Cet article décrit une technique de transplantation de tissus conçue pour tester les propriétés de signalisation et de structuration du cerveau antérieur basal au cours du développement craniofacial.
Article de méthode
Cet article décrit une technique de transplantation de tissus conçue pour tester les propriétés de signalisation et de structuration du cerveau antérieur basal au cours du développement craniofacial.
L’embryon aviaire a été utilisé comme système modèle pendant plus d’un siècle et a conduit à une compréhension fondamentale du développement des vertébrés. L’une des forces de ce système modèle est que l’effet et l’interaction entre les tissus peuvent être directement évalués dans les embryons chimériques. Nous avons déjà montré que les signaux du cerveau antérieur contribuent à la morphogenèse faciale en régulant la forme du domaine d’expression du hérisson sonique (SHH) dans la zone ectodermique frontonasale (FEZ). Dans cet article, la méthode de génération des chimères du cerveau antérieur et de fournir des illustrations des résultats de ces expériences est décrite.
Une grande partie de la recherche contemporaine en biologie du développement se concentre sur le rôle des gènes dans la formation des embryons. Il existe de bons outils pour examiner les mécanismes de développement d’un point de vue génétique. Cependant, les embryons sont assemblés et subissent une morphogenèse en réponse aux interactions tissulaires. Le système aviaire est un outil classique utilisé pour évaluer la variété des interactions tissulaires qui régulent le développement pour les raisons suivantes: l’embryologie est bien comprise, les embryons sont facilement accessibles, les outils d’analyse des systèmes aviaires sont bien développés et les embryons sont p....
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Le canard blanc de Pékin (Anas platyrhynchos), le poulet Livourne blanc (Gallus gallus) et la caille japonaise (Cortunix coturnix japonica) sont incubés à 37 °C dans une chambre humidifiée jusqu’à ce qu’ils atteignent le stade correspondant à HH7/817.
1. Préparation du tissu donneur
NOTE: La préparation des réactifs et des outils et la façon d’ouvrir les œufs pour la manipulation expérimentale ont été décrites6.
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Évaluation du chimérisme et de la contamination par les transplantations
Afin d’évaluer les chimères, l’étendue du chimérisme et la contamination du greffon par d’autres types de cellules doivent être abordées. La création de chimères par transplantation de tissus de caille dans des embryons de poussins permet ce type d’analyse. En utilisant l’anticorps QCPN, les cellules de caille peuvent être visualisées et distinguées des tissus hôtes (Figure 1 C,D). D.......
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La méthode décrite permet d’examiner les interactions tissulaires entre le cerveau antérieur basal et l’ectoderme adjacent. Cette approche diffère des méthodes précédentes de transplantation du cerveau antérieur, car le tissu du donneur était limité au cerveau antérieur ventral. Cela élimine la transplantation des cellules de la crête neurale, qui ont été montrées pour participer à la structuration de la morphologie faciale 9,10. Par conséquent, la restriction de.......
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Tous les auteurs n’ont rien à divulguer.
La recherche rapportée dans cette publication a été soutenue par le National Institute of Dental and Craniofacial Research des National Institutes of Health sous les numéros d’attribution R01DE019648, R01DE018234 et R01DE019638.
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| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 1x PBS | TEK | TEKZR114 | |
| 35x10 mm Boîte de Pétri | Falcon | 1008 | |
| DMEM | Thermofisher | 11965084 | |
| Porte-aiguille | Fine Science Tools | 26016-12 | |
| Neutral Red | Sigma | 553-24-2 | |
| No. 5 Dumont | Forceps Fine Science Tools | 11252-20 | |
| Pasteur Pipets | Thermofisher | 13-678-6B | |
| QCPN | anticorps Études de développement Banque d’hybridomes, Université de l’Iowa, Iowa, États-Unis | ||
| Ciseaux | Outils scientifiques fins | 14058-11 | |
| Aiguille en tungstène | Outils scientifiques fins | 26000 |
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