Considérations relatives à la collecte, au traitement et au stockage pour la recherche sur les biomarqueurs urinaires

Summary

Ce protocole vise à fournir des considérations pour la collecte, le traitement et le stockage des échantillons d’urine pour les études de biomarqueurs d’infection du tractus urinaire.

Abstract

Il existe plusieurs protéines urinaires qui semblent prometteuses en tant que nouveaux marqueurs des infections des voies urinaires. L’identification d’un nouveau biomarqueur qui a une plus grande précision prédictive par rapport aux méthodes de diagnostic actuelles a le potentiel d’améliorer considérablement la capacité de prise en charge des patients atteints d’infections des voies urinaires. Cependant, la collecte, le traitement et le stockage des échantillons peuvent tous potentiellement avoir un impact sur les résultats de la recherche sur les biomarqueurs. Il est nécessaire de comprendre les effets de chacune de ces étapes sur les études de biomarqueurs pour éclairer les recherches futures de haute qualité dans ce domaine, ainsi que pour examiner de manière critique d’autres études dans ce domaine. Ici, l’étude passe en revue la littérature concernant les effets de chaque étape du traitement des échantillons d’urine et rapporte les effets de diverses affections sur les protéines urinaires. Le protocole se concentrera sur les techniques de collecte, le temps et la température de stockage, les techniques de traitement, l’utilisation de réactifs et la congélation à long terme sur la stabilité des biomarqueurs. Il se concentrera sur les protéines, mais abordera brièvement d’autres matériaux qui pourraient être utilisés dans la recherche sur les biomarqueurs. Ce faisant, ce protocole fournira un guide aux futurs chercheurs pour les aider à concevoir des études de biomarqueurs urinaires.

Introduction

Les infections des voies urinaires (IVU) sont l’une des infections bactériennes les plus courantes chez les enfants et les adultes¹. Si le diagnostic d’infection urinaire dans certaines populations peut être simple, il peut être plus complexe dans d’autres, comme celles ayant une vessie neuropathique². La capacité de diagnostiquer avec précision les infections urinaires contribuera à améliorer les efforts de gestion des antibiotiques en diminuant l’utilisation d’antibiotiques inutiles et pourrait aider au diagnostic plus précoce des infections urinaires, diminuant ainsi le risque de morb....

Protocol

Ce protocole suit les lignes directrices du comité d’éthique de la recherche sur l’être humain de l’établissement. S’assurer que l’approbation est obtenue du comité d’examen de l’établissement (CEI) avant la collecte et l’utilisation d’échantillons biologiques à des fins de recherche.

1. Collecte

1. Prélever un échantillon d’urine dans un gobelet stérile. Décidez du type d’échantillon d’urine, ainsi que des critères d’inclusion et d’exclusion spécifiques, en fonction de la conception de l’étude. Pour les études d’infection urinaire, utilisez la méthode de capture propre ou le cathétérisme pour évit....

Results

La centrifugation a eu un faible impact sur les niveaux de NGAL. Les échantillons centrifugés conservés à -80 °C présentaient des concentrations de NGAL inférieures à celles des échantillons non centrifugés (2,17 ng/mL ± 0,32 ng/mL, 2,77 ng/mL ± 0,21 ng/mL). Les cycles de gel ont également eu un impact sur les niveaux de NGAL après le troisième cycle de gel-dégel. (Figure 2). Parmi les conditions étudiées (centrifugation, cycles de gel-dégel et température de stockage), la température de sto.......

Discussion

L’importance de produire des résultats cohérents et reproductibles ne se limite pas au succès des études individuelles, mais permettra également une meilleure comparaison des résultats au sein de la littérature⁹. La variation entre les études dans les étapes clés de la procédure peut introduire un biais irréversible qui peut affecter les signaux des biomarqueurs et leur interprétation, ce qui peut être responsable de divergences entre plusieurs études

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acide borique	Sigma-Aldrich	B6768	À prendre en compte pour les échantillons qui ne peuvent pas être traités rapidement et congelés
Boîtes de congélation	Fisher Scientific	03-395-464
Tubes à microcentrifuger	Thomas scientific	1149X93
NGAL ELISA Kit	R& D Systems	DLCN20	Utilisé pour créer des résultats représentatifs
Pipette et pointes	En fonction de la taille de la pipette et du volume de fluide.
Azoture de sodium	Sigma-Aldrich	S2002	À prendre en compte pour les échantillons qui ne peuvent pas être rapidement traités et congelés
Gobelets de collecte d’urine	Thermo Scientific	3122B03ORG	Gobelets stériles non nécessaires sauf si nécessaire pour d’autres études