Ici, nous présentons un protocole pour un modèle murin de perte auditive induite par le bruit (NIHL). Pour induire le NIHL, nous avons développé un nouveau dispositif simple utilisant du plastique ondulé, une cage de piège à rats et un haut-parleur. La réponse auditive du tronc cérébral et l’imagerie par immunofluorescence ont été utilisées pour évaluer la fonction auditive et les dommages aux cellules ciliées externes, respectivement.
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Article de méthode
Conditions expérimentales modifiées pour la perte auditive induite par le bruit chez la souris et évaluation de la fonction auditive et des lésions des cellules ciliées externes
Dans cet article
Résumé
Résumé
Un modèle animal de perte auditive induite par le bruit (NIHL) est utile aux pathologistes, thérapeutes, pharmacologues et chercheurs en audition pour bien comprendre le mécanisme du NIHL et ensuite optimiser les stratégies de traitement correspondantes. Cette étude vise à créer un protocole amélioré pour le développement d’un modèle murin de NIHL. Des souris mâles C57BL/6J ont été utilisées dans cette étude. Les souris non anesthésiées ont été exposées à des bruits forts (1 et 6 kHz, présentés simultanément à 115-125 dB SPL-A) en continu pendant 6 heures par jour pendant 5 jours consécutifs. La fonction auditive a été évaluée 1 jour et 1 semaine après l’exposition au bruit, en utilisant la réponse auditive du tronc cérébral (ABR). Après la mesure ABR, les souris ont été sacrifiées et leurs organes de Corti ont été collectés pour la coloration par immunofluorescence. À partir des mesures de la réponse auditive du tronc cérébral (ABR), une perte auditive importante a été observée 1 jour après l’exposition au bruit. Après 1 semaine, les seuils d’audition des souris expérimentales ont diminué à ~80 dB SPL, ce qui était encore un niveau significativement plus élevé que les souris témoins (~40 dB SPL). D’après les résultats de l’imagerie par immunofluorescence, les cellules ciliées externes (OHC) se sont révélées endommagées. En résumé, nous avons créé un modèle de NIHL en utilisant des souris mâles C57BL/6J. Un nouveau dispositif simple pour générer et délivrer un bruit sonore pur a été développé puis utilisé. Les mesures quantitatives des seuils auditifs et la confirmation morphologique des dommages causés par l’OHC ont toutes deux démontré que le bruit appliqué induisait avec succès une perte auditive attendue.
Introduction
Environ 1,3 milliard de personnes dans le monde souffrent d’une perte auditive due à l’exposition au bruit1. Dans cette étude, nous avons cherché à établir un processus clair étape par étape pour induire et confirmer la perte auditive induite par le bruit (NIHL). Le NIHL résulte d’une dégénérescence/destruction des cellules ciliées (HC) et des neurones ganglionnaires spiralés (SGN), de lésions des stéréocils HC et/ou d’une perte de synapses entre les HC internes cochléaires et les SGN. De telles anomalies peuvent également causer des acouphènes et une altération de la perception de la parole (en particulier dans un environnement acoustique comp....
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Protocole
Les expériences sur les animaux dans cette étude ont été approuvées par le Comité de protection des animaux du Mackay Medical College. Des souris mâles C57BL/6J âgées de huit semaines ont été achetées au National Laboratory Animal Center (New Taipei City, Taïwan). Toutes les souris ont été élevées et logées conformément au protocole animal standard.
1. Induction du NIHL chez la souris
- Préparer la cage pour les souris expérimentales
- Pour ce faire, utilisez une cage piège à rats de dimensions de 14 cm × 17 cm × 24 cm. Coupez quatre morceaux de planches de plastique ondulé dans des tailles appropriées, en les ....
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Résultats
Un changement dans le seuil d’audition ABR
Le seuil d’audition des souris a été mesuré à l’aide de l’ABR à éclatement de tonalité 1 jour ou 1 semaine après l’exposition au bruit. Une augmentation significative du seuil auditif aux trois fréquences testées a été observée (12 kHz : 84,29 ± 2,77 dB SPL ; 24 kHz : 91,43 ± 0,92 dB SPL ; 32 kHz : 98,57 ± 1,43 dB SPL) 1 jour après l’exposition au bruit (c.-à-d. le 6e jour). La récupération partielle de l’audition a eu lieu 1 semaine après l’exposi.......
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Discussion
Le NIHL peut être divisé en deux types: le NIHL temporaire, qui montre un décalage temporel du seuil d’audition, et le NIHL permanent, qui se caractérise par un déplacement permanent du seuil auditif. La perte auditive que nous avons observée le 6ème jour (1 jour après l’exposition au bruit) serait une combinaison de ces deux types. Dans ce cas, le seuil auditif montrerait une reprise progressive au fil du temps en raison de la composante temporelle de la perte auditive. Dans nos études expérimentales prélimin.......
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Déclarations de divulgation
Aucun conflit d’intérêts à divulguer.
Remerciements
Nous remercions les subventions du ministère de la Science et de la Technologie (MOST) du gouvernement de Taïwan (MOST 110-2314-B-715-005, MOST 111-2314-B-715-009-MY3) et les subventions de recherche intra-muros du Mackay Medical College (MMC-RD-110-1B-P030, MMC-RD-111-CF-G002-03).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| ; 1/4" CCP Set de microphones standard à champ libre | GRAS | Pour l’exposition au bruit | |
| Module d’entrée de l’amplificateur, AMI100D | BIOPAC | Pour la réponse auditive du tronc cérébral | |
| Bio-amplificateur, BIO100C | BIOPAC | Pour la réponse auditive du tronc cérébral | |
| Albumine sérique | bovine SIGMA | A9647 | Coloration par immunofluorescence |
| Logiciel | CellsensOlympus life science | Acquisition d’images | |
| ondulé | |||
| DAPI fluoromount | SouthernBiotech | 0100-20 | Coloration par immunofluorescence |
| Acide éthylènediaminetétraacétique | SIGMA | E5134 | Décalcification |
| Amplificateur de réponse évoquée, ERS100C | BIOPAC | Pour la réponse | |
| auditive du tronc cérébralFormaldéhyde | APLHA | F030410 | Fixation de la cochlée |
| Système d’acquisition de données haute performance, MP160 | BIOPAC | Pour la réponse auditive du tronc cérébral | |
| Câble d’extension modulaire, MEC110C | BIOPAC | Pour la réponse auditive du tronc cérébral | |
| Anticorps primaire Myo7A | Proteus | 25-6790 | Coloration par immunofluorescence |
| Anticorps secondaire Myo7A | Jackson immunoresearch | 711-545-152 | Coloration par immunofluorescence |
| Électrode à aiguille, unipolaire 12 mmTp, EL452 | BIOPAC | Pour la réponse auditive du tronc cérébral | |
| Anticorps contre la phalloïdine | Alexa Fluor | A12381 | Coloration par immunofluorescence |
| solution saline | tamponnée au phosphate SIGMA | P4417 | |
| Cage | 14 cm x 17 cm x 24 cm | ||
| ROMPUN- xylazine injectable, solution ; | Bayer HealthCare, LLC | ||
| Amplificateur de son, MT-1000 | unika | Pour l’exposition au bruit | |
| /Générateur de son/Analyseur/Divers, FW-02 | CLIO | 620300719 | Pour l’exposition au bruit |
| Chambre insonorisée | Technologie électroacoustique | Pour l’exposition au bruit et | |
| le haut-parleur ABR ; | électroacoustique IEA | Pour l’exposition au bruit | |
| Module de stimulation, STM100C | BIOPAC | Pour la réponse auditive du tronc cérébral | |
| Triton X-100 | SIGMA | T8787 | Coloration par immunofluorescence |
| Tubephone Set, OUT101 | BIOPAC | Pour la réponse auditive du tronc cérébral | |
| Microscope vertical, BX53 | Olympus | Acquisition d’images | |
| Zoletil | Virbac |
Références
- World Report on Hearing. World Health Organization. , Available from: https://www.who.int/publications/i/item/9789240020481 (2021).
- Fernandez, K. A., et al. Noise-induced cochlear synaptopathy with and without sensory cell loss. Neuroscience. 427, 43-57 (2020).
- Kujawa, S. G., Liberman, M. C.
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Réimpressions et autorisations
