Cette étude décrit la mesure directe de la production hépatique de glucose dans un modèle murin du syndrome des ovaires polykystiques en utilisant un traceur de glucose isotopique stable via la veine caudale à jeun et riche en glucose en tandem.
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Article de méthode
Évaluation de la production de glucose hépatique dans un modèle murin du syndrome des ovaires polykystiques
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le syndrome des ovaires polykystiques (SOPK) est une maladie courante qui entraîne des troubles du métabolisme du glucose, tels que la résistance à l’insuline et l’intolérance au glucose. Le métabolisme du glucose dérégulé est une manifestation importante de la maladie et est la clé de sa pathogenèse. Par conséquent, les études impliquant une évaluation du métabolisme du glucose dans le SOPK sont de la plus haute importance. Très peu d’études ont quantifié la production hépatique de glucose directement dans les modèles SOPK à l’aide de traceurs de glucose non radioactifs. Dans cette étude, nous discutons des instructions étape par étape pour la quantification du taux de production hépatique de glucose dans un modèle murin SOPK en mesurant l’enrichissement M + 2 du [6,6-2H2]glucose, un traceur de glucose isotopique stable, par chromatographie en phase gazeuse - spectrométrie de masse (SMGC). Cette procédure implique la création d’une solution de traceur de glucose isotopique stable, l’utilisation de la mise en place d’un cathéter veineux de la queue et la perfusion du traceur de glucose à jeun et riche en glucose chez la même souris en tandem. L’enrichissement du [6,6-2H2]glucose est mesuré à l’aide du dérivé du pentaacétate dans le SMGC. Cette technique peut être appliquée à une grande variété d’études impliquant une mesure directe du taux de production hépatique de glucose.
Introduction
Le syndrome des ovaires polykystiques (SOPK) est un trouble fréquent chez 12 % à 20 % des femmes en âge de procréer1,2. Il s’agit d’une maladie complexe entraînant des phénotypes variables impliquant des ovaires polykystiques, des règles irrégulières et des preuves cliniques ou de laboratoire d’hyperandrogénémie, et elle est généralement diagnostiquée lorsqu’une femme répond à deux des trois critères3. Un aspect prédominant du SOPK, et un facteur clé de sa pathogenèse, est les dérangements métaboliques que l’on trouve chez les femmes atteintes de la maladie. Les femmes atteintes du SOPK....
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Protocole
Toutes les procédures animales ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux (IACUC) du Baylor College of Medicine.
1. Préparation du [6,6-2H2]glucose
- Un jour avant la procédure, préparez le traceur de glucose isotopique stable dans une solution saline normale. Pour cette expérience, le glucose [6,6-2H2] a été utilisé comme traceur pour mesurer le taux d’apparition du glucose plasmatique.
REMARQUE: Dans cette expérience, la production de glucose pendant le jeûne et les conditions riches en glucose ont été mesurées, de sorte que ....
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Résultats
À l’aide d’équations de dilution isotopique décrites précédemment, le taux de glucose plasmatique total (glucoseRa) a été calculé à partir de l’enrichissement M+2 du [6,6-2H2]glucose dans des conditions à jeun et riches en glucose à l’aide du dérivé de pentaacétate21. Dans des conditions d’équilibre, on suppose que le taux d’apparition du glucose est égal au taux de disparition du glucose. Dans le groupe témoin, le glucoseRa total était de 19,98 ± 2,53 m.......
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Discussion
L’hyperglycémie et le métabolisme anormal du glucose / homéostasie sont des caractéristiques du SOPK. Le taux de glucose dans le sang est maintenu par une combinaison de glucose provenant de l’alimentation et de la production de glucose via la glycogénolyse et la gluconéogenèse et la glycogenèse, sous le contrôle des hormones et des enzymes. La production hépatique de glucose est supprimée par la présence d’une augmentation des taux de glucose circulants. Dans les troubles du métabolisme anormal du glucose, la r.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par des subventions de formation du Département d’obstétrique et de gynécologie, Baylor College of Medicine (ALG) et une subvention de recherche R-01 (Subvention # DK114689) pour CSB, SC et JM des National Institutes of Health.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Solution de chlorure de sodium à 0,9 % | McKesson | 275595 | |
| 10 mL Seringue à embout BD Luer-Lok | VWR | 75846-756 | Deux seringues par animal (une pour une solution isotopique de glucose, une pour une solution isotopique riche en glucose) |
| Ruban transparent transparent de 1 pouce | 3M | 70200400169 | |
| 1 pouce Ruban d’étiquetage | Fisher | GS07F161BA | La marque est un exemple |
| Seringue de 5 mL contenant une solution saline héparannique | McKesson | 191-MIH-2235 | On peut également préparer une solution de rinçage à l’héparine (10 unités/mL d’héparine dans du chlorure de sodium à 0,9 %) |
| 5 mm Medipoint Goldenrod Animal | Lances Fisher Scientific | NC9891620 | 5 mm si l’animal a entre 2 et 6 mois |
| Acétone | Sigma-Aldrich | 650501 | |
| Agitateur à plaque chauffante Advanced | VWR | 97042-602 | La marque est un exemple |
| : aiguilles BD de calibre 27 0,5 pouce | Health Warehouse | A283952 | |
| aiguilles BD 30 de calibre 0,5 pouce | Medvet | 305106 | |
| BD Intramedic Tube en polyéthylène (PE) 0,28 mm ID x 0,61 mm | VWR | 63019-004 | |
| BD Intramedic Tube en polyéthylène (PE) 0,28 mm ID x 0,61 mm | VWR | 63019-004 | |
| Bécher, 1000 mL | N’importe quelle marque | ||
| Granulés | |||
| Flacons en verre transparent VOA avec bouchon fermé | Fisher Scientific | 05-719-120 | Pour le stockage d’échantillons d’acétone et de prise de sang |
| Pince crocodile édentée en cuivre pour garrot | Amazon N’importe | quelle marque ; pinces crocodiles lisses et édentées en cuivre solide | |
| D-(+)-glucose >99,5 % | Sigma-Aldrich | G8270 | |
| D-glucose (6,6-D2, 99 %) | Cambridge Isotope Laboratories, Inc. | DLM-349-PK | |
| Tube silastique Dow Corning 0,3 mm ID x 0,64 mm OD | VWR | 62999-042 | |
| Loupe | Amazon | N’importe quelle marque ; similaire à LANCOSC Loupe avec microbalance de lumière et de support | |
| Ohaus Adventurer Pro | AV264C | Tout modèle similaire avec une précision de 0,0001g peut être utilisé | |
| Bouteille Nalgene, 500 mL | Sigma-Aldrich | B0158-12EA | Ou toute marque similaire ; scie en deux (y compris le couvercle) et coupe l’encoche de la taille d’une queue dans le fond |
| Pompe multi-seringues PHD Ultra | Appareil Harvard | 70-3024A | |
| plexiglas | N’importe quelle marque ; pour stabiliser la souris lors de l’insertion du cathéter | ||
| Feuilles et séparateurs | N’importe quelle marque ; utilisé pour mettre les souris en cage pendant la perfusion |
Références
- March, W. A., et al. The prevalence of polycystic ovary syndrome in a community sample assessed under contrasting diagnostic criteria. Human Reproduction. 25 (2), 544-551 (2009).
- Yildiz, B. O., et al.
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Réimpressions et autorisations
