L’objectif global de cet article est de décrire comment effectuer une injection intracellulaire ovo de matériaux exogènes dans des embryons de poulet. Cette approche est très utile pour étudier la biologie du développement des embryons de poulet.
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Article de méthode
À Ovo Injection intravasculaire dans des embryons de poulet
Dans cet article
Résumé
Résumé
En tant que système modèle classique de biologie embryonnaire, l’embryon de poulet a été utilisé pour étudier le développement embryonnaire et la différenciation. L’administration de matériaux exogènes dans des embryons de poulet présente un grand avantage pour l’étude de la fonction des gènes, de la reproduction transgénique et de la préparation de chimères pendant le développement embryonnaire. Nous montrons ici la méthode d’injection intravasculaire inovo par laquelle des matériaux exogènes tels que des vecteurs plasmidiques ou des cellules germinales primordiales modifiées (PGC) peuvent être transférés dans des embryons de poulet donneurs à des stades précoces de développement. Les résultats montrent que l’injection intravasculaire à travers l’aorte dorsale et la tête permet aux matériaux injectés de diffuser dans l’embryon entier à travers le système circulatoire sanguin. Dans le protocole présenté, l’efficacité de l’introduction de plasmides exogènes et de vecteurs lentiviraux, ainsi que la colonisation des PGC exogènes injectés dans la gonade receveuse, ont été déterminées en observant la fluorescence dans les embryons. Cet article décrit les procédures détaillées de cette méthode, fournissant ainsi une excellente approche pour étudier la fonction des gènes, la biologie embryonnaire et du développement, et la production de poulet gonade-chimérique. En conclusion, cet article permettra aux chercheurs d’effectuer en injection ovo-intravasculaire de matériaux exogènes dans des embryons de poulet avec beaucoup de succès et de reproductibilité.
Introduction
Les embryons de poulet sont largement utilisés depuis des siècles dans des applications développementales, immunologiques, pathologiques et biologiques 1,2,3. Ils présentent de nombreux avantages inhérents par rapport aux autres modèles animaux dans l’étude de la toxicologie et de la biologie cellulaire4. Les embryons de poulet sont facilement accessibles et peuvent être manipulés in vitro et directement observés à n’importe quel stade de développement, ce qui fournit un système pratique de modèle de recherche sur les embryons.
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Protocole
Toutes les procédures impliquant le soin et l’utilisation d’animaux étaient conformes aux directives de l’Institut national de la santé des États-Unis (NIH Pub. n° 85-23, révisée en 1996) et les protocoles sur les embryons de poulet ont été approuvés par le Comité de gestion des animaux de laboratoire et d’éthique des animaux expérimentaux de l’Université de Yangzhou, en Chine (n° 201803124).
1. Collecte et préparation des ovules fécondés
REMARQUE: Contrairement aux mammifères, le poulet a des millions de follicules dans un seul ovaire, mais seuls quelques-uns de ces follicules sont assez matures p....
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Résultats
Nous montrons ici l’injection in ovo intravasculaire d’embryons de poulet. Un processus schématique de l’injection intravasculaire est illustré à la figure 1; dans notre étude, nous avons utilisé diverses solutions exogènes pour tester et vérifier l’injection.
Pour mieux visualiser les matériaux injectés, Trypan Blue (0,4%) a été injecté comme traceur dans l’embryon. On a observé que le traceur (bleu) diffusait vers l’embryon entier par circulati.......
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Discussion
La méthode d’injection inovo-intravasculaire d’embryons de poulet est optimisée pour que des matériaux exogènes (vecteurs, viraux ou PGC) soient transférés dans l’embryon. Sur la base de cette méthode, nous avons construit des modèles d’embryons de poulet avec une surexpression ou une interférence génétique stable (SpinZ, JUN, UBE2I, etc.) 17,18,19. Ces modèles bien établis prouvent la faisabilité de cette approche. De.......
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Déclarations de divulgation
Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (31972547). Nous apprécions la révision de Jing Wang et la voix off de Malik Donlic à la Washington State University, aux États-Unis.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Macro-microscope à fluorescence | OLYMPUS | MVX10 | |
| Capillaires en verre | Narishige | G1 | |
| Lipofectamine 2000 | Invitrogen | 12566014 | liposome |
| pEGFP-N1 vecteur | Clontech | #6085-1 | |
| PKH26 Kit de liaison de cellules fluorescentes rouges ; | Sigma | PKH26GL | |
| pLVX-EGFP vecteur lentiviral | Addgene | 128652 | |
| Micro-injecteur pneumatique | Narishige | IM-11-2 | |
| Extracteur | Narishige | PC-100 | |
| Trypan Blue Stain | Gibco | 15250061 |
Références
- Bednarczyk, M., Dunislawska, A., Stadnicka, K., Grochowska, E. Chicken embryo as a model in epigenetic research. Poultry Science. 100 (7), 101164(2021).
- Darnell, D. K., Schoenwolf, G. C. The chick embryo as a model system for analyzing mechanisms of development. Developmental Biology Protocols. , Humana Press. New York, NY. 25-29 (....
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Réimpressions et autorisations
