Les ultrasons à haute résolution peuvent aider à rationaliser les expériences nécessitant des souris enceintes chronométré en déterminant l’état de la grossesse, l’âge gestationnel et les pertes de grossesse. Présenté ici est un protocole pour illustrer des méthodes pour évaluer des grossesses de souris aussi bien que des pièges potentiels (artefacts d’image) qui peuvent imiter la grossesse.
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Article de méthode
Ma souris est-elle enceinte? Évaluation par ultrasons à haute fréquence
Dans cet article
Résumé
Résumé
La souris est le modèle animal mammifère de choix pour de nombreuses maladies humaines et processus biologiques. La biologie du développement exige souvent que les souris enceintes étagés déterminent les processus en évolution à divers moments. De plus, l’élevage optimal et efficace de souris modèles nécessite une évaluation des grossesses chronométré. Le plus souvent, les souris sont accouplées pendant la nuit et la présence d’un bouchon vaginal est déterminée; cependant, la valeur prédictive positive de cette technique est sous-optimale, et il faut attendre de savoir si la souris est vraiment enceinte. La biomicroscopie ultrasonore à haute résolution est un outil efficace et efficient pour l’imagerie: 1) Si une souris est enceinte; 2) Quel stade gestationnel la souris a atteint; et 3) S’il y a des pertes intra-utérines. En plus des embryons et des fœtus, l’investigateur doit également identifier des artefacts communs dans la cavité abdominale afin de ne pas les confondre avec un utérus gravide. Cet article fournit un protocole pour l’imagerie avec des exemples illustratifs.
Introduction
La souris est le modèle de mammifère préféré pour de nombreuses maladies humaines et processus biologiques1,2,3,4. La recherche en biologie du développement nécessite souvent des souris enceintes en phase pour déterminer les processus évolutifs à divers points de temps5,6,7,8. De plus, la reproduction optimale et efficace de souris modèles nécessite une évaluation des grossesses chronométré, en particulier lorsque ....
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Protocole
Toutes les étapes de ce protocole suivent le Guide for the Care and Use of Laboratory Animals publié par les National Institutes of Health et ont été approuvées par l’Institutional Animal Care and Use Committee de la Grossman School of Medicine de l’Université de New York.
1. Accouplement de souris pour des grossesses chronométrées
- Associez la souris femelle appropriée (habituellement un hétérozygote) dans une cage avec la souris mâle appropriée (habituellement un hétérozygote) pour l’accouplement de nuit.
- Séparez les souris le lendemain matin. Alternativement, accouplez continuellement les souris femelles et mâles, augm....
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Résultats
Ce protocole permettra à un investigateur de déterminer en toute confiance si une souris est enceinte, y compris pendant les premiers stades et de déterminer s’il y a des pertes embryonnaires ou fœtales prénatales évidentes sans avoir à sacrifier la mère enceinte. Ce protocole est particulièrement utile lors de l’élevage de souris génétiquement modifiées; typiquement, les croisements hétérozygotes x hétérozygotes pour produire la progéniture homozygote mènent à l’échec du développement approprié, qui cause la létalité pr.......
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Discussion
La première étape la plus importante de l’imagerie consiste à identifier le vagin, puis à déterminer la bifurcation de la corne utérine à gauche et à droite. En suivant chaque corne utérine, l’imageur est moins susceptible de mal identifier les boucles de l’intestin comme l’utérus. De plus, il est important de comprendre les variations de l’apparence de l’intestin (avec/sans matières fécales) pour les distinguer de l’utérus; à l’occasion, les « boules » fécales dans les boucles intestinales peuvent imiter un utérus gravi.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| dépilatoire | |||
| Éthanol, 70 % | |||
| Tondeuses | |||
| Gaze ou KimWipes | |||
| Isoflurane | |||
| Oxygène médical (facultatif) | |||
| Ruban | |||
| médicalSystème d’imagerie de la souris (y compris la configuration de l’anesthésie et la plate-forme d’imagerie) | Fujifilm Visual Sonics | Various | Tout système avec sonde de transducteur à ultrasons à fréquence centrale 40 MHz |
| Lame de rasoir (pas un rasoir de sûreté) | |||
| Balance (pour peser la souris) | |||
| Gel |
Références
- Bogue, M. A., et al. Mouse Phenome Database: an integrative database and analysis suite for curated empirical phenotype data from laboratory mice. Nucleic Acids Research. 46, 843-850 (2018).
- Ito, R., Takahashi, T., Ito, M.
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Réimpressions et autorisations
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