Production de souris humanisées par greffe de capsule rénale thymique, injection de cellules CD34+ et administration de cytokines

Résumé

Les modèles de souris humanisés fournissent une représentation plus précise du microenvironnement immunitaire humain. Ce manuscrit décrit le processus par lequel ces modèles sont créés par une greffe rénale de thymus humain, l’injection de cellules CD34⁺ humaines et l’administration ciblée de transgènes de cytokines humaines pour favoriser la prolifération et la différenciation des cellules CD34⁺ .

Résumé

Les modèles animaux fournissent une traduction vitale entre la recherche biomédicale in vitro et in vivo . Les modèles murins humanisés fournissent un pont dans la représentation des systèmes humains, permettant ainsi une étude plus précise de la pathogenèse, des biomarqueurs et de nombreuses autres requêtes scientifiques. Dans cette méthode décrite, des souris NOD-scid IL2Rγnull (NSG) immunodéficientes sont implantées avec du thymus autologues, injectées avec des cellules CD34⁺ dérivées du foie, suivies d’une série d’injections de cytokines. Contrairement à d’autres modèles de nature similaire, le modèle décrit ici favorise une meilleure reconstitution des cellules immunitaires en délivrant des cytokines et des facteurs de croissance via des transgènes codés dans des vecteurs basés sur l’ADN AAV8 ou pMV101. De plus, il offre une stabilité à long terme avec des souris reconstituées ayant une durée de vie moyenne de 30 semaines après des injections de CD34⁺ . Grâce à ce modèle, nous espérons fournir une méthode stable et efficace d’étude de l’immunothérapie et des maladies humaines dans un modèle murin, démontrant ainsi la nécessité de modèles précliniques prédictifs.

Introduction

Bien que les modèles animaux aient permis de mieux comprendre les systèmes cellulaires et moléculaires, le défi reste d’élucider les subtilités des systèmes spécifiques à une espèce, tels que l’immunité, la physiologie et d’autres domaines de la pathologie. Les primates non humains (PNH), tels que les chimpanzés, ont historiquement été utilisés pour compenser les lacunes dans la recherche sur les modèles ; cependant, le modèle des PSN peut être assez coûteux et inaccessible, d’autant plus que leur utilisation a été interdite en Europe¹.

À la suite d’une procédure de greffe réussie, l....

Protocole

Tous les protocoles impliquant l’utilisation d’animaux sont étroitement surveillés par le Comité Institutionnel de Protection et d’Utilisation des Animaux (IACUC) de l’Institut Wistar. Le laboratoire adhère aux directives établies par ce comité et le vétérinaire traitant pour assurer la santé, la sécurité et le bien-être des animaux impliqués. Avant de suivre ce protocole, l’approbation du vétérinaire et de l’IACUC est requise, et les individus peuvent présenter des variations dans les techniques chirurgicales spécifiques et la manipulation des animaux par rapport au protocole, selon les conseils des parties susmentionnées impliquées ....

Résultats

Après une intervention chirurgicale réussie et des injections postopératoires appropriées, la différenciation de CD34⁺ peut être confirmée par cytométrie en flux. Environ 8 semaines après la chirurgie, les souris sont saignées en préparation du FACS, récurrente toutes les 2 semaines jusqu’à ce qu’un seuil spécifique de cellules immunitaires humaines soit atteint, comme décrit précédemment¹⁰. En bref, 100 ml de sang ont été prélevés dans des tubes de prélèvement sanguin recouverts de lit.......

Discussion

Ce manuscrit décrit ici la génération de souris humanisées via le thymus fœtal humain greffé sous la capsule rénale et l’injection ultérieure de CD34⁺ pour recréer un système immunitaire humain.

Bien que le protocole fonctionne pour créer le meilleur modèle possible, certaines étapes sont essentielles à la viabilité. Par exemple, lors de l’isolement de CD34⁺ , il est essentiel qu’une personne regardant au microscope puisse identifier les .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Tampon de lyse ACK	Life Technologies Corporation
BD Microconteneur	BD		Tubes de prélèvement sanguin
Busulfan	Sigma	B2635-25g	Médicament irradiant ; sensible à la lumière
CD34 Microbilles	Miltenyi Biotec	130-046-702	kit de billes d’anticorps ; stocké à 4 ° ; C
CKIT	Aldevron	cytokine personnalisée	; stockée à -20 ° ; c
collagénase/dispase	Roche Diagnostics	11097113001	stocké à 4 ° ; C
FcR Réactif bloquant	Miltenyi Biotec	130-046-702	kit de billes d’anticorps ; stocké à 4 ° ; C
Tissu fœtal (foie et thymus)	Advanced Bioscience Resources		Livré le jour même ou le jour du jour
Ficoll	GE Healthcare	17-1440-03	Stocké à température ambiante
FLT3	Aldevron	125964	cytokine ; stocké à -20 ° ; C
Pince	Divers	Aiguille
de seringue Hamilton	Divers	Divers	22 G ; 3 points ; 2" de longueur
Hémostatiques	Divers
Divers Colonnes MS	Miltenyi Biotec	130-042-201	séparateur magnétique
PBS	Gibco	14190-136	Stocké à température ambiante
Primocin	Invivogen	amt-pm1	; stocké à 4 &° C
RPMI	Corning	10-040-CM	stocké à 4 ° ; C
SCF	Aldevron	125962	cytokine ; stocké à -20 ° ; C
Ciseaux chirurgicaux	Divers
THPO	Aldevron	125963	cytokine ; stockés à -20 ° ; C
Boîte de Pétri traitée pour tissus	Corning	430167
Colle VetBond	3M	1469SB	colle
Suture Visorb Suture	résorbable Stoelting Co	5046	, taille 4, coupe 19 mm

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