Stratégie pour l’étude des cellules lymphoïdes productrices d’IL-9 dans le modèle d’infection à Nippostrongylus brasiliensis

Résumé

Les cellules T et ILC2 exprimant l’IL-9 sont induites au cours de l’infection à N. brasiliensis , mais leur caractérisation a été largement négligée dans l’intestin infecté en raison de leur faible fréquence et de leur cinétique différentielle. Ce protocole décrit l’isolement de ces cellules à partir de différents organes cibles et la confirmation de leur identité par cytométrie en flux à différents stades de l’infection.

Résumé

L’IL-9 est une cytokine pléiotropique associée à divers processus, notamment l’immunité antitumorale, l’induction de pathologies allergiques et la réponse immunitaire contre les infections à helminthes, où elle joue un rôle important dans l’expulsion du parasite. Dans un modèle murin d’infection à Nippostrongylus brasiliensis, l’IL-9 est produite principalement par les lymphocytes T CD4+ et les cellules lymphoïdes innées présentes dans les poumons, l’intestin grêle et les ganglions lymphatiques drainants. Compte tenu des difficultés techniques liées à la coloration intracellulaire de l’IL-9, ainsi que de la complexité de l’isolement des cellules hématopoïétiques de l’intestin grêle lors de l’infection, il existe un besoin urgent d’un protocole complet mais simple pour analyser l’expression de l’IL-9 dans différents tissus lymphoïdes et non lymphoïdes dans ce modèle. Le protocole décrit ici décrit la cinétique de l’IL-9 produite par les lymphocytes T CD4+ et les lymphoïdes innés dans les poumons et l’intestin grêle, les principaux organes ciblés par N. brasiliensis, ainsi que dans les ganglions lymphatiques médiastinaux et mésentériques, tout au long de l’infection. En outre, il détaille le nombre de larves nécessaires à l’infection, en fonction du type de cellule et de l’organe d’intérêt. Ce protocole vise à aider à la normalisation des tests afin d’économiser du temps et des ressources en offrant la possibilité de se concentrer sur les cellules, les organes et les stades spécifiques de la maladie d’intérêt dans le modèle d’infection à N. brasiliensis.

Introduction

Les ankylostomes sont des parasites intestinaux qui infectent environ 700 millions de personnes dans le monde, principalement dans les zones tropicales des pays sous-développés. Les infections de haute intensité à Ancylostoma duodenale et Necator americanus, les parasites de l’ankylostome les plus courants chez l’homme, provoquent une anémie et une carence en protéines pouvant entraîner un retard de croissance et de développement mental¹. N. americanus et le parasite rongeur Nippostrongylus brasiliensis induisent une réponse immunitaire prototypique de type 2 chez leur hôte et partagent des similitudes dans l....

Protocole

Toutes les expériences sur les animaux décrites ici ont été approuvées par le Comité interne pour la manipulation des animaux (CICUAL) de l’Institut de physiologie cellulaire de l’Université nationale autonome du Mexique.

REMARQUE : un organigramme de l’ensemble du protocole est illustré à la figure 1.

1. Logement des souris

1. Utilisez des groupes de souris femelles ou mâles âgées de 8 à 10 semaines, hébergées dans des animaleries avec une température et une humidité constantes dans des cycles lumière/obscurité de 12 h, avec un accès ad libitum à l’e....

Résultats

Des souris ont reçu une injection sous-cutanée de 200 larves de N. brasiliensis de stade L3 ou de PBS pour des contrôles fictifs. Le nombre de larves utilisées dans ce protocole a été ajusté afin d’isoler les cellules viables des poumons, du tissu lymphoïde et de l’intestin grêle, contrairement aux rapports précédents où des charges plus élevées de vers ont été utilisées pour détecter des cellules dans les tissus lymphoïdes et les poumons seulement⁴. Les poumons, les ganglions lymphatique.......

Discussion

Une compréhension complète des interactions parasite-hôte intestinal et des réponses immunitaires à l’infection par les helminthes nécessite l’identification et l’analyse des différentes populations cellulaires et molécules effectrices qui sont essentielles pour l’induction du remodelage tissulaire et l’expulsion des vers. Les géohelminthiasies représentent un gros problème dans les pays en développement du monde entier. Cependant, jusqu’à récemment, un protocole permettant d’analyser les populations de cellules rares pr.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Tampon ACK	Cytomètre Attune
	Thermofisher
B220	Biolegend	103204
CD11b	Biolegend	101204
CD11c  ;	Biolégende	117304
CD19  ;	Biolegend	115504
CD4	Biolegend	100404
CD4 (BV421)	Biolegend	100443
CD45.2	Biolegend	109846
CD8  ;	Biolegend	100703
CD90.2	Biolegend	105314
Collagenase D	Roche	11088866001
DNAse I	Invitrogen	18068015	Activité spécifique : &ge ; 10 000 unités/mg  ;   ;   ;
Facs ARIA II trieur	BD Biosciences
FACS Trieur de cellules Melody	BD Biosciences
Fc-Block	Biolegend	101320
Fc&epsilon ; RI	eBioscience	13589885
Sérum fœtal bovin	Gibco	26140079
FlowJo	FlowJo		Logiciel d’analyse de données d’analyse de cytométrie en flux
Gr-1	Tonbo	305931
Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)	Biolegend
		514103
NK1.1& nbsp ;	Biolegend	108704
Maille en nylon	; &lrm ; lba	B07HYHHX5V
OptiPrep Density Gradient Medium	Sigma	D1556
Saline tamponnée au phosphate  ;	RPMI Gibco
	Biolegend	155512
Streptavidin	Biolegend	405206
TCR-&beta ;   ;	Biolégende	109203
TCR-&beta ; (PE/Cy7)	Biolégende	109222
TCR-&gamma ; et delta ;   ;	Biolegend	118103
Ter119	Biolegend	116204
tampon tricine  ;	Zombie fait maison
Aqua Fixable Viability Dye	Biolegend	423101

Nxt fait maison IL-9 maison 11875093 Siglec F  ;