Utilisation d’un baseplatage et d’un miniscope préancré avec une lentille objective pour la recherche transitoire de calcium chez la souris

Yi-Tse Hsiao; Angela Yu-Chi Wang; Ting-Yen Lee; Ching-Yuan Chang

doi:10.3791/62611

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Article de méthode

Utilisation d’un baseplatage et d’un miniscope préancré avec une lentille objective pour la recherche transitoire de calcium chez la souris

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DOI :

10.3791/62611

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5 juin 2021

Yi-Tse Hsiao¹ , Angela Yu-Chi Wang¹ , Ting-Yen Lee¹ , Ching-Yuan Chang¹

¹Department of Veterinary Medicine, School of Veterinary Medicine, National Taiwan University

Dans cet article

Résumé

Le retrait du ciment dentaire pendant le durcissement déplace la plaque de base. Ce protocole minimise le problème en créant une fondation initiale du ciment dentaire qui laisse de l’espace pour cimenter la plaque de base. Quelques semaines plus tard, la plaque de base peut être cimentée en position sur cet échafaudage en utilisant peu de ciment neuf, réduisant ainsi le retrait.

Résumé

Les neuroscientifiques utilisent des microscopes miniatures (miniscopes) pour observer l’activité neuronale chez les animaux qui se comportent librement. L’équipe Miniscope de l’Université de Californie à Los Angeles (UCLA) fournit des ressources ouvertes aux chercheurs pour construire eux-mêmes des miniscopes. Le V3 UCLA Miniscope est l’un des miniscopes open-source les plus populaires actuellement utilisés. Il permet l’imagerie des transitoires de fluorescence émis par les neurones génétiquement modifiés à travers une lentille objective implantée sur le cortex superficiel (un système à une lentille), ou dans les zones profondes du cerveau grâce à une combinaison d’une lentille relais implantée dans le cerveau profond et d’une lentille objectif qui est préancrée dans le miniscope pour observer l’image relayée (un système à deux lentilles). Même dans des conditions optimales (lorsque les neurones expriment des indicateurs de fluorescence et que la lentille relais a été correctement implantée), un changement de volume du ciment dentaire entre la plaque de base et sa fixation au crâne lors du durcissement du ciment peut provoquer un désalignement avec une distance altérée entre l’objectif et les lentilles relais, entraînant une mauvaise qualité d’image. Une plaque de base est une plaque qui aide à monter le miniscope sur le crâne et fixe la distance de travail entre l’objectif et les lentilles de relais. Ainsi, les changements de volume du ciment dentaire autour de la plaque de base modifient la distance entre les lentilles. Le présent protocole vise à minimiser le problème de désalignement causé par les changements de volume dans le ciment dentaire. Le protocole réduit le désalignement en construisant une fondation initiale en ciment dentaire lors de l’implantation de lentilles relais. Le temps de convalescence après l’implantation est suffisant pour que la fondation du ciment dentaire durcisse complètement la plaque de base, de sorte que la plaque de base peut être cimentée sur cet échafaudage en utilisant le moins de ciment neuf possible. Dans le présent article, nous décrivons des stratégies de baseplatage chez la souris pour permettre l’imagerie de l’activité neuronale avec une lentille objective ancrée dans le miniscope.

Introduction

Les rapporteurs d’activité fluorescents sont idéaux pour l’imagerie de l’activité neuronale car ils sont sensibles et ont de grandes plages dynamiques ^1,2,3. Par conséquent, un nombre croissant d’expériences utilisent la microscopie à fluorescence pour observer directement l’activité neuronale 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15