Lysat plasmatique riche en plaquettes pour le traitement des maladies de la surface oculaire

Résumé

Les lysats plaquettaires représentent un outil émergent pour le traitement des maladies de la surface oculaire. Ici, nous proposons une méthode pour la préparation, la distribution, le stockage et la caractérisation du lysat plaquettaire prélevé sur des donneurs de plaquettes.

Résumé

Diverses maladies de la surface oculaire sont traitées avec des gouttes oculaires dérivées du sang. Leur utilisation a été introduite dans la pratique clinique en raison de leur teneur en métabolites et en facteurs de croissance, ce qui favorise la régénération de la surface oculaire. Les gouttes ophtalmiques à base de sang peuvent être préparées à partir de différentes sources (c.-à-d. don de sang total ou d’aphérèse plaquettaire), ainsi qu’avec différents protocoles (p. ex. différentes dilutions et cycles de congélation et de décongélation). Cette variabilité entrave la standardisation des protocoles cliniques et, par conséquent, l’évaluation de leur efficacité clinique. Le détail et le partage des procédures méthodologiques peuvent contribuer à la définition de lignes directrices communes. Au cours des dernières années, les produits allogéniques se sont diffusés comme alternative aux traitements autologues car ils garantissent des normes d’efficacité plus élevées; parmi eux, les gouttes ophtalmiques au lysat plasma riche en plaquettes (PRP-L) sont préparées selon des procédures de fabrication simples. Dans l’unité de médecine transfusionnelle de l’AUSL-IRCCS di Reggio Emilia, en Italie, le PRP-L est obtenu par don d’aphérèse plaquettaire. Ce produit est initialement dilué à 0,3 x 10 9 plaquettes/mL (à partir d’une concentration moyenne de 1 x 10 9 plaquettes/mL) dans^0,9% de NaCl. Les plaquettes diluées sont congelées/décongelées et, par la suite, centrifugées pour éliminer les débris. Le volume final est divisé en aliquotes de 1,45 mL et stocké à −80 °C. Avant d’être délivrés aux patients, les gouttes oculaires sont testées pour la stérilité. Les patients peuvent conserver les lysats plaquettaires à -15 °C jusqu’à 1 mois. La composition du facteur de croissance est également évaluée à partir d’aliquotes choisies au hasard, et les valeurs moyennes sont rapportées ici.

Introduction

Les produits dérivés du sang sont largement utilisés dans le soin des plaies¹, la chirurgie maxillo-faciale et orthopédique et pour le traitement de différentes maladies de la surface oculaire² telles que la sécheresse oculaire (DED)³. Dans la DED, l’homéostasie du film lacrymal est altérée en raison du fonctionnement anormal de différents facteurs impliqués dans la production de larmes et l’intégrité de la surface oculaire ^4,5.

La DED est caractérisée par une hétérogénéité dans les causes ....

Protocole

Le PRP-L utilisé pour l’évaluation quantitative des facteurs de croissance a été recueilli dans le cadre d’une étude plus large sur la caractérisation des produits PRP à des fins régénératives, réalisée à l’AUSL-IRCCS di Reggio Emilia et approuvée par le comité d’éthique Area Vasta Emilia Nord le 10 janvier 2019 (protocole numéro 2019/0003319). Les donateurs ont donné leur consentement éclairé conformément à la Déclaration d’Helsinki. Aucune approbation éthique n’était nécessaire pour recueillir les données agrégées et anonymes du questionnaire sur l’indice des maladies de la surface oculaire (IDSO), qui est couramment utilisé par les cliniciens pour surveiller les sy....

Résultats

La raison d’être de l’utilisation de gouttes ophtalmiques dérivées du sérum (qui est le produit sanguin le plus fréquemment utilisé pour le traitement des maladies de la surface oculaire) réside dans leur teneur en GF, qui sont presque entièrement dérivés des plaquettes circulantes. Le PRP contient un nombre significativement plus élevé de plaquettes (et, par conséquent, de GF dérivés des plaquettes) par rapport au sérum sanguin périphérique, allant de 0,15 x 10 9-0,45 x 10⁹ PLT/mL. Selon la législa.......

Discussion

Ces dernières années, l’utilisation clinique de produits à base de plaquettes pour les pathologies de surface oculaire a augmenté, mais leur diffusion est entravée par le manque de robustesse scientifique. Cela est principalement dû à la grande hétérogénéité des sources de donneurs et des protocoles de préparation, qui ne sont souvent pas entièrement divulgués ou ne sont pas spécifiquement conçus aux fins pour lesquelles ils sont dispensés. En particulier, les informations sur les produits à base de plaquettes recueillie.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Equipments
CompoSeal Mobilea II	Fresenius Kabi, Allemagne		scelleuse de sacs
HeraSafe hood	Heraeus Instruments, Allemagne		Classe II Hotte antirisque biologique
MCS+ 9000 Mobile Platelet Collection System	Haemonetics, Italie		Équipement automatisé de collecte de plasma et de composants multicomposants pour le don de plaquettes, de globules rouges, de plasma ou de composants sanguins combinés
Agitateur de plaquettes, PF396i	Helmer, États-Unis		Agitateur de plaquettes
Raycell Irradiateur de sang à rayons X	MDS Nordion, Canada		Irradiateur de sang à rayons X
ROTIXA 50RS	Hettich Zentrifugen, Allemagne		Intrigout à grande vitesse
Sysmex XS-1000i	Sysmex Europe GMBH, Allemagne		hémocytomètre pour la numération plaquettaire
Bain chaud, WB-M15	Falc Instruments, Italie		Bain chaud
Matériaux
ACD-A solution anticoagulante A	Fenwal Inc., USA	DIN 00788139	solution anticoagulante pour l’aphérèse plaquettaire (1000 ml)
BD BACTEC Peds Plus/F Flacons de culture	BD Biosciences, États-Unis	BD 442020	Essai de stérilité
BD BACTEC Peds Plus/F Flacons de culture	BD Biosciences, États-Unis	442020	Au moins 2 flacons pour l’essai de stérilité
BD Luer Lok Seringue	BD Plastipack, États-Unis	300865	Au moins 4 seringues stériles (50 ml)
Bio-Plex Human Cancer Panel 1 BioRad	Laboratories, États-Unis	171AC500M	Panel standard pour l’évaluation des
isoformes PDGFBio-Plex Human Cancer Panel 2	BioRad Laboratories, USA	171AC600M	Panel standard pour l’évaluation EGF
Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader	BioRad Laboratories, USA	Magpix	Cet instrument permet plusieurs immunoessais à l’aide de billes magnétiques fonctionnalisées.
Bio-Plex Pro TGF-b	Assay BioRad Laboratories, USA	10024984	Ensemble et normes pour l’évaluation des isoformes du TGFb
BioRet	ARIES s.r.l., Italie	A2DH0020	Au moins 4 pointes de perçage pour poches de sang
Tube de prélèvement sanguin	BD Vacutainer, États-Unis	367835	1 tube, nécessaire pour effectuer la numération
plaquettaireKit de gouttes ophtalmiques. COL Medical Device pour l’application et la conservation de gouttes ophtalmiques à partir d’hémocomposants	Biomed Device s.r.l., Italie	COLC50	Kit de gouttes ophtalmiques. Au moins 2 kits pour chaque unité PRP collectée
Cancer humain PDGF-AB/BB Set 1x96well	BioRad Laboratories, USA	171BC511	Set pour l’évaluation des isoformes PDGF
Cancer humain2 EGF Set 1x96well	BioRad Laboratories, USA	171BC603M	Set pour l’évaluation EGF
NaCl 0,9 % solution stérile	Baxter S.p.A., Italy	B05BB01	1000 ml
Questionnaire OSDI	Allergan Inc., USA	OSDI	Questionnaire sur l’indice des maladies de la surface oculaire
Pointe de piercing	BioRet ARIES s.r.l., Italie	BS051004	Spike
Platelet Additive Solution A+ T-PAS+	TERUMO BCT Inc., Italie	40842	solution de conservation pour concentrés de plaquettes (1000 ml)
Logiciel Excel	Microsoft, USA	Excel Logiciel d’analyse	de données
Teruflex Sac de transfert 1000 ml	TERUMO BCT Inc., Italie	BB*T100BM	1 pour dilution PRP
Teruflex Sac de transfert 300 ml	TERUMO BCT Inc., Italie	BB*030CM	Au moins 6 pour chaque unité PRP prélevée