Isolement et analyse de vésicules extracellulaires traçables et fonctionnalisées à partir du plasma et des tissus solides

Yuan Cao; Ji-Yu Qiu; Da Chen; Chen-Yao Li; Shu-Juan Xing; Chen-Xi Zheng; Xin Liu; Yan Jin; Bing-Dong Sui

doi:10.3791/63990

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Article de méthode

Isolement et analyse de vésicules extracellulaires traçables et fonctionnalisées à partir du plasma et des tissus solides

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DOI :

10.3791/63990

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17 octobre 2022

Yuan Cao^*¹^,² , Ji-Yu Qiu^*¹^,³ , Da Chen¹^,² , Chen-Yao Li¹^,⁴ , Shu-Juan Xing¹^,⁵ , Chen-Xi Zheng¹ , Xin Liu² , Yan Jin¹^,⁶ , Bing-Dong Sui¹

¹State Key Laboratory of Military Stomatology & National Clinical Research Center for Oral Diseases & Shaanxi International Joint Research Center for Oral Diseases, Center for Tissue Engineering, School of Stomatology, The Fourth Military Medical University, ²Department of Orthodontics, School of Stomatology, The Fourth Military Medical University, ³Department of VIP Dental Care, School of Stomatology, The Fourth Military Medical University, ⁴School of Basic Medicine, The Fourth Military Medical University, ⁵College of Life Science, Northwest University, ⁶Xi'an Institute of Tissue Engineering and Regenerative Medicine

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Le présent protocole décrit une méthode pour extraire les vésicules extracellulaires du sang périphérique et des tissus solides avec profilage ultérieur des antigènes de surface et des cargaisons de protéines.

Résumé

Les vésicules extracellulaires (VE) circulantes et résidentes dans les tissus représentent des cibles prometteuses en tant que nouveaux biomarqueurs théranostiques, et elles apparaissent comme des acteurs importants dans le maintien de l’homéostasie de l’organisme et la progression d’un large éventail de maladies. Alors que les recherches actuelles se concentrent sur la caractérisation des exosomes endogènes d’origine endosomale, les microvésicules qui s’échappent de la membrane plasmique ont attiré de plus en plus d’attention dans les domaines de la santé et de la maladie, qui se caractérisent par une abondance de molécules de surface récapitulant la signature membranaire des cellules mères. Ici, une procédure reproductible est présentée basée sur la centrifugation différentielle pour extraire et caractériser les VE du plasma et des tissus solides, tels que l’os. Le protocole décrit en outre le profilage ultérieur des antigènes de surface et des cargaisons protéiques des véhicules électriques, qui sont donc traçables pour leurs dérivations et identifiés avec des composants liés à la fonction potentielle. Cette méthode sera utile pour l’analyse corrélative, fonctionnelle et mécaniste des VE dans les études biologiques, physiologiques et pathologiques.

Introduction

Des vésicules extracellulaires (VE) ont été proposées pour définir les structures extracellulaires enfermées dans la bicouche lipidique^{libérée par} les cellules 1, qui jouent un rôle important dans divers événements physiologiques et pathologiques². Les VE libérés par les cellules saines peuvent être divisés en deux catégories principales, à savoir les exosomes (ou petits VE) formés par une voie de trafic endocytaire intracellulaire³ et les microvésicules (ou gros VE) développées par le bourgeonnement vers l’extérieur de la membrane plasmique de la cellule⁴. Alors que de nom....