Greffe de semis évolutive, flexible et rentable

Résumé

Ce protocole décrit une méthode de greffe de plantules robuste qui ne nécessite aucune expérience ou formation préalable et peut être exécutée à très faible coût en utilisant des matériaux facilement accessibles dans la plupart des laboratoires de biologie moléculaire.

Résumé

La greffe de semis à un stade précoce est devenue un outil populaire en génétique moléculaire pour étudier les relations racine-pousse au sein des plantes. La greffe de semis à un stade précoce de la petite plante modèle, Arabidopsis thaliana, est techniquement difficile et prend beaucoup de temps en raison de la taille et de la fragilité de ses semis. Une collection croissante de méthodes publiées décrivent cette technique avec des taux de réussite, des difficultés et des coûts associés variables. Cet article décrit une procédure simple pour fabriquer un dispositif de greffage réutilisable interne à l’aide d’un mélange d’élastomère de silicone, et comment utiliser ce dispositif pour la greffe de semis. Au moment de la présente publication, la production de chaque dispositif de greffe réutilisable ne coûte que 0,47 $ en matériaux consommables. En utilisant cette méthode, les débutants peuvent avoir leurs premiers plants greffés avec succès en moins de 3 semaines du début à la fin. Cette procédure hautement accessible permettra aux laboratoires de génétique moléculaire des plantes d’établir la greffe de semis comme une partie normale de leur processus expérimental. En raison du contrôle total que les utilisateurs ont dans la création et la conception de ces dispositifs de greffe, cette technique pourrait être facilement ajustée pour une utilisation dans des plantes plus grandes, telles que la tomate ou le tabac, si désiré.

Introduction

Le greffage est une technique horticole ancienne qui est devenue une pratique agricole établie en 500 avant notre ère¹. La greffe de différentes variétés de plantes cultivées pour améliorer les rendements a été la première utilisation de cette technique et continue d’être utilisée à cette fin aujourd’hui. Au cours de la dernière décennie, la greffe a attiré de plus en plus l’attention en tant qu’outil permettant aux biologistes moléculaires d’étudier la signalisation à longue distance chez les plantes 2,3,4,5. Bien qu....

Protocole

1. Préparation de l’appareil

1. Fabriquer le dispositif de greffe de silicone en coulant une solution d’élastomère de silicone dans une boîte de Petri carrée (100 mm x 100 mm). Préparer 15 mL de la solution élastomère en suivant les directives du fabricant.
   REMARQUE: Les kits d’élastomère de silicone comprennent généralement un liquide à base de silicone et un agent de durcissement qui, lorsqu’ils sont mélangés, permettent au silicone de se solidifier.
2. Préparez la boîte de Petri carrée en déposant quatre morceaux droits de fil de 29 G dans la boîte de Petri carrée, équidistants les uns des autres (Figure 1A). Assur....

Résultats

Divers aspects de la conception de la bandelette de greffe ont été testés afin d’identifier les conditions de greffe optimales qui nécessitaient le moins de compétences techniques (tableau 1). Tous les essais de greffe ont été réalisés sur un milieu de SEP à 0,5 %, qui a déjà été signalé comme un milieu de greffe idéal^11,12.

La croissance optimale des plantules ne peut pas être obtenue avec la germination sur b.......

Discussion

Résumé et importance
La formation d’une union de greffe est cruciale pour une greffe réussie, qui nécessite un contact direct et non perturbé entre le porte-greffe et le greffon. La taille miniature et la fragilité des semis de petites plantes telles qu’Arabidopsis rendent techniquement difficile de répondre à cette exigence. Une technique développée dans les premières méthodes de greffe de plantules d’Arabidopsis consistait à insérer à la fois le greffon et le porte-greffe dans un c.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Tubes coniques de 15 mL	VWR International Inc	10026-076
ACETONE (HPLC & 4 L	VWR	BJAH010-4
BactoAgar	Sigma	A1296-500g
Dow SYLGARD 184 Silicone Encapsulant Clear 0,5 kg Kit	Dow	2646340
D-Saccharose (biologie moléculaire), 1 kg	Fisher Scientific	BP220-1
Eppendorf Snap-Cap Microcentrifuge Flex-Tube Tubes (1,5 mL), paquet de 500	Fisher Scientific	20901-551 / 05-402
Fisherbrand Poignée de scalpel de haute précision #4	Fisher Scientific	12-000-164
Fisherbrand Ruban autoclave sans plomb	Fisher Scientific	15-901-111
Boîtes de Pétri carrées Fisherbrand	Fisher Scientific	FB0875711A
Leica Zoom 2000 Microscope stéréoscopique	Central	L-Z2000
Ruban Micropore	3M	B0082A9FEM
Murashige et Skoog Basal Medium	Sigma	M5519-10L
Parafilm	Genesee Scientific	16-101
hydroxyde de potassium	VWR International Inc	AA13451-36
Redi-earth Plug and Seedling Mix	Sun Gro Horticulture	SUN239274728CFLP
Scotts Osmocote Plus	Hummert International	7630600
Conception chirurgicale n° 22 Lame de scalpel en carbone	Fisher Scientific	22-079-697
Tween 20, 500 mL	Fisher Scientific	BP337500
PINCE à épiler DUMONT STYL55 DUMOXEL POLS 110 MM	VWR	102091-580