Isolement de liquides proximaux pour étudier le microenvironnement tumoral de l’adénocarcinome pancréatique

Greta Donisi; Marialuisa Barbagallo; Giovanni Capretti; Gennaro Nappo; Panteleimon  G. Takis; Alessandro Zerbi; Federica Marchesi; Nina Cortese

doi:10.3791/61687

Article de méthode

Isolement de liquides proximaux pour étudier le microenvironnement tumoral de l’adénocarcinome pancréatique

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DOI :

10.3791/61687

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5 novembre 2020

Greta Donisi^*¹ , Marialuisa Barbagallo^*² , Giovanni Capretti¹^,³ , Gennaro Nappo¹^,³ , Panteleimon G. Takis⁴^,⁵^,⁶ , Alessandro Zerbi¹^,³ , Federica Marchesi²^,⁷ , Nina Cortese²

¹Section of Pancreatic Surgery, Humanitas Clinical and Research Center-IRCCS, ²Department of Immunology and Inflammation, Humanitas Clinical and Research Center-IRCCS, ³Department of Biomedical Sciences, Humanitas University, ⁴Giotto Biotech S.R.L., ⁵Section of Bioanalytical Chemistry, Division of Systems Medicine, Department of Metabolism, Digestion and Reproduction, Imperial College London, ⁶National Phenome Centre, Department of Metabolism, Digestion and Reproduction, Faculty of Medicine, Imperial College London, ⁷Department of Medical Biotechnology and Translational Medicine, University of Milan

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Le suc pancréatique est une source précieuse de biomarqueurs du cancer du pancréas humain. Nous décrivons ici une méthode de procédure de collecte peropératoire. Pour surmonter le défi de l’adoption de cette procédure dans des modèles murins, nous suggérons un échantillon alternatif, le liquide interstitiel tumoral, et décrivons ici deux protocoles pour son isolement.

Résumé

L’adénocarcinome pancréatique (PDAC) est la quatrième cause de décès lié au cancer, et deviendra bientôt la deuxième. Il existe un besoin urgent de variables associées à des pathologies pancréatiques spécifiques pour faciliter le diagnostic différentiel préopératoire et le profilage des patients. Le suc pancréatique est un fluide corporel relativement inexploré qui, en raison de sa proximité avec le site tumoral, reflète les changements dans les tissus environnants. Nous décrivons ici en détail la procédure de collecte peropératoire. Malheureusement, la traduction de la collecte de sucs pancréatiques en modèles murins de PDAC, pour effectuer des études mécanistes, est techniquement très difficile. Le liquide interstitiel tumoral (TIF) est le liquide extracellulaire, à l’extérieur du sang et du plasma, qui baigne les cellules tumorales et stromales. Tout comme le suc pancréatique, pour sa propriété de collecter et de concentrer les molécules qui se trouvent diluées dans le plasma, le TIF peut être exploité comme indicateur d’altérations microenvironnementales et comme source précieuse de biomarqueurs associés à la maladie. Le FIT n’étant pas facilement accessible, diverses techniques ont été proposées pour son isolement. Nous décrivons ici deux méthodes simples et techniquement peu exigeantes pour son isolement: la centrifugation tissulaire et l’élution tissulaire.

Introduction

L’adénocarcinome canalaire pancréatique (PDAC) est l’une des tumeurs les plus agressives et deviendra bientôt la deuxième cause de décès ^1,2,3. Il est bien connu pour son microenvironnement immunosuppresseur et pour son manque de réponse aux protocoles d’immunothérapie⁴. Actuellement, la résection chirurgicale est toujours la seule option curative pour PDAC, mais il existe une fréquence élevée de rechutes précoces et de complications postopératoires. L’absence de symptômes spécifiques jusqu’à un stade avancé ne permet pas un diagnostic précoce, contrib....