Les modèles traditionnels d’AVC photothrombotique (PTS) induisent principalement des agrégats plaquettaires denses d’une haute résistance au traitement lytique par activateur tissulaire du plasminogène (tPA). Ici, un modèle PTS murin modifié est introduit en co-injectant de la thrombine et un colorant photosensible pour la photoactivation. Le modèle PTS amélioré par la thrombine produit des caillots mixtes plaquettaire/fibrine et est très sensible à la thrombolyse tPA.
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Article de méthode
Un modèle d’AVC photothrombotique enrichi en fibrine et sensible au tPA
Dans cet article
Résumé
Résumé
Un modèle idéal d’AVC thromboembolique nécessite certaines propriétés, notamment des procédures chirurgicales relativement simples avec une faible mortalité, une taille et une localisation d’infarctus constantes, une précipitation de caillots sanguins mélangés plaquettaire/fibrine similaires à ceux des patients, et une sensibilité adéquate au traitement fibrinolytique. Le modèle d’AVC photothrombotique à base de colorant rose bengale (RB) répond aux deux premières exigences, mais est hautement réfractaire au traitement lytique médié par le tPA, probablement en raison de sa composition en caillots riche en plaquettes, mais pauvre en fibrine. Nous pensons que la combinaison d’un colorant RB (50 mg/kg) et d’une dose sub-thrombotique de thrombine (80 U/kg) pour la photoactivation visant la branche proximale de l’artère cérébrale moyenne (MCA) peut produire des caillots enrichis en fibrine et sensibles au tPA. En effet, le modèle de photothrombose combinée à la thrombine et à la RB (T+RB) a déclenché des caillots sanguins mixtes plaquette/fibrine, comme le montrent l’immunomarquage et les immunoblots, et a maintenu des tailles et des emplacements d’infarctus constants ainsi qu’une faible mortalité. De plus, l’injection intraveineuse de tPA (Alteplase, 10 mg/kg) dans les 2 heures suivant la photoactivation a significativement diminué la taille de l’infarctus dans la photothrombose T+RB. Ainsi, le modèle d’AVC photothrombotique amélioré par la thrombine peut être un modèle expérimental utile pour tester de nouvelles thérapies thrombolytiques.
Introduction
La thrombectomie endovasculaire et la thrombolyse médiée par tPA sont les deux seules thérapies approuvées par la Food and Drug Administration (FDA) des États-Unis pour l’AVC ischémique aigu, qui touche ~700 000 patients chaque année aux États-Unis1. Étant donné que l’application de la thrombectomie est limitée à l’occlusion des gros vaisseaux (LVO), alors que la thrombolyse tPA peut soulager les occlusions des petits vaisseaux, les deux sont des thérapies précieuses de l’AVC ischémique aigu2. De plus, la combinaison des deux thérapies (p. ex., l’initiation de la thrombolyse tPA dans les 4,5 heures suivant le début de l’....
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Protocole
Ce protocole est approuvé par l’Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) de l’Université de Virginie et suit les lignes directrices des National Institutes of Health pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire. La figure 1A décrit la séquence des interventions chirurgicales de ce protocole.
1. Configuration de la chirurgie
- Placez un coussin chauffant avec une température réglée à 37 °C sur l’adaptateur pour petit animal au moins 15 minutes avant l’opération. Préparez un rouleau de pince-nez pour l’adaptateur qui permet la rotation de la tête de l’animal. Préparer les anesthésiq....
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Résultats
Tout d’abord, nous avons comparé la teneur en fibrine dans les caillots sanguins induits par la photothrombose RB par rapport à T+RB. Des souris ont été sacrifiées par perfusion transcardique de fixateurs 2 h après la photoactivation, et des cerveaux ont été prélevés pour la coloration par immunofluorescence de la branche MCA dans les plans longitudinaux et transversaux. Dans la photothrombose RB, la branche MCA était densément remplie de plaquettes CD41+ et de peu de fibrine (Figure 2
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Discussion
L’AVC photothrombotique RB traditionnel, introduit en 1985, est un modèle attrayant d’ischémie cérébrale focale pour les interventions chirurgicales simples, la faible mortalité et la reproductibilité élevée de l’infarctus cérébral. 5 Dans ce modèle, le colorant photodynamique RB active rapidement les plaquettes lors de l’excitation lumineuse, conduisant à des agrégats denses qui occlus le vaisseau sanguin 5,8,23.
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par les subventions du NIH (NS108763, NS100419, NS095064 et HD080429 à C.Y.K. ; et NS106592 à Y.Y.S.).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium (TTC) | Sigma | T8877 | infarctus |
| 4-0 Suture monofilament en nylon | LOOK | 766B | fournitures chirurgicales |
| 5-0 suture en soie | Harvard Appareil | 624143 | fournitures chirurgicales |
| Faisceau laser 543nm | Melles Griot | 25-LGP-193-249 | photothrombose |
| souris mâles adultes | Charles River | C57BL/6 | 10~14 semaines (22~30 g) |
| Barre d’anesthésie pour adaptateur de souris | atelier d’usinage, | configuration chirurgicale | |
| Avertin (2, 2, 2-tribromoéthanol) | Sigma | T48402 | euthanasie |
| Foret dentaire | Dentamerica | Rotex 782 | configuration chirurgicale |
| Microscope numérique | Dino-Lite | AM2111 | imagerie |
| cérébrale Dissection microscope | Olympus | SZ40 | dispositif chirurgical |
| Pince fine incurvée (dentelée) | FST | 11370-31 | |
| Pince fine incurvée (lisse) | FST | 11373-12 | instrument chirurgical |
| chèvre anti-lapin Alexa Fluro 488 | Invitrogen | A11008 | Immunohistochimie |
| Halsted-Mosquito hémostatiques | FST | 13008-12 | instrument chirurgical |
| Pompe à chaleur avec coussin chauffant Pompe à | Gaymar | TP700 | |
| Pompe à perfusion | KD Scientific | 200 | Traitement thrombolytique |
| Seringue à insuline avec aiguille 31G | BD | 328291 | photothrombose |
| Kétamine | CCM, UVA | Anesthésie | |
| Laser de protection google 532nm | Thorlabs | LG3 | photothrombose |
| Kétoprofène | CCM, UVA | NSAID analgésie | |
| porte-aiguilles | FST | 12060-01 | instrument chirurgical |
| micro ciseaux | FST | 15000-03 | instrument chirurgical |
| MoorFLPI-2 caméra de flux sanguin | Moor | 780-nm source laser | Laser Speckle Contrast |
| Imaging Adaptateur souris | RWD | 68014 | configuration chirurgicale |
| Puralube Pommade vétérinaire | Fisher | NC0138063 | prévention de la sécheresse oculaire |
| Embouts écarteur | Kent Scientific | Surgi-5014-2 | configuration chirurgicale |
| Rose Bengal | Sigma | 198250 | photothrombose |
| Thrombin | Sigma | T7513 | photothrombose |
| Colle tissulaire | Abbott Laboratories | NC9855218 | fournitures chirurgicales |
| tPA | Genetech | Cathflo activase 2mg | traitement thrombolytique |
| Vibratome | Stoelting | 51425 | TTC infacrt |
| Xylazine | CCM, | anesthésie |
Références
- Lyden, P. D. Thrombolytic Therapy for Acute Stroke. 3/e. , Springer. (2015).
- Linfante, I., Cipolla, M. J. Improving reperfusion therapies in the era of mechanical thrombectomy. Translational Stroke Research. 7 (4), 294-302 (2016).
- Campbell, B. C., et al.
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Réimpressions et autorisations
