Article de méthode

Détermination des concentrations en protéines totales et en protéines bioactives dans le colostrum bovin

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DOI :

10.3791/63001

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10 décembre 2021

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1Department of Molecular Biology and Genetics, Çanakkale Onsekiz Mart University, 2Uluova Dairy Farm, 3Department of Nutrition, University of Nevada, Reno, 4Department of Food Science and Technology, University of Nebraska, Lincoln, 5Evolve BioSystems Inc.

Dans cet article

Résumé

Le colostrum bovin est à la fois une source primaire de nutriments et un soutien immunologique pour le veau nouveau-né. La compréhension du niveau des protéines thérapeutiques (lactoferrine et IgG) est importante pour le dosage et la normalisation du colostrum bovin pour la consommation humaine.

Résumé

Le colostrum est un liquide biologique complexe produit par les mammifères immédiatement après la parturition. Il répond à tous les besoins nutritionnels des nouveau-nés en tant que bonne source de macro et micronutriments, de peptides bioactifs et de facteurs de croissance. Le colostrum bovin est également une source potentielle de nutrition et bioactif en raison de sa riche teneur en protéines qui comprend des immunoglobulines G (IgG) et de la lactoferrine. Cependant, le taux de lactoferrine et d’IgG dans le colostrum bovin change nettement pendant la période de lactation. Par conséquent, la surveillance de la concentration d’IgG et de lactoferrine pour l’utilisation du colostrum bovin comme source de protéines est une question importante à étudier. Les méthodes décrites dans cet article décrivent comment déterminer la teneur en protéines, ainsi que les concentrations spécifiques de lactoferrine et d’IgG. Ces méthodes comprennent les étapes suivantes : Isolement des protéines de colostrum bovin, Détermination de la concentration en protéines par dosage de l’acide bicchoninique (BCA), Visualisation des protéines par SDS-PAGE, Détermination de la lactoferrine et de la concentration en IgG à l’aide d’un test ELISA.

Introduction

Le colostrum est la sécrétion initiale de la glande mammaire produite par les mammifères peu de temps après la parturition. Le colostrum est riche en macro et micronutriments, en peptides antimicrobiens et en facteursde croissance 1,2,3,4. La composition varie progressivement au fil du temps tout au long de la transition vers le lait mature 5,6,7 mais surtout dans les 24 heures suivant la parturition8. La composition du colostrum est également influencée par des facteurs maternels, notamment l’âge, la parité, la race, la santé et l’état nutritionnel, ainsi que par des facteurs extrinsèques, notamment la saison, la parturition prématurée, la lactation prématurée, les facteurs de manipulation du colostrum (colostrum de mise en commun et température de stockage) et l’induction de la parturition 9,10,11. Par rapport au lait mature, le colostrum contient moins de lactose et plus de matières grasses, de protéines, de peptides, d’azote non protéique, de cendres, d’hormones, de facteurs de croissance, de cytokines, de nucléotides, de vitamines et de minéraux12. Le colostrum bovin contient un large éventail de protéines, notamment des immunoglobulines, de la lactoferrine, de la α-lactalbumine (α-LA), de la β-lactoglobuline (β-Lg), de la lactoperoxydase et de plusieurs facteurs de croissance13. La concentration en protéines totales du colostrum bovin varie entre 11,26 mg/mL et 169,55 mg/mL14. La teneur en protéines comprend le lactosérum et la caséine à une concentration moyenne de 124,00 mg/mL et 26,00 mg/mL, respectivement15. La portion lactosérum contient trois principaux types d’immunoglobulines (Ig) : les IgG (85 % à 90 %), les IgM (7 %) et les IgA (5 %)16. Les principales Ig du colostrum bovin sont les IgG, qui fournissent une immunité passive et modulent les systèmes immunitaires adaptatif et inné chez le veau17. La concentration initiale en Ig du premier colostrum bovin en lactation peut varier de 20 à 200 mg/mL et diminuer à environ 0,4-1,0 mg/mL18. La concentration moyenne d’IgG est d’environ 60 mg/mL et diminue régulièrement jusqu’à des niveaux inférieurs à 1 mg/mL tout au long de la transition vers le lait mature19.

Une autre protéine bioactive importante dans le colostrum est la lactoferrine, une glycoprotéine liant le fer avec une concentration de 1,5 à 5 mg / mL. Les propriétés de la lactoferrine comprennent l’amélioration de l’absorption du fer ainsi que la possession d’une activité antimicrobienne20,21, la liaison des lipopolysaccharides, la modulation immunitaire et la stimulation de la croissance des cellules épithéliales intestinales et des fibroblastes22. Le colostrum bovin contient également de la α-lactalbumine et de la β-lactoglobuline. Ces protéines sont des sources d’acides aminés essentiels et ont également une activité bactéricide 23,24,25. Les concentrations moyennes de α-LA et de β-Lg dans le colostrum sont en moyenne de 2,77 mg/mL2 et de 11,5 mg/mL26, respectivement. Par la suite, ces concentrations diminuent à 1-1,5 mg/mL27 et à 4,8 mg/mL26 dans le lait mature. Le colostrum contient également une quantité importante de lactoperoxydase (moyenne de 22,8 μg/mL) et de lysozyme (moyenne de 0,40 μg/mL)26. La lactoperoxydase est une glycoprotéine qui possède une activité antimicrobienne contre les bactéries à Gram positif et négatif28 en produisant des espèces réactives de l’oxygène. Le lysozyme fonctionne comme un agent antimicrobien en clivant le composant peptidoglycane des parois cellulaires bactériennes, entraînant ainsi la mort cellulaire29,30.

En raison de leurs propriétés, les IgG et la lactoferrine sont transformées en différents produits alimentaires pour enrichir les préparations pour nourrissons, les compléments alimentaires, les préparations riches en protéines pour les convalescents et les sportifs ainsi qu’en pharmacologie et en cosmétologie 31,32,33. Le colostrum bovin représente une source importante d’IgG et de lactoferrine. Cependant, la composition de ces protéines bioactives dans le colostrum bovin change nettement au cours de la période de lactation. Par conséquent, il est essentiel de surveiller les changements dans la concentration de ces protéines bioactives dans les échantillons de colostrum utilisés pour la recherche et la transformation des aliments. Cette étude vise à décrire les méthodes de suivi de la concentration et de la composition des protéines totales, de la lactoferrine et des IgG dans le colostrum bovin pendant les 6 jours suivant le vêlage.

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Protocole

Des échantillons de colostrum ont été prélevés pendant 6 jours après le vêlage à midi sur la période juillet-août, sur 28 vaches laitières Holstein de la société de négoce de lait Uluova à Çanakkale, en Turquie, et surgelées. Les échantillons prélevés le même jour ont été regroupés en fonction du jour de chaque échantillon et analysés pour leurs concentrations totales en protéines, en lactoferrine et en IgG. Tous les échantillons ont été analysés en double.

1. Préparation de l’échantillon

  1. Mélanger 200 μL de colostrum bovin avec 400 μL de dH2O pour obtenir un échantillon dilué pour l’analyse. Diluez tous les échantillons en conséquence.
  2. Centrifugeuse d’échantillons dilués et non dilués à 4 °C, 1000 x g pendant 30 min.
  3. Séparez la phase intermédiaire dans un nouveau tube étiqueté de manière appropriée. Répétez l’étape 1.2. pour obtenir une phase médiane claire. Conservez l’ensemble de la phase intermédiaire et des échantillons dilués à -20 °C, s’ils ne sont pas utilisés immédiatement.
  4. Utilisez la phase intermédiaire obtenue à partir d’échantillons dilués pour les dosages BCA, SDS-PAGE et Lactoferrin. Prélever la phase intermédiaire à partir d’échantillons non dilués pour le dosage des IgG.
  5. Préparez des dilutions d’échantillon pour chaque échantillon afin de vous assurer que les lectures se situent dans la plage de la courbe standard. Diluer chaque phase intermédiaire obtenue à partir des échantillons dilués à 1:300 pour le dosage BCA et 1:30 000 pour le dosage de la lactoferrine, et diluer chaque phase intermédiaire obtenue à partir d’échantillons non dilués à 1:400 000 pour le dosage des IgG.
    REMARQUE : Les facteurs de dilution sont déterminés en fonction de la valeur d’absorbance et de la courbe standard.

2. Déterminez la concentration en protéines à l’aide du kit de dosage des protéines BCA

  1. Préparation des étalons et réactifs
    1. Utilisez les réactifs fournis dans la trousse disponible dans le commerce (voir la table des matériaux) à utiliser pour le dosage : le réactif BCA A, contenant du carbonate de sodium, du bicarbonate de sodium, de l’acide bicinchoninique et du tartrate de sodium dans de l’hydroxyde de sodium 0,1 M. Le réactif BCA B contient 4 % de sulfate cuivrique. Les étalons d’albumine (BSA) contiennent de l’albumine sérique bovine à 2,0 mg/mL dans une solution saline à 0,9 % et de l’azoture de sodium à 0,05 %.
    2. Équilibrez tous les échantillons et les étalons de protéines à température ambiante (RT).
    3. Préparez des volumes suffisants de réactif de travail (WR) en mélangeant un rapport de 50:1 du réactif A :B. 200 μL de WR sont nécessaires pour chaque échantillon et étalon.
    4. Préparer les étalons d’albumine diluée (BSA) selon le schéma de dilution suivant (tableau 1), qui présente une plage de travail entre 20 et 2 000 μg/mL de concentration finale de BSA. Utilisez le dH2O comme diluant.

Tableau 1 : Système de dilution des normes BSA.

FioleVolume de diluant (μL)Volume et source de BSA (μL)Concentration finale de BSA (μg/mL)
Un0300 μl de stock2000
B125375 μL de stock1500
C325325 μL de stock1000
D175175 de dilution de flacon B750
E325325 de dilution du flacon C500
F325325 de dilution du flacon E250
G325325 de dilution du flacon F125
H400100 flacons de dilution G25
Je40000 = Blanc
  1. Procédure de dosage de l’ACF
    1. Transvaser 25 μL de chaque étalon ou échantillon de BCA dans une plaque à 96 puits. Ajouter 200 μL de WR à chaque étalon ou échantillon contenant un puits. Bien mélanger la plaque sur un agitateur pendant 30 s.
    2. Couvrir la plaque avec une scelleuse pour plaques et incuber à 37 °C pendant 30 min. Après l’incubation, laissez les réactions s’équilibrer à la RT pendant environ 10 min. Lire chaque plaque à 562 nm à l’aide d’un lecteur de microplaques avec son logiciel associé.
  2. Génération de la courbe standard et détermination des résultats
    1. Enregistrer les valeurs d’absorbance des étalons et des échantillons. Veuillez consulter le tableau 1 pour la série de dilution. Soustrayez les valeurs d’absorbance du blanc de l’étalon de chaque valeur d’absorbance des étalons et de l’échantillon. Faites la moyenne des lectures en double pour chaque étalon et échantillon afin d’estimer la concentration totale en protéines.
    2. Construisez une courbe standard en traçant l’absorbance moyenne corrigée pour chaque étalon sur l’axe des x et la concentration sur l’axe des y. Dessinez une courbe linéaire à l’aide d’un logiciel approprié capable d’ajuster la courbe à quatre paramètres.
    3. Utilisez la courbe standard pour déterminer la concentration de chaque échantillon en interpolant sa réponse à la concentration. Multipliez par le facteur de dilution (étape 1.5) pour obtenir la concentration réelle de l’échantillon.

3. Visualisation de la protéine à l’aide du test SDS-PAGE

  1. Préparation de l’échantillon et des solutions
    1. Préparer des solutions mères
      1. Préparez une solution de persulfate d’ammonium (APS) à 10 % (p/v), Tris-HCl 1,5 M pH 8,3, Tris-HCl à 10 % (p/v) (APS) (préparez fraîche).
      2. (p/v) FDS : Peser 1 g de FDS et ajouter 10 mL de dH2O.
      3. M Tris-HCl pH 8,8 : Peser 18,15 g de Tris et dissoudre avec ~60 mL de dH2O. Ajuster à pH 8,8 avec HCl. Ajouter dH2O pour porter le volume à 100 mL.
      4. M Tris-HCl pH 6,8 : Peser 6,00 g de Tris et dissoudre avec ~60 mL de dH2O. Ajuster à pH 6,8 avec HCl. Ajouter dH2O pour porter le volume à 100 mL.
      5. APS : Peser 15 mg d’APS et ajouter 150 μL de dH2O.
        ATTENTION : L’acrylamide et le SDS sont toxiques et nocifs. Portez des gants de protection et travaillez sous une cagoule.
    2. Préparez le tampon d’échantillon en ajoutant 50 μL de β-Mercaptoéthanol dans 950 μL de 2 tampons d’échantillon SDS-PAGE.
      ATTENTION : Le β-mercaptoéthanol est toxique s’il est inhalé. Portez des gants de protection et travaillez sous une cagoule.
    3. Préparez le tampon de coulée en mélangeant 100 mL de 10x Tris-glycine SDS Running Buffer avec 900 mL de dH2O.
    4. Préparez la solution de coloration (45 % dH2O, 45 % de méthanol, 10 % d’acide acétique glacial, 2 g de Coomassie Brilliant Blue R).
    5. Préparez la solution de décoloration (50 % dH2O, 40 % Méthanol, 10 % d’acide acétique glacial).
  2. Préparation du gel
    1. Préparez l’équipement de l’unité d’électrophorèse, y compris la cassette de gel, les alimentations, les électrodes et les câbles pour le dosage. Nettoyez les plaques de verre avec de l’éthanol et assemblez le sandwich. Assurez-vous que les bords inférieurs des plaques de verre et des entretoises sont bien alignés.
    2. Préparez le mélange de gel de séparation contenant 3,5 mL de dH2O, 2,4 mL d’acrylamide/méthylène bis acrylamide à 40 %, 2 mL de Tris-HCl 1,5 M, 100 μL de FDS à 10 % (p/v), 80 μL de 10 % APS, 8 μL de N,N,N′,N′-Tetramethyl ethylenediamine (TEMED).
      ATTENTION : TEMED est toxique et/ou irritant. Portez des gants de protection et travaillez sous une cagoule.
    3. Versez le mélange de gel de séparation dans les plaques de gel à un niveau d’environ 1 à 1,5 cm sous le haut de la plaque la plus courte.
    4. Superposez le haut du gel de séparation avec de l’isopropanol pour éliminer les bulles au sommet du gel et empêcher le gel polymérisé de se dessécher.
    5. Versez l’isopropanol sur le gel de séparation après que le gel de séparation ait polymérisé pendant au moins 15 min.
    6. Préparez le mélange de gel d’empilage contenant 1,92 mL de dH2O, 300 μL d’acrylamide/méthylène bis acrylamide à 40 %, 750 μL de Tris-HCl 0,5 M, 100 μL de SDS à 10 % (p/v), 30 μL d’APS à 10 % et 3 μL de TEMED.
    7. Versez la solution de gel d’empilage sur le gel de séparation afin que les plaques de gel soient remplies. Insérez le peigne en haut des entretoises.
    8. Laissez le gel d’empilage polymériser à température ambiante pendant environ 15 min.
  3. Faire fonctionner le gel
    1. Fixez le gel à l’ensemble d’électrodes. Ajoutez 1x Tris-glycine SDS Running Buffer fraîchement préparé dans les deux chambres de l’appareil.
    2. Retirez le peigne.
    3. Chargez 5 μL de l’échelle (10-250 kDa) et 8 μL de la phase intermédiaire des échantillons dilués dans les puits du gel. Faites fonctionner le gel à 80 V jusqu’à ce que le colorant migre dans le gel de séparation et augmentez à 120 V jusqu’à ce que le colorant atteigne le fond du gel. Éteignez l’alimentation appliquée une fois que le colorant a atteint le bas du gel.
  4. Coloration et décoloration du gel
    1. Retirez le gel de l’appareil une fois le passage terminé et retirez les entretoises et les plaques de verre. Placez le gel dans un petit plateau.
    2. Teindre le gel en ajoutant une solution de coloration (étape 3.1.4) pendant 30 minutes en secouant doucement à 55 tr/min.
    3. Videz la solution de coloration du gel. Rincez le gel avec une petite quantité de solution décolorante et jetez le colorant.
    4. Ajouter un volume suffisant de solution de décoloration pour couvrir le gel et décolorer en secouant doucement pendant ~1 h jusqu’à ce que les bandes soient visibles.

4. Concentration de lactoferrine à l’aide d’un ELISA de lactoferrine bovine

  1. Préparation des étalons et réactifs
    1. Utilisez le kit ELISA LF/LTF/lactoferrine bovin disponible dans le commerce pour ce test.
    2. Equilibérez tous les échantillons et étalons selon RT.
    3. Préparez des volumes suffisants de réactifs de détection A et B de solution de travail qui sont responsables de la liaison à l’antigène capturé.
    4. Diluer les réactifs de détection A et B dans un rapport de 1:100 en utilisant les diluants de dosage A et B, respectivement.
    5. Préparez un tampon de lavage 1x fonctionnel en diluant le concentré de tampon de lavage 30x avec dH2O.
    6. Mettez une quantité suffisante de solution de substrat de 3,3',5,5′-tétraméthylbenzidine (TMB) dans un microtube stérile.
    7. Remettre en suspension un tube d’étalon lyophilisé (100 ng/mL) avec 0,5 mL de diluant de l’échantillon et incuber à RT pendant 10 min en agitant doucement. Faites tourner le flacon pour vous assurer que tout le sanple lyophilisé est recueilli au fond.
    8. Préparez une série de dilutions standard selon le schéma de dilution suivant (Tableau 2).

Tableau 2 : Schéma de dilution des étalons de lactoferrine bovine.

FioleVolume de diluant (μL)Volume et source de Lf (μL)Concentration finale en Lf (ng/mL)
J10500 μL de stock100
J2250250 flacons de dilution D150
J3250250 flacons de dilution D225
D4250250 flacons de dilution D312.5
J5250250 flacons de dilution D46.25
J6250250 flacons de dilution D53,125
J7250250 flacons de dilution D61,563
J825000 = Blanc
  1. Mesure de la concentration de lactoferrine bovine
    1. Pipeter 100 μL de chaque étalon ou échantillon de lactoferrine dans la plaque de bande de 96 puits revêtue. Couvrez la plaque avec une scelleuse de plaque pour éviter l’évaporation. Incuber à 37 °C pendant 1 h.
    2. Aspirez le liquide de chaque puits. Ajouter 100 μL de la solution de travail du réactif de détection A dans chaque puits. Couvrir avec une scelleuse à plaques et agiter doucement pour assurer un mélange complet. Incuber à 37 °C pendant 1 h.
    3. Laver trois fois en ajoutant environ 350 μL de 1x tampon de lavage après avoir aspiré le liquide de chaque puits. Laissez chaque lavage reposer pendant 1 à 2 minutes avant d’aspirer complètement. Après le dernier lavage, aspirez pour enlever tout tampon de lavage restant, puis retournez la plaque et tapotez contre un papier absorbant propre.
    4. Ajouter 100 μL de la solution de travail du réactif de détection B dans chaque puits. Couvrir avec une nouvelle scelleuse de plaques. Incuber à 37 °C pendant 30 min. Aspirez le liquide de chaque puits et lavez-le cinq fois comme décrit à l’étape 4.2.3. Mettez 90 μL de solution de substrat TMB dans chaque puits et couvrez avec une nouvelle scelleuse de plaques.
    5. Incuber à 37 °C pendant 10 à 20 min à l’abri de la lumière. Vérifiez la couleur optimale en la surveillant périodiquement. Observez que la couleur bleue intense du puits comprend de la lactoferrine à haute concentration.
    6. Ajouter 50 μL de solution d’arrêt dans chaque puits. La couleur passera du bleu au jaune. Mesurez l’absorbance de chaque puits immédiatement à 450 nm à l’aide d’un lecteur de microplaques avec son logiciel associé.
      REMARQUE : Tapotez doucement la plaque pour assurer un mélange complet jusqu’à ce que le changement de couleur soit uniforme.
  2. Génération de la courbe standard et détermination des résultats
    1. Suivez l’étape 2.3.1 pour la génération de données afin d’estimer la concentration de lactoferrine.
    2. Construisez une courbe standard en traçant l’absorbance moyenne corrigée pour chaque étalon comme décrit à l’étape 2.3.2, mais en traçant une courbe polynomiale avec un logiciel approprié capable d’ajuster la courbe à quatre paramètres.
    3. Calculer la teneur en lactoferrine de chaque échantillon en interpolant la valeur d’absorption sur l’équation générée, comme décrit à l’étape 2.3.3.

5. Détermination de la concentration en IgG d’échantillons à l’aide d’un test ELISA d’IgG bovin

  1. Préparation des étalons et réactifs
    1. Utilisez les articles requis parmi ceux fournis dans le kit ELISA IgG bovin.
    2. Equilibérez tous les échantillons et étalons selon RT.
    3. Préparez des volumes suffisants de solution de conjugué enzyme-anticorps en diluant 10 μL de concentré de peroxydase de raifort (HRP)-avidine (100x) avec 990 μL de diluant conjugué enzyme-anticorps.
    4. Préparez des volumes suffisants de 1 tampon de lavage en diluant 20 fois le concentré de tampon de lavage avec du dH2O.
    5. Préparez des volumes suffisants de la solution de diluant 1x en diluant 20x concentré de diluant avec du dH2O.
    6. Ajouter 1,0 mL de dH2O dans le calibrateur IgG bovin et mélanger doucement jusqu’à dissolution. La concentration finale du calibrateur est de 123.000 ng/mL.
    7. Préparer des séries de dilution standard conformément au schéma de dilution décrit au tableau 3.

Tableau 3 : Schéma de dilution des étalons IgG bovins.

FioleVolume de diluant (μL)Volume et source d’IgG (μL)Concentration finale en IgG (ng/mL)
J1900100 μL de stock12300
J2900100 flacons de dilution D11230
J3178122 flacons de dilution D2500
D415050 flacons de dilution D3250
J5150150 de dilution D4 du flacon125
J6100100 flacons de dilution D562.5
J7100100 flacons de dilution D631.25
J8100100 flacons de dilution D715,625
J9100100 flacons de dilution D87,813
J1010000 = Blanc
  1. Procédure d’essai ELISA IgG bovin
    1. Pipeter 100 μL de chaque étalon ou échantillon d’IgG dans la plaque de bande revêtue à 96 puits. Couvrir la plaque avec une scelleuse pour plaques et incuber à RT pendant 30 min. Aspirez le liquide de chaque puits.
    2. Lavez quatre fois en remplissant les puits avec 1x tampon de lavage et aspirez. Après le dernier lavage, aspirez pour éliminer tout résidu de tampon de lavage, puis retournez la plaque et tapotez contre du papier absorbant propre. Ajouter 100 μL de conjugué enzyme-anticorps correctement dilué dans chaque puits. Couvrir avec une scelleuse à plaques et agiter doucement pour assurer un mélange complet.
    3. Incuber à RT pendant 10 min. Lavez et retirez le tampon de lavage résiduel des puits comme décrit à l’étape 5.2.2. Ajouter 100 μL de substrat TMB dans chaque puits ; Couvrir avec une nouvelle scelleuse de plaques.
    4. Incuber à RT pendant précisément 10 min à l’abri de la lumière. Arrêtez la réaction en ajoutant 100 μL de solution d’arrêt dans chaque puits. Lisez chaque plaque à 450 nm à l’aide d’un lecteur de microplaques avec son logiciel associé.
  2. Génération de la courbe standard et détermination des résultats
    1. Suivez l’étape 2.3.1 pour l’édition des données afin d’estimer la concentration en IgG.
    2. Construisez une courbe standard en traçant la concentration sur l’axe des x et l’absorbance moyenne corrigée pour chaque étalon sur l’axe des y. Tracez une courbe polynomiale à l’aide d’un logiciel approprié capable d’ajuster la courbe à quatre paramètres.
    3. Calculer la teneur en IgG de chaque échantillon en interpolant la valeur d’absorption sur l’équation générée, comme décrit à l’étape 2.3.3.

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Résultats

Conformément au protocole, les échantillons de colostrum bovin ont été analysés pour déterminer la concentration en protéines, en lactoferrine et en IgG. Les résultats des analyses des protéines, de la lactoferrine et des IgG du colostrum bovin sont présentés dans le tableau 4.

Tableau 4 : Concentration de protéines, de lactoferrine et d’IgG de colostrum bovin.

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Discussion

Cette étude fournit des informations sur les changements considérables dans les concentrations de protéines, de lactoferrine et d’IgG dans le colostrum tout au long de la transition vers le lait mature. La détection des changements dans la concentration de lactoferrine et d’IgG a été effectuée par ELISA sandwich, et la concentration totale en protéines a été analysée par le test BCA. Les résultats indiquent que le colostrum précoce a la concentration la plus élevée de protéines, de lacto...

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Cette étude est soutenue par Uluova Süt Ticaret A.Ş (Uluova Milk Trading Co.). RMD et BMH sont des employés d’Evolve BioSystems, une entreprise axée sur la restauration du microbiome infantile.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Tampon courant 10X (Tris-Glycine-SDS)ClearBandTGS10Analyse SDS-Page
2-mercaptoéthanolgibco31350-010Analyse SDS-Page
Acide acétique GLACIAL Isolab901,013,2500Analyse SDS-Page
Bovin IgG ELISA Kit AvivaSystems BiologyOKIA00005Détermination de la concentration en IgG
Bovin LF / LTF / Lactoferrine ELISAKit LSBio Lifespan BiosciencesLS-F4884Détermination de la concentration de lactoferrine
Coomassie Brillant Blue R 250amresco0472-25GAnalyse de la page
Acide chlorhydrique Fumant 37 %Isolab932,103,2501Analyse de la page SDS
IsopropanolIsolab961,023,2500Analyse de la page
LAEMMLI Sample Tampon tampon (2X)ClearBandLSB-2xAnalyse de la page SDS
MéthanolIsolab947,046,2500Analyse de la page SDS
PageRuler Plus Échelle de protéines précolorées 10 à 250Thermo Scientific26619Analyse de la page SDS
Kit de dosage des protéines Pierce BCAThermo Scientific23225Détermination de la concentration en protéines
Dodécylsulfate de sodium (SDS)BioShopSDS001.500Analyse de la page SDS
SureCast Solution d’acrylamide 40 % (p/v)InvitrogenHC2040Analyse de la page SDS
SureCast Persulfate d’ammonium (APS)Thermo Scientific17874Analyse de la page SDS
SureCast Tétraméthyléthylènediamine (TEMED)InvitrogenHC2006Analyse de la page SDS
TECAN Infinite M200 Lecteur de plaquesTecan30035094Mesure de l’absorbance
Tris baseBioShopTRS001.1Analyse de la page SDS

Références

  1. Kehoe, S. I., Jayarao, B. M., Heinrichs, A. J. A survey of bovine colostrum composition and colostrum management practices on Pennsylvania dairy farms. Journal of Dairy Science. 90 (9), 4108-4116 (2007).
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