Le présent protocole décrit une nouvelle technique de cerclage aortique chez la souris pour induire une hypertrophie cardiaque par surcharge de pression. Pour le bandage, un anneau en caoutchouc avec un diamètre intérieur fixe est utilisé. Cette nouvelle technique promet moins de variance et des données plus reproductibles pour les expériences futures.
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Article de méthode
Anneaux toriques par rapport à la constriction aortique transversale traditionnelle pour la modélisation de l’hypertrophie cardiaque induite par surcharge de pression
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le cerclage aortique chez la souris est l’un des modèles expérimentaux les plus couramment utilisés pour l’hypertrophie cardiaque induite par une surcharge de pression cardiaque et l’induction de l’insuffisance cardiaque. La technique précédemment utilisée est basée sur une suture filetée autour de l’arc aortique attachée sur une aiguille émoussée de 27 G pour créer une sténose. Cette méthode dépend du fait que le chirurgien serre manuellement le fil et, par conséquent, entraîne une grande variance de la taille du diamètre. Une méthode nouvellement affinée décrite par Melleby et al. promet moins de variance et plus de reproductibilité après la chirurgie. La nouvelle technique, le joint torique-bande aortique (ORAB), utilise un anneau en caoutchouc antidérapant au lieu d’une suture avec filetage, ce qui réduit la variation de la surcharge de pression et les phénotypes reproductibles de l’hypertrophie cardiaque. Pendant la chirurgie, le joint torique est placé entre les artères brachiocéphales et carotides gauches. Une constriction réussie est confirmée par l’échocardiographie. Après 1 jour, le placement correct de l’anneau entraîne une augmentation de la vitesse d’écoulement dans l’aorte transversale au-dessus de la sténose induite par le joint torique. Après 2 semaines, une altération de la fonction cardiaque est prouvée par une diminution de la fraction d’éjection et une augmentation de l’épaisseur de la paroi. Il est important de noter qu’en plus d’une variance moindre dans la taille du diamètre, l’ORAB est associé à des taux de mortalité per- et postopératoire plus faibles que la constriction aortique transversale (TAC). Ainsi, ORAB représente une méthode supérieure à la chirurgie TAC couramment utilisée, ce qui entraîne des résultats plus reproductibles et une réduction possible du nombre d’animaux nécessaires.
Introduction
Alors que l’hypertrophie cardiaque physiologique peut être observée pendant le développement, l’exercice et la grossesse, l’hypertrophie cardiaque pathologique répond à des conditions de stress hémodynamique telles que l’hypertension artérielle, les cardiopathies valvulaires ou les mutations génétiques. Dans un premier temps, le cœur subit un remodelage caractérisé par une augmentation de la taille des cardiomyocytes et un épaississement des parois ventriculaires pour maintenir la fonction cardiaque 1,2. D’autre part, le remodelage cardiaque pathologique est associé à un risque accru d’arythmie, de mort subite....
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Protocole
Les expérimentations animales ont été réalisées selon les principes du comité régional (Ministerium für Energiewende, Landwirtschaft, Umwelt, Natur und Digitalisierung des Landes Schleswig-Holstein, numéro d’autorisation: V242-21249/2020 [38-4/20]). Les souris utilisées pour la présente étude ont été obtenues d’une source commerciale (voir le tableau des matériaux). Les animaux ont été gardés dans des conditions standard avec un cycle de 12 h de lumière et 12 h de nuit; De l’eau et de la nourriture ont été offertes ad libitum.
1. Soins aux animaux
- Hébergez les souris dans des cages spécia....
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Résultats
Généralement, les bandes aortiques imitent la sténose aortique humaine et induisent une hypertrophie cardiaque chez la souris. Une procédure réussie est caractérisée par un remodelage du tissu cardiaque reflété par une hypertrophie cardiaque et une fonction cardiaque réduite 5,6.
Directement 1 jour après l’opération, l’effet de la constriction du joint torique de l’aorte transversale peut être déterminé in vivo par échocardiog.......
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Discussion
La bande aortique filetée/suture est utilisée depuis de nombreuses années pour induire une hypertrophie cardiaque par surcharge de pression chez la souris. Il s’agit d’une méthode établie pour étudier les mécanismes pathologiques du remodelage cardiaque et de la progression de la maladie in vivo. Les limites sont la variance relativement élevée du degré de sténose et, par conséquent, le remodelage. La technique ORAB récemment introduite décrite pour la première fois par Melleby et al.10 .......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par le Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF) à L.L., N.F., et O.J.M. (IVOLADMT-HF; FKZ 01KC2006A).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 1 x fixateurs longs, 6 cm | ; 18200-01 | ||
| 2 x Enrouleurs émoussés, 5 mm de large | 18200-11 | ||
| 2 x Fixateurs courts, 3 cm | ; 18200-02 | ||
| 2 x pince coudée à pointe fine 45° ; | FST (outils de haute performance) | 11160-10 | |
| 3 x Enrouleurs émoussés, 2,5 mm de large ; | 18200-10 | ||
| 3 x fils d’écarteur ; | 18200-05 | ||
| Suture résorbable 4-0 (Vicryl) | ETHICON | SABBKLT0 | Utilisé pour suturer la peau |
| Suture 6-0 (Prolene), taille de l’aiguille :13 mm | ETHICON | JDP879 | Utilisé pour suturer le muscle thoracique |
| Suture 8-0 (Prolene), taille de l’aiguille : 6,5 mm | ETHICON | RHBECH | Utilisé pour jeûner l’anneau ; |
| Boîte d’anesthésie, petit | appareil Havard ; | 50-0108 | |
| C57BL/6N souris | Charles River | ||
| Fluosorber Filtre à charbon actif Cartouche de cartouche | Havard appareil ; | 34-0415 | Utilisé pour induire et maintenir l’anesthésie |
| Laryngsopcope faite à la main ; | Intubationshelp | ||
| Harvard Apparatus Vaporisateur anesthésique | Appareil Havard ; | Utilisé pour induire et maintenir l’anesthésie | |
| Coussin chauffant + sonde rectale (LSI Letica Scientific Instruments :Unité de contrôle de la température HB 101/2 ) | Appareil Panlab/ Havard ; | Utilisé pour contrôler et maintenir la température corporelle | |
| canule i.v. bleue de calibre 22 (Vasofix Braunü ; le 0,9 x 25 mm) | B/Braunsharing Expertise ; | 4268091B | intubation ; |
| isofluran | Baxter | Anesthésie | |
| Kodan (solution de bétadine) | Schü ; lke | 20003960-A | Désinfection ; |
| aide à la ligature | FST (outils de sience fine) | 18062-12 | Utilisé pour effectuer la liaison avec joint torique ; |
| Eclairage de microscope : Schott VisiLED Set MC1500/S80-55 (+ contrôleur) | SCHOTT | ||
| Luminth Microscope ; appareil photo ; (Leica IC80 HD) | Leica | Utilisé pour la visualisation du champ d’opération ; | |
| Systèmes d’anesthésie complets MiniVac ; pour petits rongeurs | Appareil Havard ; | 75-0233 | Utilisé pour induire et maintenir l’anesthésie |
| Ventilateur de souris MiniVent Type 845 | Havard Apparatus ; | 73-0044 | Utilisé à la ventilation pendant la chirurgie ; |
| Porte-aiguille ; | FST (outils de performance fine) | ; TE-10804 | |
| Joint torique, caoutchouc antidérapant (0,0018 mm x 0,020 mm) | Produits en caoutchouc Apple ; | Liagtion de l’arc aortique | |
| Ciseaux | FST (outils de simulation fins) | 14040-09 | Utilisé pour couper la peau et les fils ; |
| Système de rétraction pour petits animaux (kit pour animaux jusqu’à 200 g) | FST (outils de mesure fine) | 18200-20 | |
| Petite plaque de base, 20 x 30 cm ; | ; 18200-03 | ||
| Table équipée d’un coussin chauffant + d’une sonde rectale + d’un trépied ECG et ; d’un transducteur | d’imagerie FujiFilm Visual Sonics Echocardiographie | ; | |
| Temgesic (Buprénorphine) | Indivior UK Limited | 997.00.00 | Douleur pré-médication ; |
| coq d’arrêt à trois voies (bleu) | |||
| Tramal (Tamadol) | Grü ; Douleur mentale | après la médication ; | |
| sonde de transducteur MS400 (Visual Sonics) ; | d’imagerie FujiFilm Visual Sonics | Échocardiographie ; | |
| Système d’échographie avec cardiolige package ; | d’imagerie FujiFilm Visual Sonics | Échocardiographie ; | |
| Ciseaux à ressort Vannas - 2,5 mm Tranchant | FST (outils de sience fine) | 15000-08 | Utilisé pour couper le muscle intercostal de la poitrine ; |
| pommade vétérinaire ; | Bepanten | Utilisé pour prévenir le dessèchement des yeux |
Références
- Frey, N., Olson, E. N. Cardiac hypertrophy: The good, the bad, and the ugly. Annual Review of Physiology. 65, 45-79 (2003).
- Bui, A. L., Horwich, T. B., Fonarow, G. C. Epidemiology and risk profile of heart failure. Nature Reviews Cardiology. 8 (1), 30-41 ....
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Réimpressions et autorisations
