Allotransplantation tumorale chez Drosophila melanogaster avec un injecteur auto-nanolitre programmable

Résumé

Ce protocole fournit des conseils détaillés pour l’allotransplantation générationnelle initiale et continue des tumeurs de la drosophile dans l’abdomen des hôtes adultes pour étudier divers aspects de la néoplasie. En utilisant un appareil d’auto-injecteur, les chercheurs peuvent obtenir une efficacité et des rendements tumoraux améliorés par rapport à ceux obtenus par des méthodes manuelles traditionnelles.

Résumé

Ce protocole décrit l’allotransplantation des tumeurs chez Drosophila melanogaster à l’aide d’un appareil d’injection d’auto-nanolitres. Avec l’utilisation d’un appareil d’auto-injecteur, les opérateurs formés peuvent obtenir des résultats de transplantation plus efficaces et cohérents par rapport à ceux obtenus à l’aide d’un injecteur manuel. Ici, nous couvrons les sujets de manière chronologique: du croisement des lignées de drosophiles à l’induction et à la dissection de la tumeur primaire, en passant par la transplantation de la tumeur primaire dans un nouvel hôte adulte et la transplantation générationnelle continue de la tumeur pour des études approfondies. À titre de démonstration, nous utilisons ici des tumeurs de l’anneau imaginal induites par la surexpression du domaine intracellulaire Notch (NICD) pour la transplantation générationnelle. Ces tumeurs peuvent d’abord être induites de manière fiable dans un microenvironnement de zone de transition au sein des anneaux imaginaux des glandes salivaires larvaires, puis allogreffées et cultivées in vivo pour étudier la croissance tumorale continue, l’évolution et les métastases. Cette méthode d’allotransplantation peut être utile dans les programmes potentiels de dépistage de médicaments, ainsi que pour étudier les interactions tumeur-hôte.

Introduction

Ce protocole fournit un guide étape par étape pour l’allotransplantation des tumeurs de l’anneau imaginal des glandes salivaires larvaires (SG) de la drosophile dans l’abdomen d’hôtes adultes à l’aide d’un appareil d’injection d’auto-nanolitres (par exemple, Nanoject). Ce protocole fournit également des instructions pour la ré-allogreffe ultérieure des tumeurs dans de nouvelles générations d’hôtes adultes, ce qui offre des possibilités d’étude longitudinale continue des caractéristiques tumorales, telles que l’évolution tumorale et les interactions tumeur-hôte. Le protocole peut également être appliqué aux expériences de dépistage de drogues.

Protocole

1. Préparation de la tumeur de l’anneau imaginal SG

1. Croisez les mouches adultes avec les génotypes uas-NICD (mâle: 10-15 mouches) et Act-Gal4, UAS-GFP / CyO; tub-Gal80^ts (femelle vierge: 10-15 mouches) et laissez-les se reproduire pendant 1 jour à 18 ° C. Les mouches adultes sélectionnées doivent être âgées de 5 à 9 jours pour assurer une fertilité élevée.
2. Laisser les mouches adultes pondre des œufs dans la nourriture pour mouches contenue dans les flacons pendant 24 h à 18 °C, puis retirer les mouches adultes.
   REMARQUE: Les aliments pour mouches sont préparés à l’aide de la recette standard de semoule de maïs du

Résultats

Ici, nous avons effectué une allotransplantation générationnelle de tumeurs à anneau imaginal SG à l’aide de l’appareil d’auto-injecteur d’injection de nanolitres et avons ensuite effectué une imagerie en direct de la tumeur avec un microscope à balayage laser confocal, ce qui a permis une plongée plus profonde dans les sujets de la croissance tumorale, de la migration des cellules tumorales et des interactions tumeur-hôte. Lorsque le montage vole, collez-les sur une lame de microscope et retenez-les via un bloc de polyd.......

Discussion

L’allotransplantation tumorale peut aider les chercheurs à résoudre certains problèmes qui surviennent au cours de la croissance et de la progression de la tumeur de la drosophile. L’un de ces défis est le contournement des décès prématurés de larves ou d’adultes porteurs de tumeurs lors de la culture de tumeurs^{primaires 12}. Dans ce contexte, l’allotransplantation tumorale continue permet aux tumeurs de se développer indéfiniment, ce qui facilite les études longitudinales de la croissance.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Microscope confocal à balayage laser	Zeiss	LSM 980	Aussi connu sous le nom de « Zeiss LSM 980"
Nourriture pour mouches de semoule de maïs	Bloomington Drosophila Stock Center	N/A	Aussi connu sous le nom de « BDSC Standard Cornseil Food"Aiguille
dissection (30Gx1/2)	BD PrecisionGlide	305106
Plaque de dissection	Fisher Scientific	12-565B
Fly Tape	Fisherbrand	159015A
Adaptateur de fluorescence pour microscope Stero	Microscopie	Sciences SFA-UV	Aussi connu sous le nom de « NightSea Fluorescence Adapter"
Microscope à fluorescence	Zeiss	495015-0001-000	Aussi connu sous le nom de « Zeiss Stereo Discovery.V8"
Forceps	Fine Science Tools	11251-10	Aussi connu sous le nom de « Pince Dumont #5 »
Capillaire en verre (3.5'')	Drummond	3-000-203-G/X
Colle	Elmer	E305	Aussi connu sous le nom de « Elmer Washabale Clear Glue"
Microscope optique	Zeiss	435063-9010-100	Aussi connu sous le nom de « Zeiss Stemi 305"Extracteur
micropipettes	World Precision Instruments	PUL-1000	Aussi connu sous le nom de « Four Step Micropipette Puller«
Nanoject Apparatus	Drummond	3-000-204	Aussi connu sous le nom de « Nanoject II Auto-Nanoliter Injector"Seringue
Schneider’s Medium	ThermoFisher	21720001
(27G x1/2)	BD PrecisionGlide	305109
Vial	Fisherbrand	AS507

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