Les bandelettes immunochromatographiques à flux latéral (CSI) à base de membrane sont des outils utiles pour l’autodiagnostic à faible coût et ont été appliquées efficacement à la détection des toxines, de l’indice physiologique et des biomarqueurs cliniques. Dans ce protocole, nous fournissons une description détaillée des étapes de développement d’un immunodosage rapide, sensible et quantitatif à flux latéral (en utilisant les AuNPs comme marqueur et les mAbs comme sonde). La procédure décrit la préparation et la caractérisation de l’or colloïdal, la synthèse du conjugué AuNP-mAb, l’assemblage de la bande immunochromatographique et l’étude méthodologique du test. Les résultats ont montré que les bandelettes finales peuvent être utilisées pour l’autodiagnostic rapide et pratique d’une petite molécule, ce qui peut fournir un outil alternatif dans l’analyse rapide et précise des indices physiologiques et biologiques.
Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.
Article de méthode
Développement d’une bande immunochromatographique à flux latéral pour la détection rapide et quantitative de composés de petites molécules
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Introduction
Les bandelettes immunochromatographiques à flux latéral (CSI) à base de membrane sont des outils utiles pour une détection rapide et à faible coût. La membrane de nitrocellulose en tant que support et l’or colloïdal en tant que marqueurs des réactifs de diagnostic rapide par chromatographie immunitaire sont la méthode POCT (point of care testing) la plus couramment utilisée, et la portée des tests du projet est plus large. Depuis leur application initiale dans la surveillance pendant la grossesse, leur utilisation a été étendue pour surveiller l’état de coagulation sanguine1,2, les lésions myocardiques
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Protocole
Toutes les procédures effectuées dans cette étude ont été approuvées par le Comité d’éthique de l’Université de médecine chinoise de Beijing (numéro d’approbation 2017BZYYL00120).
1. Préparation et caractérisation de l’or colloïdal
REMARQUE: Pour la synthèse de l’or colloïdal, comme l’or colloïdal est facilement adsorbé sur la paroi interne du récipient et est sujet à la précipitation par les impuretés, le récipient pour la synthèse et le stockage de l’or colloïdal doit être soigneusement nettoyé et trempé dans de l’acide (40 mL d’eau distillée, 360 mL d’acide sulfurique concentré, 20 g de dichroma....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Résultats
Caractérisation de l’or colloïdal
Les solutions d’or colloïdal préparées étaient rouge clair. Des analyses TEM ont été utilisées pour déterminer la morphologie et la forme des AuNPs (Figure 2A-D). Les figures 2A et 2B révèlent que les particules sont de forme polyédrique et uniformément réparties. Le diamètre moyen des AuNPs s’est avéré être d’environ 14 nm(Figure 2C).
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Discussion
Dans ce travail, nous présentons un protocole pour la préparation de mAbs contre de petites molécules dérivées de produits naturels. Les étapes essentielles et les questions nécessitant une attention particulière dans la procédure ont été décrites, et nous avons démontré l’utilité de ce protocole en utilisant le SSD à petite molécule comme exemple. Des exemples de spectres, d’images TEM, de résultats quantitatifs et d’investigations méthodologiques sont présentés dans des données représentatives. Par conséquent, nous avo.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par les Fonds spéciaux pour la recherche fondamentale des établissements d’enseignement supérieur affiliés aux départements centraux. Nous apprécions le soutien de l’équipe de recherche fondamentale sur la prescription classique de l’Université de médecine chinoise de Beijing.
....Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Solution d’acide chloroaurique (HAuCl4) | Tianjin Fu Chen Chemical Reagents Factory | JY-SJ102 | |
| Albumine sérique bovine | AMRESCO | 332 | |
| Tube à centrifuger 15 mL | Tube | Corning 430645 | |
| 50 mL | Corning | 430828 | |
| Plaques ELISA, 96 puits | NUNC | 655101 | |
| Papier filtre | Sinopharm | H5072 | |
| Membranes en fibre de verre | Jieyi | XQ-Y6 | |
| chèvre-anti-souris Anticorps IgG | applygen | C1308 | |
| Membranes nitrocellulosiques | Millipore | millipore 180 | |
| ovalbumine | Pékin BIODEE | 5008-25g | |
| PEG20000 | Sigma Aldrich | ||
| Pipette 10mL | COSTAR | 4488 | |
| Pipette 25mL | FALCON | 357525 | |
| feuilles de PVC semi-rigides | Jieyi | JY-C104 | |
| Citrate de sodium | Beijing Chemical Works | C1034 | |
| periodate de sodium | Sinopharm Chemical | BW-G0008 | |
| Sulfo-GMBS | Perbio Science Allemagne | 22324 | |
| TipOne Tips 1 000 & micro ; L | Starlab | S1111-2021 | |
| Tris-HCl | Solarbio | 77-86-1 | |
| TWEEN 20 | Solarbio | 9005-64-5 |
Références
- Huang, X., et al. Membrane-based lateral flow immunochromatographic strip with nanoparticles as reporters for detection: A review. Biosensors and Bioelectronics. 75, 166-180 (2016).
- Chang, H. -F., Wang, J. -Q., Wang, B., Deng, A. -P.
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Réimpressions et autorisations
