Caractérisation de la péritonite septique induite par Salmonella Typhimurium chez la souris

Résumé

Ce protocole décrit l’induction d’une septicémie monobactérienne à Gram négatif dans un système modèle murin. Le modèle est utile pour étudier les réponses inflammatoires et létales de l’hôte pendant la septicémie.

Résumé

La septicémie est une réponse immunitaire dérégulée de l’hôte à une invasion microbienne ou à des lésions tissulaires, entraînant des lésions organiques à un site éloigné de celui de l’infection ou des dommages. Actuellement, les modèles de septicémie largement utilisés chez la souris comprennent l’endotoxémie induite par les lipopolysaccharides (LPS), la ligature et la ponction cæcales (CLP) et les systèmes modèles d’infection monobactérienne. Ce protocole décrit une méthode pour étudier les réponses de l’hôte au cours de la péritonite septique induite par l’infection à Salmonella Typhimurium chez la souris. S. Le typhimurium, un agent pathogène intracellulaire à Gram négatif, provoque une maladie semblable à la typhoïde chez la souris.

Ce protocole élabore la préparation de la culture, l’induction de la péritonite septique chez la souris par injection intrapéritonéale et les méthodes d’étude des réponses systémiques de l’hôte. En outre, l’évaluation de la charge bactérienne dans différents organes et l’analyse cytométrique en flux de l’augmentation du nombre de neutrophiles dans le lavage péritonéal sont présentées. Salmonelle La septicémie induite par le typhimurium chez la souris entraîne une augmentation des cytokines pro-inflammatoires et une infiltration rapide des neutrophiles dans la cavité péritonéale, entraînant une survie plus faible.

Chaque étape de ce protocole a été optimisée, ce qui a entraîné une reproductibilité élevée de la pathogenèse de la péritonite septique. Ce modèle est utile pour étudier les réponses immunologiques au cours de la septicémie bactérienne, les rôles de différents gènes dans la progression de la maladie et les effets des médicaments pour atténuer la septicémie.

Introduction

La septicémie est définie comme une réponse inflammatoire et immunitaire systémique dérégulée à une invasion microbienne ou à des lésions tissulaires, entraînant une lésion d’organe éloignée du site de l’infection ou des dommages. Le choc septique est un sous-ensemble de septicémie caractérisé par une hypotension persistant pendant la réanimation volumique, avec un risque considérablement accru de mortalité¹. Le grand public est devenu plus conscient de ce trouble pendant la pandémie de COVID-19. Malgré la forte mortalité associée, des données épidémiologiques complètes sur le fardeau mondial de la septicémie font défaut en raison de la complex....

Protocole

Toutes les expériences utilisant Salmonella Typhimurium ont été menées dans des installations de niveau de biosécurité 2 (BSL-2). Il faut veiller à utiliser un équipement de protection individuelle (EPI) approprié, à assurer la sécurité et à suivre les méthodes standard d’élimination des risques biologiques BSL-2. Toutes les expériences sur les souris ont été menées conformément aux directives énoncées par le Comité institutionnel d’éthique animale, IISc. Les souris ont été élevées et entretenues à l’installation animale centrale de l’IISc (numéro d’enregistrement: 48/1999/CPCSEA, daté du 1/3/1999), approuvé par le ministère de l’Environnement et des Forêts d....

Résultats

Une caractérisation détaillée de la réponse immunitaire de l’hôte à l’aide de ce modèle particulier est présentée dans les publications précédentes ^8,9. Quelques résultats représentatifs du protocole décrit sont présentés dans cette section. Ce modèle vise à induire une infection systémique de S. Typhimurium par injection intrapéritonéale de la culture bactérienne pour induire une septicémie. Pour confirmer l’infection, les lysats du foie et de la rate d.......

Discussion

Cet article décrit une méthode d’induction d’une forme grave de septicémie bactérienne par injection intrapéritonéale de Salmonella Typhimurium. Ce modèle est avantageux par rapport à d’autres car Salmonella Typhimurium est un agent pathogène intracellulaire et, par conséquent, hautement pathogène, imitant l’état cliniquement pertinent de la septicémie à Gram négatif. Le résultat de la septicémie péritonite dans ce modèle est systémique, avec une mortalité de 100% dans les 96 heures suivant l’infection........

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Consommables
1 mL Seringue stérile avec aiguille de 26 g	Beckton Dickinson, Singapour	303060
1,5 mL Microcentrifuge Tube	Tarsons, USA	500010
Seringue stérile de 10 mL avec aiguille de 21 g	Beckton Dickinson, Espagne	307758
50 mL Flacon conique	Tarsons, États-Unis	441150
Tube à centrifuger gradué 50 mL	Tarsons, États-Unis	546041
Tube à centrifuger gradué 50 mL	Tarsons, États-Unis	546021
Épandeur de cellules	VWR, États-Unis	VWRU60828-680
Dulbecco' s Phosphate Buffered Saline	HiMedia, Mumbai, Inde	TS1006
Ethanol	Merck	100983
FcR blocker	BD Biosciences	553142
Fetal Bovine Serum	Gibco	10270-106
FITC Rat anti-souris Ly6G (Clone 1A8)	BD Pharmingen	551460
Glycérol	Sigma-Aldrich	G9012
Homogénéisateur manuel		-Hémocytomètre
(chambre de comptage Neubauer)	Rohem, Inde	I.S. 10269
Luria Bertani Broth	HiMedia, Mumbai, Inde	M1245
Paraformaldéhyde	Sigma-Aldrich	158127
Petriplates	Tarsons, États-Unis	460091
RPMI	Himedia, Mumbai, Inde	AT060-10X1L
Salmonella-Shigella Agar	HiMedia, Mumbai, Inde	M108
Azoture de sodium	Sigma-Aldrich	S2002
Equipments
Centrifuge	Kubota
Cytomètre en flux	BD FACSverse
Incubateur	N-biotek
Spectrophotomètre	Shimadzu
Peseuse	Sartorius

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