,2 à 9 patients pour 100.000 par an, avec un taux de mortalité de 20%-60% selon l’étude¹^,²^,³. Dans la phase aiguë, la mortalité est attribuable à la gravité des saignements, des rebleedings, du vasospasme cérébral (CVS) et/ou des complications médicales⁴. Chez les survivants, les lésions cérébrales précoces (EBI) sont associées à l’extension parenchymale de l’hémorragie et à l’augmentation abrupte de la pr....