Transplantation d’îlots pancréatiques couverts de graisse à l’aide de tissu adipeux blanc épididymaire

Résumé

Cette méthode de transplantation d’îlots couverts de graisse convient à la détection des îlots greffés dans la cavité intrapéritonéale. Notamment, il ne nécessite pas l’utilisation d’agents bioliants ou de suture.

Résumé

La transplantation d’îlots pancréatiques est une thérapie de remplacement cellulaire pour le diabète sucré sévère. La cavité intrapéritonéale est généralement le site de transplantation pour cette procédure. Cependant, la transplantation intrapéritonéale d’îlots pancréales présente certaines limites, notamment une faible efficacité de la transplantation, une capacité difficile de détection du greffon et un manque de capacité de greffectomie pour l’analyse post-transplantation. Dans cet article, la « transplantation d’îlots couverts de graisse », une méthode de transplantation d’îlots intrapéritonéaux qui utilise du tissu adipeux blanc épididymaire, est utilisée pour évaluer les effets thérapeutiques des îlots bio-modifiés. La simplicité de la méthode réside dans l’ensemencement des îlots sur le tissu adipeux blanc épididymaire et l’utilisation du tissu pour couvrir les îlots. Bien que cette méthode puisse être classée comme une technique de transplantation d’îlots intrapéritonéaux, elle partage des caractéristiques avec la transplantation intra-adipeuse d’îlots pancréteux. La méthode de transplantation d’îlots couverts de graisse démontre toutefois des effets thérapeutiques plus robustes que la transplantation intra-adipeuse d’îlots, y compris l’amélioration de la glycémie et des taux plasmatiques d’insuline et le potentiel d’élimination du greffon. Nous recommandons l’adoption de cette méthode pour évaluer les mécanismes de greffe d’îlots dans le tissu adipeux blanc et les effets thérapeutiques des îlots issus de la bioingénierie.

Introduction

La transplantation d’îlots pancréatiques est une thérapie de remplacement cellulaire pour les patients atteints de diabète sucré sévère. Des rapports récents ont montré que les taux d’insuline autonome trois ans après la transplantation s’améliorent jusqu’à 44 %¹ et qu’environ 80 % des receveurs qui reçoivent plus de 600 000 équivalents îlots pancréatiques atteignent l’indépendance insulinique². En outre, dans le plus récent rapport du registre collaboratif de transplantation d’îlots, il a été révélé que la glycémie à jeun était maintenue à 60-140 mg / dL pendant une période de 5 ans chez plus de 70% des patients qui ont....

Protocole

La procédure suivante est effectuée en trois étapes. La première étape comprend l’induction du diabète chez les souris receveuses et l’isolement des îlots donneurs. La deuxième étape consiste à préparer les îlots avant la transplantation. Dans la troisième étape, la transplantation d’îlots sur le tissu adipeux épididymaire et le revêtement des îlots à l’aide du tissu adipeux est effectuée. Après cela, les effets thérapeutiques ont été évalués. La manipulation des souris et les procédures expérimentales effectuées dans cette étude sont conformes aux « Principes de soin des animaux de laboratoire » (Guide pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire, publica....

Résultats

Pour comparer l’efficacité de la transplantation d’îlots couverts de graisse à celle après la transplantation intrapéritonéale d’îlots, le même nombre d’îlots a été implanté sur le péritoine à l’espace paracolique gauche des animaux diabétiques receveurs témoins. On a observé que la glycémie des souris ayant subi une transplantation d’îlots couverts de graisse diminuait graduellement et significativement par rapport aux souris transplantées d’îlots intrapéritonéaux (p = 0,0023; Figure 3A). U.......

Discussion

La méthode de transplantation d’îlots couverts de graisse intègre des techniques de deux techniques de transplantation différentes: la transplantation intrapéritonéale d’îlots et la transplantation intra-adipeuse d’îlots adipeux. Comme la membrane superficielle du tissu adipeux blanc épididymaire est considérée comme le tissu adipeux blanc qui est recouvert par le péritoine et qui est attaché à l’épididyme, la méthode de transplantation d’îlots couverts de graisse peut être anatomiquement classée comme un type de transpl.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
4-0 Nylon	Alfresa	ER2004NA45-KF2	Abdomen fermant
Alexa 488-âne conjugué anti-cochon d’Inde	Jackson Immunoresearch	706-546-148	Anticorps secondaire pour l’insuline Anticorps
anti-âne conjugué Alexa 647	Jackson Immunoresearch	711-606-152	Anticorps secondaire pour le facteur de von Willebrand
anticorps DMEM, faible glucose, pyruvate	ThermoFisher Scientific	11885084	Élevage d’îlots, repiquage d’îlots
Eosin	Fujifilm Wako Chemicals	051-06515	Utilisation pour la coloration des tissus par l’éosine
Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1,5 mL	Eppendorf	30120086	Îlots collecteurs  ;
Falcon 15 mL Tubes coniques à centrifuger	Corning	352095	Îlots collecteurs
Falcon 40 µ ; m Cell Strainer	Falcon	352340	Utilisation pour séparer les îlots d’autres tissus pancréatiques
Falcon 50 mL Tubes coniques à centrifuger	Corning	352070	Élimination du milieu/tampon excessif
Cobaye anti-insuline	Agilent Technologies Japan, Ltd. (Dako)	IR002	Anticorps primaire pour l’insuline murine
Hématoxyline	Muto Pure Chemicals Co., Ltd.	30002	Utilisation pour la coloration des tissus par la solution d’hématoxyline
Isodine 10 %	Shionogi&Co., Ltd.	pas de numéro de catalogue	Utilisation pour la désinfection
Isoflurane	Fujifilm Wako Chemicals	095-06573	Utilisation pour l’anesthésie
Labcon 1000 µ ; L ZapSilk Pointes de pipette à faible rétention	Labcon	1177-965-008	Utilisation pour séparer les îlots d’autres tissus pancréatiques
Labcon 200 µ ; L ZapSilk Low Retention Pipette Tips	Labcon	1179-965-008	Utilisation pour l’ensemencement des îlots sur le tissu adipeux blanc épididymaire
Mintsensor	Sanwa Kagaku Kenkyusho Co. Ltd.,	8AEB02E	Utilisation pour la surveillance
Pipetteman P-1000	Gilson	F123602	Utilisation pour séparer les îlots d’autres tissus pancréatiques
Pipetteman P-200	Gilson	F123601	Utilisation pour l’ensemencement d’îlots sur le tissu adipeux blanc épididymaire
Lapin anti-vWF	Abcam	ab6994	Anticorps primaire contre le facteur murin de von Willebrand

de la glycémie