Analyse de la différenciation cellulaire, de la morphogenèse et de la modelation au cours de l’embryogenèse du poulet à l’aide du test des perles trempées

Summary

Le test des billes trempées implique l’administration ciblée de réactif de test à n’importe quel moment du développement pour étudier la régulation de la différenciation cellulaire et de la morphogenèse. Un protocole détaillé, applicable à tout modèle animal expérimental, pour préparer trois types différents de perles trempées et les implanter dans l’interdigit d’un embryon de poulet est présenté.

Abstract

Une multitude de programmes génétiques sont activés au cours du développement embryonnaire qui orchestre la différenciation cellulaire pour générer une diversité étonnante de cellules somatiques, de tissus et d’organes. L’activation précise de ces programmes génétiques est régulée par des morphogènes, des molécules diffusibles qui dirigent le destin cellulaire à différents seuils. Comprendre comment l’activation génétique coordonne la morphogenèse nécessite l’étude des interactions locales déclenchées par les morphogènes au cours du développement. L’utilisation de perles imbibées de protéines ou de médicaments implantés dans des régions distinctes de l’embryon permet d’étudier le rôle de molécules spécifiques dans l’établissement des doigts et d’autres processus de développement. Cette technique expérimentale fournit des informations sur le contrôle de l’induction cellulaire, du devenir cellulaire et de la formation de motifs. Ainsi, ce test de perles trempées est un outil expérimental extrêmement puissant et précieux applicable à d’autres modèles embryonnaires.

Introduction

Les percées dans les mécanismes moléculaires qui contrôlent l’expression des gènes au cours du développement embryonnaire nous ont permis de comprendre comment le devenir cellulaire est déterminé. L’engagement envers différentes lignées cellulaires se produit une fois que les cellules commencent l’expression moléculaire des facteurs de transcription¹. Ce modèle d’expression est hautement coordonné dans l’espace et le temps et dirige ainsi la mise en forme, le positionnement et le modelage des cellules, des tissus et des organes ^1,2,3,4,5

Protocol

Cette recherche a été examinée et approuvée par le Comité d’examen institutionnel pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire de l’Instituto de Investigaciones Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM, Mexico, Mexique).

1. Incubation d’ovules et stadification embryonnaire

REMARQUE: Les œufs de poule fécondés peuvent être obtenus dans les fermes locales. Les œufs de poule fertilisés à Livourne blanche sont les plus couramment utilisés. Conservez les œufs de poule fraîchement fécondés à 15 °C jusqu’à 1 semaine avant l’incubation.

1. Incuber les œufs de poule féc....

Results

Utilisation de perles trempées pour évaluer le comportement cellulaire dans le membre embryonnaire du poussin
Pour assurer l’efficacité de ce test, la perle doit être placée de manière cohérente et précise au bon endroit; dans ce cas, la plus grande partie distale du troisième interdigit sous la crête ectodermique apicale AER (Figure 1A). Ce positionnement permet à la molécule en question de se propager également dans tout le tissu interdigital. De plus, la zone sous l’AR.......

Discussion

Le principal avantage de l’outil expérimental détaillé dans ce protocole est de pouvoir contrôler le temps et le lieu de l’exposition aux perles imbibées d’une molécule expérimentale donnée. La combinaison du positionnement correct avec un calendrier de développement précis offre d’énormes possibilités pour étudier les processus de différenciation cellulaire. La réalisation de ces expériences dans des tissus indifférenciés permet d’étudier les premiers événements cruciaux de la lignée cellulaire. Par exemple, placer une .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Affi-Gel Blue Gel perles	Bio-Rad	153-7302
AG1-X2 Perles	Bio-Rad	1400123
Incubateur d’œufs	Incumatic de Mexico	Incumatic 1000
Pince chirurgicale fine	Fine Science Tools	9115-10
Hépharose perles d’hépharose	Abcam	ab193268
Boîte de Pétri	Nid
Stéréomicroscope	Zeiss	Stemi DV4
Tape	NA	NA
Aiguille tungstène	GoodFellow	E74-15096/01