Microdissection du cerveau de souris en régions fonctionnellement et anatomiquement différentes

Summary

Nous présentons un protocole pratique, étape par étape, rapide pour l’ablation du cerveau de souris et la dissection de régions discrètes à partir de tissus cérébraux frais. L’obtention de régions cérébrales pour l’analyse moléculaire est devenue une routine dans de nombreux laboratoires de neurosciences. Ces régions du cerveau sont immédiatement congelées pour obtenir des données transcriptomiques de haute qualité pour l’analyse au niveau du système.

Abstract

Le cerveau est le centre de commande du système nerveux des mammifères et un organe doté d’une énorme complexité structurelle. Protégé à l’intérieur du crâne, le cerveau est constitué d’une enveloppe externe de matière grise sur les hémisphères connue sous le nom de cortex cérébral. Sous cette couche résident de nombreuses autres structures spécialisées qui sont essentielles pour de multiples phénomènes importants pour l’existence. L’acquisition d’échantillons de régions cérébrales macroscopiques spécifiques nécessite des étapes de dissection rapides et précises. Il est entendu qu’au niveau microscopique, de nombreuses sous-régions existent et traversent probablement les frontières régionales arbitraires que nous imposons aux fins de cette dissection.

Les modèles murins sont couramment utilisés pour étudier les fonctions cérébrales humaines et les maladies. Les changements dans les schémas d’expression génique peuvent être limités à des zones spécifiques du cerveau ciblant un phénotype particulier en fonction de l’état malade. Ainsi, il est d’une grande importance d’étudier la régulation de la transcription par rapport à son organisation structurelle bien définie. Une compréhension complète du cerveau nécessite d’étudier des régions cérébrales distinctes, de définir des connexions et d’identifier les différences clés dans les activités de chacune de ces régions du cerveau. Une compréhension plus complète de chacune de ces régions distinctes pourrait ouvrir la voie à des traitements nouveaux et améliorés dans le domaine des neurosciences. Ici, nous discutons d’une méthodologie étape par étape pour disséquer le cerveau de la souris en seize régions distinctes. Dans cette procédure, nous nous sommes concentrés sur l’ablation et la dissection cérébrale de souris mâles C57Bl / 6J (6-8 semaines) dans plusieurs régions en utilisant des repères neuroanatomiques pour identifier et échantillonner des régions cérébrales discrètes fonctionnellement pertinentes et comportementales. Ce travail aidera à établir une base solide dans le domaine des neurosciences, menant à des approches plus ciblées dans la compréhension plus profonde de la fonction cérébrale.

Introduction

Le cerveau, ainsi que la moelle épinière et la rétine, constituent le système nerveux central qui exécute des comportements complexes, contrôlés par des types de cellules spécialisées, positionnées avec précision et en interaction dans tout le corps¹. Le cerveau est un organe complexe avec des milliards de neurones interconnectés et de glies avec des circuits précis remplissant de nombreuses fonctions. C’est une structure bilatérale avec deux lobes distincts et divers composants cellulaires². La moelle épinière relie le cerveau au monde extérieur et est protégée par les os, les méninges et le liquide céphalorachidien et ....

Protocol

Les procédures de manipulation et d’expérimentation des animaux ont été menées conformément aux directives européennes, nationales et institutionnelles en matière de soins aux animaux. Toutes les expériences sur les animaux ont été approuvées par l’Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) du Centre de recherche sur la santé environnementale de l’armée américaine, maintenant Walter Reed Army Institute of Research (WRAIR) et réalisées dans un établissement accrédité par l’Association for the Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International (AAALAC).
NOTE: La procédure sera effectuée sur des souris mâles âgées de six à huit semaines de l....

Results

Notre compréhension de la structure et de la fonction complexes du cerveau évolue et s’améliore rapidement. Le cerveau contient plusieurs régions distinctes et la construction d’une carte moléculaire peut nous aider à mieux comprendre le fonctionnement du cerveau. Dans cet article de méthode, nous avons discuté de la dissection du cerveau de la souris en plusieurs régions distinctes (tableau 1). Dans ce protocole, les structures sont identifiées en fonction des repères critiques et sont obtenues en garda.......

Discussion

Le cerveau des mammifères est un organe complexe composé d’un ensemble de cellules morphologiquement distinctes et fonctionnellement uniques avec diverses signatures moléculaires et de multiples régions qui remplissent des fonctions spécialisées et discrètes. La procédure de dissection décrite ici peut avoir plusieurs objectifs en fonction des exigences du laboratoire. Dans notre laboratoire, nous avons évalué la transcription dans plusieurs régions du cerveau recueillies chez des souris exposées au SSPT comme le stress<.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Brain Removal
Ciseaux Deaver	Roboz Surgical Store	RS-6762	Ciseaux Deaver droits 5.5 » Sharp
	Roboz Surgical Store	RS-6763	5.5 » incurvés sharp/sharp
Ciseaux opératoires délicats	Roboz Surgical Store	RS-6703	4.75 » incurvés sharp/sharp
Ciseaux opératoires délicats	Roboz Surgical Store	RS-6702	4.75 » droit sharp/sharp
Ciseaux opératoires légers	Roboz Surgical Store	RS-6753	5 » incurvé Sharp/Sharp
Micro spatule, rayon et extrémités			en acier inoxydable finition miroir
Ciseaux d’opération 6.5"	Roboz Surgical Store	RS-6846	incurvé sharp/sharp
Pince à tissus	Roboz Surgical Store	RS-8160	4.5 » 1X2 dents 2mm largeur de pointe
Rongeur (en option)	Roboz Surgical Store	RS-8321 de nombreux styles au choix	Lempert Rongeur 6.5 » 2X8mm
Pituitary Dissection
Scalpel	Handle Roboz Surgical Store	RS-9843	Scalpel Handle #3 Solid 4"
et lames	Roboz Surgical Store	RS-9801-11	Lames de scalpel stériles :#11 Boîte 100 40mm
Pince super fine Inox	Roboz Surgical Store	RS-4955	taille de la pointe 0,025 X 0,005 mm
Dissection cérébrale
A Visière de grossissement	Penn Tool Col	40-178-6	Grossissement de lentille externe 2,2x et 3,3x interne, Loupe rectangulaire
Dissection plaque froide	Cellpath.com	JRI-0100-00A	Iceberg plaque froide & base
Pince Graefe, courbe complète extra délicate	Roboz Surgical Store	RS-5138	0,5 mm Pointe 4" (10 cm) de long
Ciseaux opératoires légers	Roboz Surgical Store	RS-6753	5 » incurvé sharp/sharp
Manche de scalpel	Roboz Surgical Store	RS-9843 (répété ci-dessus)	Manche de scalpel #3 Solid 4 »
et lames (surtout #11)	Roboz Surgical Store	RS-9801-11 (répété ci-dessus)	Lames de scalpel stériles :#11 Boîte 100 Spatule 40mm
	Amazon	MS-SQRD9-4	Spatule à double extrémité carrée ET pince à tissu à extrémité ronde
	Roboz Surgical Store	RS-8160 (répété ci-dessus)	4.5" 1X2 dents