Un essai ex vivo pour étudier Candida albicans Hyphal Morphogenesis dans le tractus gastro-intestinal

Résumé

L’analyse ex vivo décrite dans cette étude à l’aide d’extraits d’homogénéisation intestinale et de taches d’immunofluorescence représente une nouvelle méthode pour examiner la morphogenèse hyphale de Candida albicans dans le tractus gastro-intestinal. Cette méthode peut être utilisée pour étudier les signaux environnementaux régulant la transition morphogenétique dans l’intestin.

Résumé

Candida albicans morphogenèse hyphale dans le tractus gastro-intestinal (GI) est étroitement contrôlée par divers signaux environnementaux, et joue un rôle important dans la diffusion et la pathogénie de cet agent pathogène fongique opportuniste. Cependant, les méthodes pour visualiser l’hyphe fongique dans le tractus gastro-intestinal in vivo sont difficiles, ce qui limite la compréhension des signaux environnementaux dans le contrôle de ce processus de morphogenèse. Le protocole décrit ici démontre une nouvelle méthode ex vivo pour la visualisation de la morphogenèse hyphale dans les extraits d’homogénéisation intestinale. À l’aide d’un essai ex vivo, cette étude démontre que le contenu cécal des souris traitées aux antibiotiques, mais pas des souris témoins non traitées, favorise la morphogenèse hyphale de C. albicans dans la teneur en intestin. En outre, l’ajout de groupes spécifiques de métabolites intestinaux au contenu cécal des souris traitées aux antibiotiques régule différemment la morphogenèse hyphale ex vivo. Pris ensemble, ce protocole représente une nouvelle méthode pour identifier et étudier les signaux environnementaux qui contrôlent la morphogenèse hyphale de C. albicans dans le tractus gastro-intestinal.

Introduction

Candida albicans est un pathogène fongique opportuniste et polymorphe qui est normalement proportionnel, mais qui peut subir un changement morphologique en une forme virulente capable de causer des infections potentiellement mortelles chez les personnes immunocompromisées^{1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11}

Protocole

Tous les protocoles animaux ont été approuvés par le Midwestern University Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) tel que décrit^{avant 57}. Le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de l’Université du Midwest a approuvé cette étude en vertu du Protocole IACUC de l’UTW #2894. Les politiques de soins aux animaux de l’UTW suivent la Politique du Service de santé publique (SSP) sur les soins et l’utilisation des animaux de laboratoire et les politiques énoncées dans la Loi sur le bien-être des animaux (AWA).

1. Les souris étudient le protocole standard

1. Utilisez des souris C57BL/6....

Résultats

Ces résultats ainsi que les résultats antérieurs du laboratoire Thangamani⁶⁰ indiquent que lorsque C. albicans est cultivé ex vivo dans des extraits d’homogénéisation intestinale prélevés dans l’estomac, les intestins grêles et les gros intestins de souris témoins non traitées et traitées aux antibiotiques, C. albicans se développe généralement avec une morphologie de levure (figure 1B). Cependant, lorsqu’il est cultivé dans l’extrait cécal à partir .......

Discussion

La méthode décrite ici présente une nouvelle façon d’étudier l’effet des impacts antibiotiques, diététiques, xénobiotiques et thérapeutiques sur la morphogenèse hyphale de C. albicans dans le tractus gastro-intestinal. Puisque la majorité des infections systémiques proviennent du tractus^{gastro-intestinal 21,22,23,24,25,26<.......}

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
1 - 10 et micro ; L Pointes de pipette	Fisher Scientific	02-707-454	Misc
100 - 1000 µ ; L pointes de pipette	Fisher Scientific	02-707-400	Misc
20 - 200 & micro ; L Pointes de pipette	Fisher Scientific	02-707-451
Divers Acide 2-méthylbutyrique	Sigma	193070-25G	composé inhibiteur d’hyphe
488 chèvre anti-lapin IgG	Invitrogen (Fisher)	A11008	IF Coloration secondaire ab
Agar	Fisher	BP1423-500	YPD Gélose
Microscope d’imagerie automatisé	Keyence	BZX700
Candida Albicans Anticorps	Invitrogen (Fisher)	PA1-27158	IF Coloration primaire ab
céfoperazone	Cayman	16113	antibiotique
acide désoxycholique	Sigma	30960	composé inhibiteur d’hyphes
D-Glucose	Fisher	D16-500	pince à composé favorisant l’hyphe
	Fisher	08-885
acide lactique	Alfa Aesar	AAAL13242-06	composé inhibiteur d’hyphe
acide lithoholique	Sigma	L6250-10G	composé inhibiteur d’hyphe
acide palmitique	Sigma	P5585-10G	composé inhibiteur d’hyphe
Paraformaldéhyde	Alfa Aesar	A11313	IF Fixateur de coloration
Saline tamponnée au phosphate (PBS), 10x	Alfa Aesar	J62692	Composant PBS
Acide p-tolylacétique	SCBT	sc-257959	Composé inhibiteur d’hyphe
Acide sébacique	Sigma	283258-250G	Composé inhibiteur d’hyphe
Ciseaux à bout pointu	Fisher	28301
Eau stérile Milli-Q	N/A	N/A
Divers YPD Bouillon	BD Biosciences	242810	Composant de gélose YPD