Nous présentons des détails des procédures de laboratoire pour l’activation in vitro drogue-libre (IVA) des follicules ovariens pour des patients présentant le dysfonctionnement ovarien grave. Cette méthode pourrait augmenter le nombre d’ovocytes récupérables par hyperstimulation ovarienne et bénéficier de la préservation de la fertilité pour ces patients.
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Article de méthode
Préservation de la fertilité chez les patientes présentant un dysfonctionnement ovarien sévère
Dans cet article
Résumé
Résumé
La fonction ovarienne diminue progressivement pendant le vieillissement et dans quelques conditions pathophysiologiques comprenant l’anomalie de karyotype, les maladies autoimmunes, les chemo- et les radiations-thérapies, aussi bien que des chirurgies ovariennes. Chez les femmes célibataires atteintes d’un dysfonctionnement ovarien grave, la préservation de la fertilité est importante pour les grossesses futures. Bien que la cryoconservation d’oocyte soit une méthode établie pour la conservation de fertilité, ces patients pourraient seulement préserver un nombre limité d’oocytes même après hyperstimulation ovarien, menant aux stimulations répétées pour assurer les oocytes suffisants pour garantir la grossesse future. Pour résoudre ce problème, nous avons récemment développé une procédure d’activation in vitro sans médicament (IVA), qui nous permet de stimuler les premiers stades des follicules ovariens à se développer au stade follicule préantral. Ces follicules préantraux peuvent répondre au protocole unique de la stimulation de gonadotropin, ayant pour résultat le plus grand nombre d’oocytes récupérés par stimulation ovarienne pour cryopreservation. L’IVA drogue-libre a composé de l’approche chirurgicale et de la stimulation ovarienne. Nous avons enlevé une partie du cortex d’un ou des deux ovaires des patients sous chirurgie laparoscopique. Les tissus corticaux ovariens ont été coupés en petits cubes pour perturber la voie de signalisation d’Hippo et stimuler le développement des follicules de partie. Ces cubes ont été greffés orthotropically dans les ovaires restants aussi bien que sous le serosa des deux trompes de Fallope. Nous avons déjà publié l’intervention chirurgicale de l’IVA sans drogue et le protocole de la stimulation ovarienne suivante, mais ici nous présentons les détails des méthodes de laboratoire exigées pour l’IVA sans drogue.
Introduction
La fonction ovarienne diminue progressivement pendant le vieillissement et quelques conditions pathophysiologiques comprenant l’anomalie de karyotype, les maladies autoimmunes, les chemo- et radiologiques-thérapies, et les chirurgies ovariennes. La préservation de la fertilité est l’une des meilleures options pour les femmes célibataires atteintes d’un dysfonctionnement ovarien grave afin de préserver leur potentiel pour une grossesse future. Pour la préservation de la fertilité, deux méthodes sont actuellement disponibles principalement dans le domaine de la fertilité onco. La cryoconservation des ovocytes est une procédure bien établie pour la conservation de la fer....
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Protocole
Le consentement éclairé écrit a été obtenu de chaque patiente de POR présentant la réserve ovarienne décroissante qui s’est inscrite dans le traitement sans drogue d’IVA. Cette étude a été approuvée par le comité d’éthique de l’Université internationale de la santé et du bien-être (no 17-S-21). L’essai clinique a été enregistré sous le numéro UMIN000034464 et réalisé conformément au Code de déontologie de l’Association médicale mondiale (Déclaration d’Helsinki).
1. Extraction du cortex ovarien
- Enlever une partie du cortex ovarien (10 x 10 mm, épaisseur de 2-3 mm) d’un ou des deux ovaires sous anesthésie générale par chirurgie lapa....
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Résultats
Dans la première publication de l’approche IVA15,nous avons transplanté les cubes corticaux ovariens un par un dans les sites de greffe sous chirurgie laparoscopique(figure 1A). Puisque 100-150 cubes ovariens ont été utilisés, il a fallu 3-4 heures pour la greffe de tissu sous la chirurgie laparoscopic. En outre, certains cubes ovariens ont été perdus avant la greffe. Étant donné que la canule IVA pouvait transférer 20 à 30 cubes sur un site de greffe en même temps
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Discussion
Dans ce manuscrit, nous avons montré un protocole de laboratoire détaillé pour l’IVA sans drogue. L’IVA sans médicament est une nouvelle approche de traitement de l’infertilité pour les patientes de POR avec une diminution de la réserve ovarienne pour favoriser la croissance des follicules secondaires, ce qui entraîne des ovocytes plus matures après stimulation ovarienne et augmente dans une grossesse réussie20. Dans 15 patients de POR présentant la réserve ovarienne décroissante, cette approche a.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs confirment qu’ils ne sont pas en conflit d’intérêts.
Remerciements
Nous remercions Tatsuji Ihana, Sachiyo Kurimoto, Kazuko Takahasih, Yuki Yoshizawa, Maho Arashi, Kentaro Fujita, Erina Kudo, Yuka Kurimoto et Mayuko Wakatsuki pour leur soutien à la procédure IVA sans drogue et le professeur Aaron J.W. Hsueh (Stanford University School of Medicine, Stanford, CA) pour la lecture critique et l’édition du manuscrit. Nous remercions également Rebecca Truman et Gregory Truman d’avoir inséré une narration en anglais. Cette étude a été soutenue par la Japan Society for the Promotion of Science (JSPS), Scientific Research B (19H03801) et Challenging Exploratory Research (18K19624).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 4.5 onz récipient à échantillons | FALCON | 354013 | D’autres produits peuvent également convenir |
| Antenne parabole de 60 mm | FALCON | 351007 | D’autres produits peuvent également convenir |
| Champ stérile 50 x 50 cm | HOGY Medical | SR-823 | Tout type de produsts stériles peut également convenir |
| Pippete jetable | FALCON | 357575 | D’autres produits peuvent également convenir |
| Ciseaux fins, courbés | WPI | #14224-G | Bien que d’autres produits puissent également convenir, nous recommandons vivement d’utiliser ces produits |
| Plaque chauffante | TOKAI HIT | TPiE-SP | Utiliser en salle d’opération pour maintenir la température des boîtes contenant du tissu ovarien avant la transplantation Solution d’albumine |
| sérique humaine | Irvine Scientific | 9988 | Milieu pour la manipulation du tissu ovarien |
| Cannule IVA | KITAZATO | 446030 IVA-6030E | Canule spécifique pour l’autogreffe tissulaire |
| KAI medical Scalpel jetable | WPI | #5 10-A | Bien que d’autres produits puissent également convenir, nous recommandons vivement d’utiliser ce produit |
| Micro ciseaux, Courbé | WPI | #503364 | Bien que d’autres produits puissent également convenir, nous recommandons vivement d’utiliser ce produit |
| Modifié HTF Medium-HEPES | Irvine Scientific | 90126 | Support pour la manipulation du tissu ovarien |
| Gaze stérile | Osaki Medical | 15004 | Tout type de produst stériles peut également convenir |
| Pince à épiler suisse, Pointes incurvées | KAI | #504505 | Bien que d’autres produits puissent également convenir, nous recommandons vivement d’utiliser ces produits |
Références
- Liang, T., Motan, T. Mature Oocyte Cryopreservation for Fertility Preservation. Advances in Experimental Medicine and Biology. 951, 155-161 (2016).
- Yoon, T. K., et al. Live births after vitrification of....
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Réimpressions et autorisations
